譚莉莉 魏亞飛 張 燁 魏亞寧

(河北大學(xué)附屬醫(yī)院，河北 保定 071000)

胃癌的病因及發(fā)病機(jī)制尚不清晰，以致缺乏有效的臨床干預(yù)措施及策略〔1,2〕。本研究擬以癌基因AKT2以及抑癌基因張力蛋白同源、第10號染色體丟失的磷酸酶基因 (PTEN)為切入點，通過檢測二者在胃癌組織、正常胃組織以及萎縮性胃炎組織中的不同表達(dá)，探討其在胃癌發(fā)病中的意義。

1 對象和方法

1.1研究對象 選擇2011年3月至2013年3月在我院外科進(jìn)行手術(shù)治療且經(jīng)病理證實的原發(fā)性胃癌患者68例，男41例，女27例；年齡23～75〔平均(56.8±2.7)〕歲；腫瘤分化程度：未分化癌 8例，低分化癌24例，中分化癌26例，高分化癌10例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有轉(zhuǎn)移38例，無轉(zhuǎn)移30例；病理分類：腺癌58例，黏液細(xì)胞癌6例，印戒細(xì)胞癌4例；癌癥分期：根據(jù)2010年美國癌癥聯(lián)合委員會公布的胃癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ、Ⅱ期39例，Ⅲ、Ⅳ期29例。所有患者術(shù)前均未行放、化療者，術(shù)中取所有患者胃癌組織以及18例患者的癌旁正常組織標(biāo)本(距腫瘤邊緣>5 cm)為研究對象。同時，取我院消化科收治的42例萎縮性胃炎的胃鏡活檢標(biāo)本進(jìn)行對照研究。

1.2研究方法 試劑：兔抗人AKT2單克隆抗體，購自美國 Cell Signaling Technology 公司；鼠抗人PTEN單克隆抗體，購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司；通用型免疫組化(SP)試劑盒、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒以及蘇木紫體細(xì)胞快速染色液均購自北京中杉生物技術(shù)有限公司。采用SP法分別檢測胃癌組織、癌旁正常組織以及萎縮性胃炎組織中的AKT2和PTEN蛋白表達(dá)情況，具體步驟按照試劑盒說明書進(jìn)行，選用已知陽性胃癌切片作為陽性對照組，采用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗做陰性對照。

1.3結(jié)果判定 本研究中切片染色結(jié)果均由我院病理科經(jīng)驗豐富的同一位醫(yī)師進(jìn)行評估，所有結(jié)果均采用奧林巴斯光學(xué)顯微鏡，其中AKT2陽性染色主要定位于細(xì)胞質(zhì)，為棕黃色顆粒；PTEN染色定位在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，為棕黃色、棕褐色顆粒，結(jié)果參照Dummler等〔3〕研究中，隨機(jī)選擇10個高倍鏡視野，每個視野計數(shù)100個細(xì)胞，根據(jù)染色細(xì)胞所占比例進(jìn)行分級，最終計算陽性細(xì)胞的百分率，其中百分率<10％為陰性(-)；百分率≥10％為陽性，分為(+)、()、()三個等級。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0軟件行χ2檢驗，兩者之間的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1AKT-2在不同組織中的表達(dá) 胃癌組織與萎縮性胃炎組織中AKT-2陽性率高于癌旁正常組織(P<0.01)；胃癌組織中AKT-2陽性率亦明顯高于萎縮性胃炎組織(P<0.05)。見表1。

2.2PTEN在不同組織中的表達(dá) 胃癌組織與萎縮性胃炎組織中PTEN陽性率低于癌旁正常組織(P<0.01)；胃癌組織中PTEN陽性率亦低于萎縮性胃炎組織(P<0.01)。見表2。

2.3AKT2、PTEN表達(dá)與胃癌患者臨床病理因素的關(guān)系 AKT2、PTEN的表達(dá)與腫瘤分化程度、有無淋巴轉(zhuǎn)移及臨床分期具有相關(guān)性(P<0.05)，而與性別、年齡不具有相關(guān)性(P>0.05)。見表3。

表1 AKT-2在不同組織中的表達(dá)比較(n)

表2 PTEN在不同組織中的表達(dá)比較(n)

表3 AKT2、PTEN表達(dá)與胃癌患者臨床病理因素的關(guān)系

2.4胃癌患者中AKT2、PTEN表達(dá)的相關(guān)性 胃癌組織中PTEN和AKT2蛋白表達(dá)強(qiáng)度呈明顯負(fù)相關(guān)(r=-0.349，P<0.05)，胃癌組織中AKT2表達(dá)愈強(qiáng)，PTEN蛋白表達(dá)就愈弱。

3 討 論

已有研究證實，胃癌的發(fā)病是一種在多基因與多表觀遺傳事件共同作用下的復(fù)雜過程，并與多種癌基因的激活及抑癌基因的異常表達(dá)有關(guān)，正常組織獲得惡性表型需要兩類基因，即：原癌基因激活和(或)抑癌基因突變失活以及DNA錯配修復(fù)基因造成的不穩(wěn)定性共同改變逐漸積累而成〔4〕，而AKT2作為原癌基因，是絲氨酸/蘇氨酸激酶(AKT)的亞型之一，可誘發(fā)細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，其作為信號傳導(dǎo)通路PI3K/AKT的重要組成部分，與腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，主要表現(xiàn)在其可對于腫瘤細(xì)胞的惡性增殖、血管生成和轉(zhuǎn)移以及對放化療拮抗發(fā)揮重要作用〔5〕。國內(nèi)外研究證實，可在人類腫瘤組織中較多的檢測到該基因擴(kuò)增和過度表達(dá)，主要可能與其通過調(diào)節(jié)β1-整合素以及基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-2、9蛋白表達(dá)，加速腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，從而促使小鼠成纖維細(xì)胞株(NIH3T3)細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化有關(guān)〔6，7〕。

迄今為止，PTEN是被發(fā)現(xiàn)的第1個具有磷酸酶活性的抑癌基因，該基因既可以通過拮抗PI3K/AKT信號傳導(dǎo)通路，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期進(jìn)程和凋亡而影響細(xì)胞生長，也可以通過其本身具有的蛋白酪氨酸磷酸酶活性，作用于黏著斑激酶(FAK)等，進(jìn)而達(dá)到調(diào)控細(xì)胞黏附、遷移，從而發(fā)揮促分裂原活化蛋白(MAPK)途徑抑制細(xì)胞分化的功效〔8〕。故而探討其上述兩指標(biāo)在胃癌中的表達(dá)及相關(guān)性，或?qū)υ缙谠\斷胃癌有所裨益。

本研究結(jié)果顯示，在腫瘤的惡性增殖和侵襲轉(zhuǎn)移中與AKT2的表達(dá)水平和激酶活性具有相關(guān)性，該指標(biāo)是判斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的重要標(biāo)志；而PTEN在低未分化胃癌的表達(dá)率低于高中分化胃癌，說明PTEN的缺失率隨著腫瘤惡性程度的增加而增加，其缺失貫穿于胃癌的整個發(fā)生與發(fā)展過程之中。同時，本研究證實了PTEN對于AKT通路的負(fù)性調(diào)控機(jī)制〔9〕，具體為PTEN蛋白的失活可能導(dǎo)致AKT2喪失其調(diào)節(jié)能力，從而無法對細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化和增殖發(fā)揮作用，誘發(fā)胃癌。

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