施純禮 吳麗賢

(福建醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院，福建 福州 350000)

幽門螺桿菌(HP)感染是引起胃潰瘍的重要因素，根治HP是治療胃潰瘍及預防潰瘍復發(fā)的重要手段，此外，根治HP還能降低慢性胃炎患者胃癌發(fā)生率〔1〕。三聯(lián)療法是目前治療HP的常用方法，但隨著三聯(lián)療法在臨床上廣泛應用，使得HP耐藥性呈上升趨勢，從而影響治療效果〔2〕。近年相關研究指出〔3〕，多耐藥基因(MDR)可影響藥物轉運，增強致病菌耐藥性，同時還可參與代謝物在細胞膜間的轉運，影響機體正常生理代謝，從而降低藥物治療效果。本文將分析MDR1 C3435T基因多態(tài)性對HP陽性胃潰瘍患者三聯(lián)療法治療效果的影響。

1 資料及方法

1.1對象 2012年1月至2014年1月選取80例胃潰瘍患者為研究對象，入組標準：(1)所有患者經(jīng)胃鏡證實為胃潰瘍；(2)所有患者經(jīng)快速尿素酶實驗證實HP陽性；(3)均簽署知情同意書，自愿參與研究；(4)無肝腎功能不全等疾?。?5)無對三聯(lián)療法過敏的患者；(6)患者治療前未接受過任何抗菌藥物治療；(7)均為非妊娠期或哺乳期患者。80例患者中男42例，女38例，年齡24～68歲，平均(45.32±2.98)歲，病程3個月～12年，平均(3.85±2.10)年。選取80例非HP胃潰瘍患者為對照1組，患者經(jīng)快速尿素酶實驗證實HP陰性，其余納入標準與觀察組相同，男40例，女40例，年齡22～70歲，平均(46.32±2.58)歲，病程3個月～10年，平均(3.75±2.11)年。另選取80例正常健康體檢者為對照2組，經(jīng)各項檢查證實機體健康狀況良好，男38例，女42例，年齡22～70歲，平均(47.32±2.51)歲。三組患者性別、年齡無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1MDR1 C3435T基因多態(tài)性測定 空腹抽取各組靜脈血3 ml，經(jīng)離心處理后留取上清液，采用乙二胺四乙酸二鉀抗凝全血標本，采用日本TOYOBO磁珠法DNA提取試劑盒提取DNA，操作過程嚴格按照試劑盒說明進行，將DNA標本置入-80℃冰箱中保存。DNA引物由北京天一生物技術公司提供。DNA探針(5’-TGCAGCAGATTGGTCCTGAAATAGTA-3’)由北京賽百盛生物技術公司提供。rs505922基因點突變擴增片段長度為164 bp，分別在突變型及野生型引物上游3'端-2位置引入錯配堿基“G”(突變引物：5’-GAGCCAAGACTTGTCCCCGG-3’,野生引物：5’-GAGCCAAGACTTGTCCCCGA-3’)。反應條件：先在42℃反向轉錄30 min,隨后將溫度變?yōu)?5℃將DNA變性2 min，然后于55℃中15 s、72℃中30 s以及95℃中30 s反復循環(huán)擴增，并在退火階段收集熒光信號。采用熒光定量PCR儀測定TapMan探針上的FAM熒光信號。等位基因頻率=(2×純合子+雜合子)/(2×受體人數(shù))。按照Hardy-Weinberg平衡法對群體代表樣本進行分析。

1.2.2HP陽性胃潰瘍治療方法 觀察組患者給予三聯(lián)療法治療：蘭索拉唑30 mg/次，2次/d；阿莫西林1 000 mg/次，2次/d；克拉霉素500 mg/次，2次/d，持續(xù)用藥14 d，治療結束后經(jīng)快速尿素酶實驗對患者HP陽性情況進行測定。同時對患者進行藥敏性試驗，觀察不同基因型HP陽性胃潰瘍患者HP耐藥情況，藥敏試驗試劑盒由美國Sigma公司提供，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.3統(tǒng)計學分析 采用SPSS17.0軟件行χ2檢驗。

2 結 果

2.1不同組別患者MDR1 C3435T基因比例 與對照1組及對照2組相比，觀察組患者TT型MDR1 C3435T基因比例顯著高于對照組，T等位基因頻率高于對照1組及對照2組(P<0.05)。與對照2組相比，對照1組患者CT型、TT型MDR1 C3435T基因比例及T等位基因頻率較高(P<0.05)。見表1。

表1 不同組別患者MDR1 C3435T基因比例〔n(％),n=80〕

2.2HP陽性胃潰瘍患者不同基因型對抗HP治療效果的影響 觀察組患者中TT基因型患者經(jīng)三聯(lián)療法治療后HP陽性率及耐藥率較高(P<0.05)，見表2。

表2 HP陽性胃潰瘍患者基因型對抗HP治療效果的影響〔n(％)〕

3 討 論

MDR1基因位于人體第7號染色體上，其編碼的P-糖蛋白屬于ABC蛋白家族的一員。P-糖蛋白具有調(diào)節(jié)細胞跨膜運動及物質轉運的功能，可將藥物從細胞內(nèi)轉移至細胞外，從而降低細胞內(nèi)藥物濃度，使細胞獲得耐藥性〔4〕。P-糖蛋白不僅可在正常組織中表達，同時也可在腫瘤組織中表達，并發(fā)揮不同的生理功能。MDR1基因多態(tài)性可影響P-糖蛋白表達水平，從而影響物質代謝及機體藥代動力學水平。相關研究指出〔5〕，P-糖蛋白在細胞內(nèi)可作為細胞底物，在體內(nèi)藥物處置、轉運及吸收過程中發(fā)揮重要作用，從而影響這些藥物在胃腸道中的吸收及腎臟中的排泄。同時，MDR1基因多態(tài)性可影響P-糖蛋白生理學特征，導致P-糖蛋白在機體中過表達，導致機體正常生理代謝水平受影響，并引起各種疾病。謝偉東〔6〕認為MDR1基因多態(tài)性可導致P-糖蛋白生理活性發(fā)生變化，從而增加機體耐藥性。

本研究結果顯示，在HP陽性胃潰瘍患者體內(nèi)MDR1 C3435基因發(fā)生顯著突變，且這種突變可增強機體耐藥性，影響抗HP治療的效果。研究認為〔7〕，引起機體基因突變的因素較多，包括環(huán)境、機體自身免疫失衡及微生物等，當機體感染HP后，體內(nèi)抗原反應增強，從而促進機體大量釋放各種炎癥因子及細胞因子，并導致機體出現(xiàn)級聯(lián)反應，從而進一步加強炎癥反應，使得機體免疫系統(tǒng)失衡，并引起機體一系列的病理生理變化，而基因突變就是其中一種。錢春野等〔8〕采用PCR測定不同基因型胃潰瘍患者MDR基因多態(tài)性，結果顯示HP陽性胃潰瘍患者TT基因型比例較高，且患者胃癌發(fā)生率較高，本研究結果與錢春野等〔8〕研究結果一致，表明MDR1 C3435T基因型可影響HP陽性胃潰瘍患者三聯(lián)療法治療效果。

4 參考文獻

1張宇光,孫艷蓀,周曉初，等.多藥耐藥基因1 C3435T基因多態(tài)性對胃潰瘍患者抗幽門螺桿菌治療的影響〔J〕.中國醫(yī)師進修雜志,2013;36(19):4-6.

2張宇光,孫艷蓀,周曉初,等.CYP2C19基因多態(tài)性對胃潰瘍患者抗Hp治療的影響〔J〕.成都醫(yī)學院學報,2013;8(3):310-2.

3段智慧,常曉悅.MDR1基因C3435T單核苷酸多態(tài)性研究進展〔J〕.國際呼吸雜志,2012;32(23):1821-4.

4胡秀學,趙 穎,杜漢芳,等.MDR1基因在胃癌組織中的表達及意義〔J〕.現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志,2012;27(1):79-81.

5王紅兵,陳衛(wèi)昌.胃癌患者外周血與胃癌組織中ERCC1基因甲基化的關系及其意義〔J〕.中國癌癥雜志,2013;(11):900-3.

6謝偉東.根除幽門螺旋桿菌治療對消化性潰瘍患者血清胃泌素及胃泌素基因表達水平的影響研究〔J〕.吉林醫(yī)學,2013;34(31):6532-3.

7徐小琴.根除幽門螺桿菌治療對消化性潰瘍患者血清胃泌素及胃泌素基因表達水平的影響研究〔J〕.河北醫(yī)學,2013;19(3):339-41.

8錢春野,楊留才,周 娟,等.hPOT1基因表達與胃癌發(fā)生發(fā)展的相關性〔J〕.江蘇醫(yī)藥,2012;38(21):2549-51.