馬春林 謝娟娟 宋旭津 陳 清 蘇 莉 古 聯(lián)

(廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣西 南寧 530023)

缺血性腦卒中是一種多基因復(fù)雜疾病，而血脂異常是缺血性腦卒中最常見的危險因素之一，全基因組關(guān)聯(lián)研究(GWAS)發(fā)現(xiàn)染色體12p13上NINJ2基因附近的遺傳多態(tài)性rs12425791與缺血性腦卒中的關(guān)聯(lián)達到GWAS顯著性水準〔1〕。rs12425791被認為是很有希望的缺血性腦卒中的易感遺傳變異。本研究旨在分析GWAS支持的遺傳變異rs12425791與老年人血脂代謝的相關(guān)性。

1 對象與方法

1.1對象 2009年7月至2011年6月期間，在廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院體檢中心進行健康體檢的60歲以上老年人，共143例。其中，男102例、女41例，平均年齡(70.32±8.56)歲。排除有腦卒中、腦動脈瘤、阿爾茨海默病、癡呆、帕金森病等神經(jīng)精神疾病病史者。研究對象均知情同意，無親緣關(guān)系。經(jīng)HWE檢驗rs12425791基因型在143例老年體檢者的頻數(shù)分布符合HarDY-Weinberg平衡定律(P>0.05)，說明所應(yīng)用的抽樣群體適合于遺傳分析。

1.2標本采集及血脂檢測 于體檢當日上午空腹抽取外周血液標本5 ml，分為抗凝血和非抗凝血?？鼓糜?4℃保存，并于3 d內(nèi)提取血液基因組DNA。將非抗凝管血進行血脂水平檢測，采用日立 7600全自動生化分析儀來檢測血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL)水平。血脂異常：根據(jù)中國成人血脂異常診斷標準〔2〕，TC≥6.22 mmol/L為TC升高，TG≥2.26 mmol/L為TG升高，LDL≥4.14 mmol/ L為LDL升高，HDL<1.04 mmol/L為HDL降低。

1.3DNA提取及基因分型 采用天根科技(北京)有限公司生產(chǎn)的血液基因組DNA提取試劑盒〔TIANamp Blood DNA Kit(離心柱形)〕提取血液基因組DNA，試劑盒目錄號為DP318DNA，按照產(chǎn)品說明書所述步驟提取血液基因組DNA。將提取后的DNA分裝為3管，置于-20℃保存?zhèn)溆谩Ｊ褂妹绹鴳?yīng)用生物系統(tǒng)(ABI) 公司生產(chǎn)的ABI7500 Fast 實時熒光定量PCR儀TaqMan SNP基因分型試劑盒〔試劑盒包括2×通用PCR預(yù)混試劑Universal PCR Master mix (無AmpErase UNG酶)，40×SNP 基因分型試劑Genotyping Assay Mix〕，運用TaqMan MGB探針等位基因分型技術(shù)進行rs12425791遺傳多態(tài)性的基因分型。PCR反應(yīng)體系的總體積為10 μl，包含：基因組DNA，1.00 μl ；無核酸H2O，3.75 μl；Assay-on-Demand SNP Genotyping Assay Mix(40×)，0.25 μl；2×TaqMan Universal PCR Mix，5.00 μl。PCR反應(yīng)條件為：預(yù)變性95℃ 10 min，變性92℃ 15 s、退火60℃ 1 min，變性以及退火程序循環(huán)43次。對實驗操作者進行設(shè)盲，使其在進行基因分型實驗操作時不知道標本的病例/對照狀態(tài)；每次96孔PCR反應(yīng)板均設(shè)置2個空白對照、并設(shè)置3個隨機重復(fù)樣本作為陽性對照；隨機抽取總檢測樣本的5％做盲法重復(fù)測定，測定結(jié)果一致率達100％。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 運用SPSS16.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，組間比較行χ2和t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1不同rs12425791基因型老年人的血脂水平比較 G/G基因型攜帶者與(G/A+A/A)組在TC、TG、LDL、HDL水平上的分布差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.050)；G等位基因攜帶者與A等位基因攜帶者在TC、TG、LDL、HDL水平上的差異也均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.050)。見表1。

2.2不同rs12425791等位基因老年人血脂異常比較 G/G基因型攜帶者與(G/A+A/A)組在TC升高、TG升高、LDL升高、HDL降低異常率上的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.050)；G等位基因攜帶者與A等位基因攜帶者在TC升高、TG升高、LDL升高、HDL降低異常率上的差異也均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.050)。見表2。

表1 不同rs12425791基因型、等位基因老年人血脂水平比較

表2 不同rs12425791基因型、等位基因老年人血脂異常率比較〔n(％)〕

3 討 論

多年來，國內(nèi)外學(xué)者進行了有關(guān)易感基因遺傳多態(tài)性與血脂異常的相關(guān)性，以探討遺傳因素對血脂異常的影響。近期Kornfeld等〔3〕報道在非糖尿病人群中STAT5B基因的遺傳變異rs8082391和rs8064638與血清TC和LDL水平顯著關(guān)聯(lián)，Kiyomi等〔4〕報道APOA4基因360Hs等位基因與TG升高和HDL降低發(fā)生率顯著關(guān)聯(lián)；而國內(nèi)張明明等〔5〕報道固醇酯轉(zhuǎn)運蛋白(CETP)基因D442G突變與高膽固醇血癥顯著相關(guān)，而何美霞等〔6〕報道IL-6 -634 CG及GG 基因型和G 等位基因攜帶者具有高脂血癥易感性。

近兩年來，各國學(xué)者進行了多個有關(guān)于rs12425791遺傳多態(tài)性與缺血性腦卒中的關(guān)聯(lián)研究，但研究結(jié)果不一致〔7～9〕。NINJ2基因編碼ninjurin2蛋白，ninjurin2是一種嗜同種的與基質(zhì)金屬蛋白酶相互作用的細胞-細胞黏附分子〔10〕，在人類骨髓、外周白細胞、肺和淋巴結(jié)中高表達，但目前NINJ2基因?qū)θ毖阅X卒中的功能作用在很大程度上仍是不清楚的，NINJ2基因遺傳變異作用于缺血性腦卒中的功能機制值得探索。本文探索NINJ2基因附近的遺傳變異rs12425791與缺血性腦卒中危險因素的相關(guān)性，而rs12425791與血脂代謝的數(shù)量性狀和質(zhì)量性狀的相關(guān)性研究目前尚未見文獻報道，本研究表明染色體12p13上的遺傳變異rs12425791與血脂代謝的數(shù)量性狀和質(zhì)量性狀均無顯著關(guān)聯(lián)。本研究提示，rs12425791遺傳多態(tài)性可能與血脂代謝無關(guān)聯(lián)，NINJ2基因可能不是通過影響血脂代謝來作用于缺血性腦卒中的病因機制的，但還有待于更大樣本量的同類研究來驗證。

4 參考文獻

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3Kornfeld JW，Isaacs A，Vitart V,etal.Variants in STAT5B associate with serum TC and LDL-C levels〔J〕.J Clin Endocrinol Metab，2011；96(9):E1496-501.

4Kiyomi V，Bsc O，Suchi E,etal.APOA4 polymorphism as a risk factor for unfavorable lipid serum profile and depression：a cross-sectional study〔J〕.J Invest Med,2011；59(6):966-70.

5張明明，帖彥青，馬 倩，等.CETP基因D442G突變與高膽固醇血癥的相關(guān)性.中國老年學(xué)雜志，2011；31(14)：2621-4.

6何美霞，張明明，劉 瓊，等.白細胞介素-6基因多態(tài)性與高脂血癥的相關(guān)性〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2011；1：23-5.

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9Ding H，Tu X，Xu Y,etal.No evidence for association of 12p13 SNPs rs11833579 and rs12425791 within NINJ2 gene with ischemic stroke in Chinese Han population〔J〕.Atherosclerosis,2011；216(2):381-2.

10Zhang S，Dailey GM，Kwan E,etal.An MMP liberates the Ninjurin A ectodomain to signal a loss of cell adhesion〔J〕.Genes Dev,2006；20(14):1899-910.