王曉東 陳善成 楊俊保

(暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)外科，廣東 廣州 510000)

熱休克蛋白70(HSP70)普遍存在于生物細(xì)胞內(nèi)，在細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育、分化以及基因轉(zhuǎn)錄等方面均起著核心作用〔1〕。實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)〔2〕，HSP70的主要生物學(xué)功能在于應(yīng)激狀態(tài)下保護(hù)細(xì)胞生命活動(dòng)必要的蛋白質(zhì)，維持細(xì)胞的生存。此外，HSP70臨床上還可以作為腫瘤標(biāo)志物，在腫瘤免疫中發(fā)揮重要的作用〔3〕。膠質(zhì)細(xì)胞瘤屬于中樞神經(jīng)系統(tǒng)較為多見的原發(fā)性腫瘤，由于其復(fù)發(fā)率較高，預(yù)后往往不佳。筆者通過(guò)檢測(cè)膠質(zhì)細(xì)胞瘤組織中HSP70的表達(dá)，試圖闡述HSP70與膠質(zhì)細(xì)胞瘤病理分級(jí)間的相關(guān)性，同時(shí)分析腫瘤復(fù)發(fā)對(duì)HSP70表達(dá)的影響。

1 材料與方法

1.1一般材料 納入膠質(zhì)細(xì)胞瘤組織樣本50例，均為2010年1月至2013年1月于我院進(jìn)行膠質(zhì)細(xì)胞瘤切除手術(shù)患者的存檔標(biāo)本。年齡62～84〔平均(66.2±11.2)〕歲，男33例，女17例。根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)2000年頒布的神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類和分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ級(jí)9例、Ⅱ級(jí)12例、Ⅲ級(jí)13例、Ⅳ級(jí)16例。局部復(fù)發(fā)患者21例，無(wú)復(fù)發(fā)患者29例。

1.2主要試劑 鼠抗人HSP70單抗，購(gòu)于美國(guó)Santa Cruz公司；SP免疫組化試劑盒，購(gòu)于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；3%過(guò)氧化氫；DAB等。

1.3免疫組化檢測(cè) 采用免疫組化SP法進(jìn)行HSP70蛋白的測(cè)定，操作按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。免疫組化檢測(cè)分別設(shè)立陽(yáng)性以及陰性對(duì)照組。以細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒作為陽(yáng)性細(xì)胞，將陽(yáng)性細(xì)胞比例與顯色強(qiáng)度相結(jié)合判斷，觀察每張切片，以高倍視野(40×)計(jì)數(shù)1 000個(gè)細(xì)胞。(-)：陽(yáng)性細(xì)胞<5%；(+)：陽(yáng)性細(xì)胞5%～50%；()陽(yáng)性細(xì)胞>50%。

2 結(jié) 果

2.1HSP70在膠質(zhì)細(xì)胞瘤各病理分級(jí)中的陽(yáng)性表達(dá)比較 Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)、Ⅳ級(jí)膠質(zhì)細(xì)胞瘤中HSP70陽(yáng)性表達(dá)率分別為33.33%、66.67%、84.62%、100.00%。χ2檢驗(yàn)顯示各級(jí)膠質(zhì)瘤間HSP70陽(yáng)性表達(dá)有顯著差異(χ2=8.699，P<0.05),見表1。

2.2HSP70在膠質(zhì)細(xì)胞瘤局部復(fù)發(fā)組與無(wú)復(fù)發(fā)組中的陽(yáng)性表達(dá)比較 HSP70在膠質(zhì)細(xì)胞瘤局部復(fù)發(fā)組與無(wú)復(fù)發(fā)組中的陽(yáng)性率分別為87.50%、55.56%，無(wú)差異(χ2=5.520，P>0.05)，見表2。

表1 HSP70在膠質(zhì)細(xì)胞瘤各病理分級(jí)中的陽(yáng)性表達(dá)比較(n)

2.3HSP70對(duì)膠質(zhì)細(xì)胞瘤局部復(fù)發(fā)時(shí)間及1年死亡率的影響 結(jié)果表明，HSP70陽(yáng)性患者復(fù)發(fā)時(shí)間〔(5.13±0.97)個(gè)月〕明顯早于HSP70陰性患者〔(8.34±1.04)個(gè)月〕(t=5.264，P<0.05)。1年死亡率方面，HSP70陽(yáng)性患者為65.79%，HSP70陰性患者為16.67%，組間差異顯著(χ2=5.115，P<0.05)。

表2 HSP70在膠質(zhì)細(xì)胞瘤局部復(fù)發(fā)組與無(wú)復(fù)發(fā)組中的陽(yáng)性表達(dá)比較(n)

3 討 論

膠質(zhì)細(xì)胞瘤是臨床常見的顱內(nèi)腫瘤類型，約占顱內(nèi)腫瘤的45%〔4〕。膠質(zhì)細(xì)胞瘤主要侵襲中樞神經(jīng)系統(tǒng)白質(zhì)與灰質(zhì)的膠質(zhì)細(xì)胞，嚴(yán)重危害人類生命〔5〕。目前的研究表明〔6，7〕，膠質(zhì)細(xì)胞瘤具有無(wú)限增殖與抗細(xì)胞凋亡兩個(gè)主要特點(diǎn)，因此在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中，腫瘤細(xì)胞密度逐漸上升，核分裂象增加，細(xì)胞異型性改變顯著。膠質(zhì)細(xì)胞瘤分子生物學(xué)改變涉及多種癌基因的異常激活、擴(kuò)增以及高表達(dá)等，抑癌基因的突變、失活以及細(xì)胞周期基因與凋亡相關(guān)基因的異常表達(dá)〔8，9〕。

HSP70蛋白家族屬于HSPs中最保守及最主要的一類蛋白，目前的實(shí)驗(yàn)表明〔10〕，HSP70擁有分子伴侶樣的作用。實(shí)驗(yàn)研究證明〔11〕，HSP70可以通過(guò)抑制多種凋亡通路起到抑制細(xì)胞凋亡的效果。因此，HSP70對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)以及增殖起到顯著的保護(hù)作用。本研究發(fā)現(xiàn)隨著腫瘤分級(jí)的逐步提升，腫瘤惡性化程度的逐步越高，HSP70的陽(yáng)性表達(dá)亦出現(xiàn)逐步升高的趨勢(shì)，說(shuō)明HSP70與膠質(zhì)細(xì)胞瘤的分化程度存在較大的關(guān)系〔12〕。因此，檢測(cè)HSP70可以預(yù)測(cè)膠質(zhì)細(xì)胞瘤患者惡性化程度與預(yù)后。有研究表明，HSP70陽(yáng)性表達(dá)，不但能夠介導(dǎo)錯(cuò)配蛋白的降解，協(xié)調(diào)腫瘤細(xì)胞蛋白的快速代謝平衡，還能介導(dǎo)癌基因及抑癌基因產(chǎn)物的構(gòu)像成熟、跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，通過(guò)影響細(xì)胞增殖過(guò)程參與細(xì)胞周期、細(xì)胞間信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，使腫瘤細(xì)胞得以無(wú)限增殖〔13〕。此外，膠質(zhì)細(xì)胞瘤的臨床復(fù)發(fā)率較高，本研究發(fā)現(xiàn)局部復(fù)發(fā)組HSP70陽(yáng)性率較高，而且HSP70陽(yáng)性組患者復(fù)發(fā)時(shí)間明顯早于HSP70陰性組。說(shuō)明檢測(cè)HSP70可以作為早期預(yù)測(cè)腫瘤有無(wú)復(fù)發(fā)的一個(gè)重要指標(biāo)，而且HSP70蛋白對(duì)于患者的預(yù)后，特別是1年期死亡率，有著較高的價(jià)值。

4 參考文獻(xiàn)

1周金橋，王景濤，劉秋紅，等.人腦星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤惡性程度相關(guān)蛋白表達(dá)譜的分析與鑒定〔J〕.中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志，2012；11(8)：780-3.

2鄭 虹，耿 明.HSP70、Caspase3在膠質(zhì)細(xì)胞瘤中的表達(dá)及與腫瘤病理分級(jí)的關(guān)系〔J〕.山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2007；45(9)：944-6.

3趙東利，謝小衛(wèi)，王書文，等.熱休克蛋白70反義寡核苷酸誘導(dǎo)膠質(zhì)細(xì)胞瘤凋亡的研究〔J〕.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2007；15(7)：909-11.

4李 瑛，蔣廣元，覃 顏，等.基質(zhì)金屬蛋白酶Ⅱ(mmps-2)在腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤瘤體中表達(dá)的臨床研究報(bào)告〔J〕.北方藥學(xué)，2012；9(4)：50-1.

5劉 斌，翟 廣.腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤低密度脂蛋白受體活性研究〔J〕.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2010；27(9)：1289-90.

6劉寶輝，陳謙學(xué)，紀(jì)振剛，等.膠質(zhì)瘤細(xì)胞株化療敏感性與骨形成發(fā)生蛋白4之間的關(guān)系〔J〕.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2012；29(9)：1674-6.

7Li G，Xu Y，Guan D,etal.HSP70 protein promotes survival of C6 and U87 glioma cells by inhibition of ATF5 degradation.〔J〕.J Biol Chem，2011；286(23)：20251-9.

8孫翠云，于士柱，金樹梅，等.少突膠質(zhì)細(xì)胞起源腫瘤染色體DNA失衡的比較基因組雜交研究〔J〕.中華神經(jīng)外科雜志，2011；27(5)：519-23.

9戴春來(lái)，陳 亮，邱 香，等.人腦星形細(xì)胞瘤的病理分級(jí)與微血管密度相關(guān)性的研究〔J〕.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2009；13(10)：1454-5.

10尹 宏，永 勝，趙海龍，等.星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤組織中NGF和TrkA表達(dá)及臨床意義〔J〕.山東醫(yī)藥，2013；53(6)：15-7.

11邵淑紅，李尊嶺，潘 芳.差異性應(yīng)激對(duì)青、老年大鼠海馬HSP70 mRNA表達(dá)的影響〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志，2010；30(2)：236-7.

12閆國(guó)防，廖勇仕，梁日初，等.RhoE在誘導(dǎo)人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤凋亡中的作用〔J〕.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2013；29(6)：864-7.

13任 力，鄭吉春，李德昌，等.腦少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤顱外轉(zhuǎn)移臨床病理觀察〔J〕.診斷病理學(xué)雜志，2010；17(4)：271-4.