孫玉朝

(內(nèi)蒙古林業(yè)總醫(yī)院,內(nèi)蒙古 牙克石 022150)

膀胱癌生物學(xué)行為的多變性與其基因改變密切相關(guān)，其中抑癌基因的失活比原癌基因的激活可能更具重要作用。本研究通過免疫組化方法檢測表皮生長因子受體(EGFR)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、環(huán)氧化酶-2(COX-2)及p53在膀胱癌組織中的表達(dá)，探討其與臨床病理特征的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2011年1月至2012年1月收治入院的經(jīng)手術(shù)切除的初發(fā)性膀胱癌石蠟標(biāo)本48例，所有患者病理標(biāo)本均經(jīng)病理檢查確診。其中男33例，女15例；年齡33～79〔平均(58.6±4.2)〕歲，其中病理分級(WHO/ISUP，1998)：Ⅰ級(G1)8例，Ⅱ級(G2)24例，Ⅲ級(G3)16例。按國際抗癌協(xié)會(UICC-TNM)診斷進(jìn)行病理分期：表淺癌Ta，Tis～T1 19例，浸潤癌T2～T4 29例。所有入造病例術(shù)前均未經(jīng)放療、化療及免疫治療。

1.2檢測方法 所有標(biāo)本均作5 μm厚的連續(xù)組織切片，分別進(jìn)行蘇木精-伊紅、免疫組織化學(xué)染色。采用免疫組化SP法，采用Santa Cruz Biotech公司生產(chǎn)的VEGF鼠抗人單克隆抗體和COX-2鼠抗人單克隆抗體，美國Zymed公司生產(chǎn)的EGFR鼠抗人單克隆抗體和p53鼠抗人單克隆抗體。具體操作步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3判定標(biāo)準(zhǔn) 以細(xì)胞胞質(zhì)和核膜出現(xiàn)黃色或棕黃色為陽性染色，陽性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞數(shù)<10%為陰性表達(dá)(-)，著色腫瘤細(xì)胞數(shù)≥10%為陽性表達(dá)。10%～25%陽性細(xì)胞數(shù)為(+)，26%～50%陽性細(xì)胞數(shù)為()，>51%陽性細(xì)胞數(shù)為()。連續(xù)觀察5個高倍視野，各計(jì)數(shù)100個細(xì)胞，以平均數(shù)作最后判定。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行Spearman秩和檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

EGFR、VEGF、COX-2、p53的表達(dá)與性別、年齡、腫瘤直徑、病理分級無顯著相關(guān)性(P>0.05)；EGFR、VEGF、COX-2、p53的表達(dá)與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管侵犯、臨床分期有顯著相關(guān)性(P<0.05)；見表1。膀胱癌組織中p53的表達(dá)強(qiáng)度與EGFR、VEGF、COX-2的表達(dá)強(qiáng)度呈正相關(guān)(r=0.205，P=0.020；r=0.278，P=0.001；r=0.218，P=0.004)；COX-2表達(dá)強(qiáng)度與EGFR、VEGF的表達(dá)強(qiáng)度呈正相關(guān)(r=0.395，P=0.001；r=0.198，P=0.016)。

表1 膀胱癌組織中EGFR、VEGF、COX-2、p53陽性表達(dá)率和臨床病理學(xué)特征的相關(guān)性〔n(%)〕

3 討 論

膀胱癌是泌尿系統(tǒng)最常見的一種惡性腫瘤，極易復(fù)發(fā)，其生物學(xué)行為與腫瘤細(xì)胞分化程度密切相關(guān)〔1，2〕。細(xì)胞增殖在從發(fā)育到修復(fù)損傷組織等許多生理過程中起重要作用。多種機(jī)制參與細(xì)胞增殖的嚴(yán)謹(jǐn)調(diào)節(jié)。例如，原癌基因的活性可通過腫瘤抑制因子的作用來平衡；DNA損傷與修復(fù)的存在降低了基因突變和細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的風(fēng)險(xiǎn)；免疫系統(tǒng)可以識別并清除癌癥細(xì)胞。穩(wěn)態(tài)調(diào)控機(jī)制的持續(xù)性被破壞必然導(dǎo)致細(xì)胞增殖過度從而形成癌癥。本研究結(jié)果提示EGFR、VEGF、COX-2、p53與膀胱癌分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管侵犯、臨床分期密切相關(guān)，可作為臨床判斷轉(zhuǎn)移及預(yù)后等生物學(xué)行為的重要參考指標(biāo)。

p53腫瘤抑制蛋白是一個多功能的轉(zhuǎn)錄因子，它調(diào)控了影響增殖、細(xì)胞周期檢查點(diǎn)和凋亡的細(xì)胞過程。MDM2的結(jié)合通過靶定p53從而降解，且抑制p53誘導(dǎo)的細(xì)胞周期阻滯和凋亡，從而調(diào)節(jié)p53的活性。為響應(yīng)基因毒性應(yīng)激信號或DNA損傷，p53被磷酸化，并在細(xì)胞核內(nèi)積累。p53可導(dǎo)致細(xì)胞周期阻滯，從而允許DNA損傷修復(fù)，如果損壞無法修復(fù)，則致使細(xì)胞發(fā)生凋亡。此外，研究已表明p53可不依賴其活性，作為一個轉(zhuǎn)錄因子來引發(fā)凋亡通路〔3，4〕。p53抑癌基因是生物體內(nèi)一種抑制細(xì)胞轉(zhuǎn)變癌細(xì)胞的基因。人類p53基因定位于17號染色體p13，全長16～20 kb，含有11個外顯子，轉(zhuǎn)錄2.8 kb的mRNA，編碼蛋白質(zhì)為p53，是一種核內(nèi)磷酸化蛋白。p53是迄今為止發(fā)現(xiàn)的與人類腫瘤相關(guān)性最高的基因。過去一直把它當(dāng)成一種癌基因，直至1989年才知道起癌基因作用的是突變的p53，后來證實(shí)野生型p53是一種抑癌基因。在所有惡性腫瘤中，50%以上會出現(xiàn)該基因的突變。細(xì)胞中本來就有致癌基因及抑癌基因的存在，只要一方產(chǎn)生病變而失去平衡，癌癥就可能會發(fā)生。環(huán)氧化酶(COX)是一種雙功能酶，具有環(huán)氧化酶和過氧化氫酶活性，是催化花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素的關(guān)鍵酶。目前發(fā)現(xiàn)環(huán)氧化酶有兩種COX-1和COX-2同工酶，前者為結(jié)構(gòu)型，主要存在于血管、胃、腎等組織中，參與血管舒縮、血小板聚集、胃黏膜血流、胃黏液分泌及腎功能等的調(diào)節(jié)，其功能與保護(hù)胃腸黏膜、調(diào)節(jié)血小板聚集、調(diào)節(jié)外周血管的阻力和調(diào)節(jié)腎血流量分布有。后者為誘導(dǎo)型，各種損傷性化學(xué)、物理和生物因子激活磷脂酶A2水解細(xì)胞膜磷脂，生成花生四烯酸，后者經(jīng)COX-2催化加氧生成前列腺素。COX-2是一種膜結(jié)合蛋白。在巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和單核細(xì)胞中COX-2均可被誘導(dǎo)表達(dá)。生理狀態(tài)下絕大部分組織細(xì)胞不表達(dá)COX-2；而在炎癥、腫瘤等病理狀態(tài)下受炎性刺激物、損傷、有絲分裂原和致癌物質(zhì)等促炎介質(zhì)誘導(dǎo)后，呈表達(dá)增高趨勢，參與多種病理生理過程，具體是細(xì)胞膜磷脂通過磷脂酶A2途徑被水解釋放出花生四烯酸，在COX-2的催化下，合成前列腺素E2(PGE2)，最后產(chǎn)生系列炎癥介質(zhì)，并通過瀑布式級聯(lián)反應(yīng)參與機(jī)體各生理、病理過程。EGFR是一種具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白，為erbB(HER)家族中4個成員之一，因而又被稱為 erbB1/HER1，這一家族另外3個成員分別為erbB2/HER2、erbB3/HER3、erbB4/HER4成熟的人類EGFR由1 186個氨基酸殘基構(gòu)成，其結(jié)構(gòu)包括1個胞外配體結(jié)合區(qū)、1個單α螺旋結(jié)構(gòu)的跨膜區(qū)和1個包含酪氨酸激酶域的胞內(nèi)區(qū)。EGFR基因突變的類型人類EGFR基因位于染色體7p11.2，大小約200 kb，包含28個外顯子，其中外顯子18～24編碼受體酪氨酸激酶功能區(qū)〔5，6〕。對EGFR突變患者首選Gefitinib、Erlotinib靶向治療〔7〕。VEGF是一種可以強(qiáng)烈誘導(dǎo)血管生長的因子。產(chǎn)生VEGF的細(xì)胞主要是腫瘤細(xì)胞，垂體濾泡星形細(xì)胞也產(chǎn)生VEGF。VEGF與受體結(jié)合后，通過一系列信號傳導(dǎo)機(jī)制而致血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂增殖，同時(shí)增加血管內(nèi)皮細(xì)胞的通透性〔8〕。腫瘤細(xì)胞在低氧情況下可以分泌VEGF。VEGF的表達(dá)水平和腫瘤內(nèi)的血管生長情況呈正相關(guān)，并且和腫瘤的轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)呈正相關(guān)〔9〕。VEGF可以促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖和細(xì)胞遷移，并抑制細(xì)胞凋亡，抑制VEGF信號轉(zhuǎn)導(dǎo)可以抑制多種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展〔10〕。VEGF在膀胱癌中高表達(dá)，對膀胱癌新生血管形成及腫瘤生長和轉(zhuǎn)移起重要作用。一般認(rèn)為在膀胱癌組織中VEGF的表達(dá)與性別、年齡及腫瘤分期無明顯相關(guān)，與本研究結(jié)果相同。

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