田嘉銘 袁 博 朱登祥 王書華 安 芳

(河北北方學院藥學系，河北 張家口 075000)

金蓮花是毛茛科植物金蓮花屬金蓮花的干燥花及花蕾，有清熱解毒，消腫明目功效，臨床上主要用于上呼吸道感染、扁桃體炎等。前期研究表明，金蓮花中葒草苷和牡荊苷具有對D半乳糖(D-gal)致衰老小鼠體內及體外抗氧化作用，其抗氧化作用與維生素E作用相當〔1～5〕。有關金蓮花中葒草苷和牡荊苷體內動態(tài)抗氧化作用尚未見報道，本研究擬通過比較葒草苷和牡荊苷對D-gal致衰老小鼠血清抗氧化酶活性動態(tài)影響，尋找葒草苷和牡荊苷抗氧化作用的時效關系，為抗衰老藥物的研究提供新的動力。

1 材料與方法

1.1藥品和試劑 野生金蓮花采自河北省張家口沽源，經我院藥物研究所鑒定為短瓣金蓮花。葒草苷和牡荊苷(自制，經1H- NMR和HPLC鑒定純度為98.9%)；D-gal，分析純，上海試一化學試劑有限公司；還原性谷胱甘肽，純度≥99%，國藥集團化學試劑有限公司；生理鹽水，石家莊第四制藥廠；總抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱苷肽過氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)測定試劑盒，均購買自南京建成生物工程研究所，(批號分別為：20100610、20091210、20090915、20100823、20100920)。

1.2動物 健康的昆明種小鼠390只(雌雄各半)，體重(20±2)g，河北北方學院動物中心提供(許可證號：SCXK京2004-0001)，分籠飼養(yǎng)，室溫18℃～25℃。

1.3儀器 U-3900紫外可見分光光度計(日本)；ME235S十萬分之一電子天平(日本)；DK-8型電熱恒溫水槽(上海精密實驗設備有限公司)；低溫高速離心機(賽多利斯公司)；HQ-60型旋渦混合器 (北方同正生物技術發(fā)展公司)。

1.4實驗方法

1.4.1造模方法 采用D-gal致亞急性衰老法〔6〕，將D-gal 10 000 mg溶于500 ml生理鹽水中，按劑量200 mg·kg-1·d-1(0.01 ml/g)給小鼠腹腔注射，正常組注射等體積生理鹽水，造模時間為8 w，每天稱重1次，依據末次稱重調整給藥劑量。

1.4.2模型驗證 造模第6周和第8周分別選取正常組和模型組小鼠(備用) 10只，摘眼球取血，分離血清，檢測T-AOC、SOD和MDA，以驗證小鼠衰老情況。第8周末，模型組小鼠指標與正常組相比具有統(tǒng)計學意義，顯示模型復制成功。

1.4.3給藥與分組 葒草苷和牡荊苷溶液的配制：N，N-二甲基甲酰胺∶吐溫-80∶生理鹽水=1∶1∶20。造模成功后，實驗分為正常組、模型組、葒草苷和牡荊苷高、中、低各3個劑量組(40、20、10 mg/kg)，各治療組從第9周開始每日上午分別口服灌胃給藥，正常組和模型組給等體積的生理鹽水，1次/d。葒草苷和牡荊苷組給藥時間設定為2、4、6、8 w，正常組、模型組和維生素E組時間設定為8 w。

1.4.4小鼠血清中SOD、CAT、GSH-PX和T-AOC的測定 給藥2、4、6、8 w后，小鼠斷頭取血(每個時間點處死相應組)，以4 000 r/min離心10 min，取血清，按試劑盒說明操作，測定SOD、CAT、GSH-PX以及T-AOC的活性。

1.5統(tǒng)計學方法 應用SPSS16.0軟件進行t檢驗。

2 結 果

葒草苷和牡荊苷對D-gal致衰老小鼠血清SOD、CAT、GSH-PX以及T-AOC抗氧化活性動態(tài)影響，結果見表1。與正常組相比，模型組中小鼠血清SOD、CAT、GSH-PX和T-AOC活性明顯降低，具有顯著性差異(P<0.01)。與模型組相比，第2、4周，葒草苷和牡荊苷治療組能夠提高小鼠血清SOD、CAT、GSH-PX以及T-AOC的活性，但無顯著性差異。第6、8周，葒草苷和牡荊苷治療組使小鼠血清T-AOC、SOD、CAT、GSH-PX的活性上升明顯，且有顯著性差異(P<0.05，P<0.01)。與維生素E(VE)組相比，給藥8 w后，葒草苷和牡荊苷中、低劑量組提高小鼠血清T-AOC、SOD、CAT、GSH-PX的作用較弱，具有顯著性差異(P<0.05)，高劑量組與VE組相比無顯著性差異。葒草苷和牡荊苷相比，給藥2、4 w后，各劑量組在提高小鼠血清T-AOC、SOD、CAT、GSH-PX活性上無顯著性差異，給藥6 w后，葒草苷高、中、低劑量組在提高血清抗氧化酶活性上高于同等劑量的牡荊苷(P<0.05)。給藥8 w后，葒草苷中、低劑量組在提高血清抗氧化酶系活性上高于同等劑量牡荊苷(P<0.05)，高劑量組之間無顯著性差異(P>0.05)。見表2。

表1 各組小鼠血清T-AOC、SOD、CAT、GSH-PX水平±s，n=10，U/ml)

表2 不同時點不同葒草苷、牡荊苷劑量組小鼠血清 T-AOC、SOD、CAT、GSH-PX水平±s，n=10，U/ml)

3 討 論

4 參考文獻

1王書華，楊國棟，饒 娜，等.金蓮花中葒草苷和牡荊苷對D-半乳糖致衰小鼠體內抗氧化作用的影響〔J〕.中國老年學雜志，2011；31(24)： 4818-20.

2饒 娜，楊國棟，安 芳，等.金蓮花中葒草苷和牡荊苷對D-半乳糖致衰老小鼠脂褐素和腦組織形態(tài)學的影響〔J〕.中國老年學雜志，2012；32(3)： 562-4.

3袁丹華，屈海琪，蔣 偉，等.金蓮花中葒草苷和牡荊苷對D-半乳糖致衰老小鼠肝、腎、腦組織的抗氧化作用〔J〕.中國老年學雜志，2012；32(9)： 1875-7.

4楊國棟，饒 娜，田嘉銘，等.金蓮花中葒草苷和牡荊苷抗氧作用的研究〔J〕.時珍國醫(yī)國藥， 2011；22(9)： 2172- 3.

5顏 娟，胡海娜，田嘉銘，等.金蓮花總黃酮抗氧作用研究〔J〕.時珍國醫(yī)國藥，2011；22(9)：386-7.

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7胡 平，吳耿偉，夏 青，等. SOD模擬及其抗氧化和抗炎癥功能的研究進展〔J〕. 化學進展，2009；21(5)：873-9.

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9趙雪瑩，閆忠紅，李 冀. 二至丸對D-半乳糖致衰老模型大鼠CAT, GSH-PX影響的實驗研究〔J〕. 中醫(yī)藥信息，2010；27(2)：34-6.

10鄧 洋，許秀舉，于海平. 啤酒對大鼠血清的LDH和T-AOC的影響〔J〕. 食品科技，2009；34(5)：120-31.