廖 軍 周瑜博 劉振峰

(新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830000)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)以及在此基礎(chǔ)上繼發(fā)的骨質(zhì)疏松(OP)的發(fā)病過程因其涉及復(fù)雜的內(nèi)外因素，階段呈多態(tài)性，加之環(huán)境和遺傳因素相互交叉作用，需從不同的角度揭示其發(fā)病機(jī)制〔1～4〕。本研究旨在探討COPD患者與COPD繼發(fā)OP的患者與血栓前狀態(tài)分子標(biāo)志物的表達(dá)是否存在異常。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選擇就診于新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院呼吸科門診及病房就診的60例男性患者，其中單純COPD組30例，COPD繼發(fā)OP組30例。年齡50～80歲，病程5～20年。

1.2診斷標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1COPD 西醫(yī)診斷、分期及分級標(biāo)準(zhǔn)參照COPD診治指南制定的診斷及分級標(biāo)準(zhǔn)。穩(wěn)定期：指患者咳嗽、咳痰、氣短等癥狀穩(wěn)定或癥狀輕微〔5〕。

1.2.2OP 參照《中國人骨質(zhì)疏松建議診斷標(biāo)準(zhǔn)》，以DXA測量L2～L4椎體側(cè)位骨密度(BMD)，BMD>M-1SD定義為正常；BMD在M-1SD～M-2SD定義為骨量減少；BMDM-12%為正常；M-13%～24%為骨量減少；

1.3納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.3.1納入標(biāo)準(zhǔn) ①符合COPD診斷，通過BMD檢查，符合OP診斷標(biāo)準(zhǔn)；②50～80歲的男性患者，病史≥5年；③在新疆本地長期居??；④均無應(yīng)用維生素 D、鈣劑用藥史；⑤簽署知情同意書。

1.3.2排除標(biāo)準(zhǔn) ①不符合COPD和 OP 的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②其他相關(guān)可致繼發(fā)性O(shè)P，如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者；患骨腫瘤或 Paget病(畸形性骨炎)；③有精神類疾病的患者；④未簽訂知情同意書的患者。

1.4主要設(shè)備和試劑 Epics-XL型流式細(xì)胞儀；GC-2016γ放射免疫計(jì)數(shù)器；Sunrise Remote酶標(biāo)儀。免疫熒光單克隆抗體 CD41-PE、CD62P-異硫氰酸熒光素(FITC)；兔抗-ET 抗血清(藍(lán)色)、125I-ET(紅色)；乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝劑，驢抗兔免疫分離劑；ET 標(biāo)準(zhǔn)品(S1-S5)、ET 緩沖液。

1.5血栓前狀態(tài)相關(guān)分子標(biāo)志測定 ①血小板膜糖蛋白(CD41、CD62P)的檢測：本次檢測采用流式細(xì)胞術(shù)，空腹?fàn)顟B(tài)下采取全血5 μl，加入EDTA抗凝試管中，然后加70 μl稀釋液，加入5 μl劑量的CD41-PE和8 μl劑量的CD62P-FITC熒光染料染色，將其混勻后置于無光條件下孵育半小時(shí)，然后用磷酸鹽緩沖液(PBS)調(diào)整血小板濃度，使其濃度至1×106/ml為準(zhǔn)。選擇氬離子激光進(jìn)行激發(fā)，以前向角散射對側(cè)向散射設(shè)門，將血小板群圈出，獲得20 000個(gè)血小板黃光信號后，用PMT2、PMT3收集，然后將其轉(zhuǎn)化成直方圖，用軟件處理，計(jì)算陽性血小板百分比。②組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)和組織型纖溶酶原激活劑抑制劑(PAI-1)的檢測：采取2 ml靜脈血置于試管中，放于離心機(jī)中4℃ 3 000 r/min將血樣離心10 min，將上清液取出待測。將待測血漿加入包被抗人tPA和PAI抗體的反應(yīng)條內(nèi)，37℃條件下孵育150 min，洗滌后，每孔加100 μl OPD底物稀釋液，37℃條件下孵育使其顯色，然后加50 μl終止液終止反應(yīng)，在酶標(biāo)儀492 nm處測定OPD值。③內(nèi)皮素(ET)檢測方法：各管血樣2 ml，置于抗凝試管中，放于離心機(jī)中4℃ 3 000 r/min將血樣離心10 min，將上清液取出，保存待測。將100 μl 125I-ET(紅色)和100 μl兔抗-ET抗血清(藍(lán)色)加入待測血漿中，4℃～8℃溫育24 h。然后加入500 μl驢抗兔免疫分離劑，混勻，室溫條件下放置15 min。再者將其4℃ 3 500 r/min離心15 min，吸棄上清液。上機(jī)檢測，應(yīng)用處理軟件得出各沉淀管的放射性計(jì)數(shù)。④凝血指標(biāo)的檢測：包括凝血酶原時(shí)間(PT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、凝血酶時(shí)間(TT)、纖維蛋白原(Fib)。采取靜脈血置于抗凝試管中，3 000 r/min離心15 min，應(yīng)用AMAX-200型全自動(dòng)血凝分析儀檢測，采用CLAUSS比濁法。使用儀器將血漿作1∶10稀釋，并取200 μl稀釋血漿，37℃預(yù)溫30 min，最后加入100 μl凝血酶溶液，對各項(xiàng)凝血指標(biāo)進(jìn)行檢測。

2 結(jié) 果

2.1兩組患者血小板功能指標(biāo)的檢測 COPD繼發(fā)OP與單純COPD患者CD41指標(biāo)檢測結(jié)果分別為(72.58±2.13)%和(75.24±2.07)%；CD62P檢測結(jié)果分別為(3.39±2.17)%和(3.21±2.12)%，雖然二者之間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但是其檢測值均高于正常人群。t-PA〔(17.89±3.24),(17.58±3.72)μg/L〕和PAI-1〔(55.38±13.36),(52.24±12.59)μg/L〕的檢測結(jié)果顯示在兩組患者中無差異。兩組ET的檢測結(jié)果分別為(123.76±41.22)ng/L和(104.68±41.94)ng/L，兩組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。

2.2兩組凝血四項(xiàng)指標(biāo)的檢測 兩組患者之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。見表1。

表1 COPD繼發(fā)OP與單純COPD患者凝血四項(xiàng)指標(biāo)的檢測±s,n=30)

3 討 論

有循證醫(yī)學(xué)證據(jù)顯示，多種疾病發(fā)生后，患者的血栓前狀態(tài)各項(xiàng)指標(biāo)出現(xiàn)異常，主要表現(xiàn)為血小板活性增強(qiáng)、聚集性增加、內(nèi)皮細(xì)胞受損、凝血和纖溶系統(tǒng)失去平衡。國內(nèi)外多項(xiàng)研究顯示，血栓前狀態(tài)可能是多種疾病發(fā)生、發(fā)展的共同病理機(jī)制之一。血栓前狀態(tài)若不能及時(shí)糾正可能會(huì)促進(jìn)血栓形成，該狀態(tài)在臨床疾病中普遍存在，并在病情進(jìn)展過程中起到至關(guān)重要的作用〔7，8〕。

故在疾病治療上除了給予必要的常規(guī)治療外，還應(yīng)該加強(qiáng)對修復(fù)與重建機(jī)體血栓有關(guān)系統(tǒng)的平衡態(tài)，包括凝血因子、纖溶功能、血小板、內(nèi)皮細(xì)胞功能等標(biāo)志物的檢測，本研究結(jié)果顯示兩組ET水平有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，可能與單純COPD患者外周血中降鈣素含量高于COPD繼發(fā)OP的患者，而降鈣素含量的增高對ET發(fā)揮了一定的抑制作用，從而致使ET的含量在兩組患者之間出現(xiàn)差異性。

筆者認(rèn)為寒燥環(huán)境持續(xù)存在，并侵襲人體后容易引起免疫功能紊亂、下丘腦-垂體-腎上腺軸功能紊亂，導(dǎo)致淤血產(chǎn)生。淤血不能正常濡養(yǎng)骨骼，而且阻滯體內(nèi)會(huì)影響氣血的正常運(yùn)行，以致新血化生緩慢，影響骨組織的正常功能活動(dòng)。淤血長期存在容易影響骨組織細(xì)胞微環(huán)境，營養(yǎng)交換出現(xiàn)障礙，最終導(dǎo)致骨髓失養(yǎng)，臨床上終致OP，全身或腰部酸痛是其主要臨床表現(xiàn)〔4〕。因此，認(rèn)為寒燥環(huán)境能增加COPD繼發(fā)OP的風(fēng)險(xiǎn)。隨著研究不斷深入，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為COPD不僅僅是單純意義上的氣道阻塞性疾病，而且還是一種肺組織血管性疾病，若處理不當(dāng)更有可能影響全身功能〔3〕。凝血功能平衡狀態(tài)的打破可能是COPD全身性的病理改變之一，與繼發(fā)性O(shè)P有密不可分的關(guān)系。

4 參考文獻(xiàn)

1張文龍.慢性阻塞性肺病和骨質(zhì)疏松相關(guān)性研究進(jìn)展〔J〕.臨床肺科雜志，2005；10(5)：638.

2Lehouck A，van Remoortel H，Troosters T，etal.COPD and bone metabolism：a clinical update〔J〕.Rev Mal Respir，2010；27(10)：1231-42.

3高 振，阿地力江，哈木拉提·吾甫爾.西北寒燥證證候模型免疫功能紊亂的研究〔J〕.中華中醫(yī)藥雜志，2010;25(8)：1225-8.

4劉振峰，艾力江·阿斯拉，高 振，等.新疆慢性阻塞性肺疾病繼發(fā)骨質(zhì)疏松癥中醫(yī)證候研究〔J〕.中國中醫(yī)藥信息雜志，2012；19(11)：13-5.

5中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)慢性阻塞性肺疾病學(xué)組.慢性阻塞性肺疾病診治指南(2007年修訂版)〔J〕.中華結(jié)核和呼吸雜志，2007；30(1)：8-17.

6中國老年學(xué)會(huì)骨質(zhì)疏松委員會(huì)骨質(zhì)疏松診斷標(biāo)準(zhǔn)學(xué)科組.中國人骨質(zhì)疏松癥建議診斷標(biāo)準(zhǔn)(第二稿)〔J〕.中國骨質(zhì)疏松雜志，2000；6(1)：1-3.

7陳 芳，王 麗，朱中玉，等.內(nèi)皮素1及其受體在心血管疾病中作用的研究進(jìn)展〔J〕.中國全科醫(yī)學(xué)，2013；16(26)：3149-51.

8姜 艷，沙吉達(dá)·阿不都熱依木，熱娜古麗·艾則孜，等.不同復(fù)雜性疾病的血栓前狀態(tài)研究〔J〕.新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013；36(6)：822-4.