周振旗，王寧莉，王麗霞

(1.銅川市食品藥品檢驗檢測中心，陜西 銅川 7270312.西安市閻良區(qū)630醫(yī)院，陜西 西安 710089)

丹參為唇形科植物丹參SalviamiltiorrhizaBunge.的干燥根及根莖,其性味苦、微溫,具活血化瘀、安神寧心的功效。[1]現(xiàn)代研究表明丹參具有改善血液黏稠，擴張血管，改善微循環(huán)，抗心肌缺血等藥理作用[2-3]，所以丹參藥材和含有丹參的成方制劑是作為治療心腦血管疾病的重要藥物之一，應(yīng)用十分廣泛。丹參作為一味中藥材，其質(zhì)量會因生長或種植的環(huán)境、氣候、規(guī)范管理及采收時間等的不同而參差不齊。為保證使用效果，提高丹參的藥材質(zhì)量， 2005年版和2010年版的《中國藥典》中均對丹參藥材中活性成份丹酚酸B和丹參酮ⅡA的含量作了具體的規(guī)定，但對丹參中丹參素鈉的含量卻沒有質(zhì)控要求,有研究表明丹參素鈉對心肌、擴張冠狀動脈、抑制血小板聚集及抗凝、抗動脈粥樣硬化及降血脂、抗菌消炎及增強機體免疫、抗腫瘤等方面有明顯的作用[2-3]。為更加全面的控制丹參藥材的質(zhì)量，本文參考有關(guān)文獻(xiàn)資料[4-5]，對丹參素鈉的含量測定方法進(jìn)行了研究，為完善丹參藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了部分科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀：島津LC-20AT

檢測器：SPD-20A

天平：AY—220型電子天平

丹參素鈉對照品：中國食品藥品檢定研究院，批號：110855-200809

樣品：陜西龍山藥業(yè),批號:1-001；亳州市中藥飲片廠，批號：2-001；西安鳴鹿藥業(yè)，批號：3-001；亳州市中藥飲片廠,批號：4-001

其他：甲醇為色譜醇；水為屈臣氏蒸餾水

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗

色譜柱：Agilent TC-C18(2)(5 μm,4.6×250 mm) 588925-902；填充劑：十八烷基硅膠鍵合硅膠；柱溫：40℃，檢測波長：281 nm；流動相：甲醇-1%醋酸溶液(12∶88)；流速：1.0ml/min,理論板數(shù)按丹參素鈉峰計算應(yīng)不低于3000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 丹參素鈉對照品(批號：110855-200809)，丹參素鈉對照品先用五氧化二磷減壓干燥48 h，精密稱取適量，加甲醇制成每1 mL含0.01 mg的溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取丹參藥材20 g，粉碎,過四號篩，在60 ℃減壓干燥2 h，精密稱取約3 g樣品，置于250 mL錐形瓶中，精密加入甲醇100 ml，精密稱定，超聲處理1 h，放至室溫，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，濾液用0.45 μm微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。

對照品、供試品及空白實驗的色譜圖分別見 圖1～圖3。

圖1 對照品色譜圖

圖2 供試品色譜圖

圖3 空白實驗色譜圖

2.3 線性關(guān)系的考察

分別精密吸取對照品溶液2 μl、4 μl 、6 μl、8 μl、10 μl、 12 μl、注入液相色譜儀測定，以濃度為縱坐標(biāo)(Y)，峰面積為橫坐標(biāo)(X)，計算回歸方程 ：Y=6.56×107-69.67X ,r=0.99999，結(jié)果表明：丹參素鈉在1.8～11 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗

精密量取丹參素鈉對照品溶液10 μl，進(jìn)樣6次，測得峰面積平均值為60068，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD值為0.211%,n=6。

2.5 穩(wěn)定性試驗

取同一樣品的供試品溶液，分別在0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、24 h進(jìn)樣，考察測定的結(jié)果在24 h內(nèi)的穩(wěn)定性，6次測定峰面積的RSD為1.299%。結(jié)果表明樣品在24 h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。

2.6 重復(fù)性試驗

按2.2中供試品溶液的制備方法，對同一供試品平行處理6份，分別進(jìn)行結(jié)果測定，測得丹參素鈉平均含量為0.21 mg/g。 RSD為0.73% 。

2.7 加樣回收率試驗

取已知含量的供試品6份，每份各2 g，精密稱定，每份均精密加入5 mL濃度為0.01 mg/mL的丹參素鈉對照品溶液，按照2.2中供試品溶液制備的方法進(jìn)行處理，測定并計算。結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗結(jié)果

2.8 樣品含量測定

取丹參待測樣品四批，按照2.2中供試品溶液的制備方法進(jìn)行制備，得到樣品溶液。分別精密量取10μl的對照品溶液和樣品溶液，注入液相色譜儀，測定并計算。結(jié)果見表2。

表2 不同廠家丹參中丹參素鈉的含量

3 討論

3.1 提取方法

實驗分別采取了超聲處理和加熱回流提取兩種方法，結(jié)果表明回流處理提取方法使得丹參素鈉的成分有所減少，提取效果不佳，所以采用超聲處理提取。

3.2 提取時間

實驗設(shè)置了30 min、40 min、60 min、90 min的提取時間，結(jié)果表明超聲60 min丹參素鈉的含量最高。所以選擇處理時間為60 min。

3.3 提取溶劑

實驗使用了純甲醇、甲醇和水的不同比例混合溶液為提取溶劑進(jìn)行提取，實驗數(shù)據(jù)表明純甲醇作為提取溶劑效果最佳。

3.4 流動相

實驗選擇了不同比例的甲醇-1%醋酸溶液、乙腈-1%醋酸溶液為流動相，結(jié)果表明，以甲醇-1%醋酸溶液(12:88)為流動相時，丹參素鈉分離效果較好、峰形佳、保留時間適中，因此，選用流動相為甲醇-1%醋酸溶液(12:88) 。

3.5 檢測波長

根據(jù)色譜圖丹參素鈉對照品溶液在281 nm波長處有最大吸收，故檢測波長為281 nm。

參考文獻(xiàn)：

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版一部[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010：70-71.

[2]張名娟.丹參素的藥理作用研究[J].北方藥學(xué),2012,9(3):106-107.

[3]孫錫銘,蔡海江.丹參素新藥理作用[J].中草藥，1991，22(1)：20-23.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2005年版增補本[M].北京:中國醫(yī)藥 科技出版社，2009：103-104.

[5]羅興平，張彩霞，王 峰，等.高效液相色譜法測定強力救心滴丸中丹參素鈉的含量[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn),2002,3(4):60-62.