董揚(yáng)揚(yáng) 張海云 莊奕煌 許榮譽(yù)

(泉州市第一醫(yī)院腫瘤外科，福建 泉州 362000)

非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)是肺癌最常見的類型，早期即發(fā)生轉(zhuǎn)移是影響NSCLC患者預(yù)后的重要因素，近年研究發(fā)現(xiàn)多種microRNA(miRNA)，在非小細(xì)胞肺癌的增殖、凋亡、分化和代謝等方面發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用，最近研究發(fā)現(xiàn)miRNA197在多種腫瘤組織中表達(dá)升高，本文研究NSCLC組織中miRNA197的表達(dá)及相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 2003年1月至2008年1月我院手術(shù)治療的NSCLC 121例，性別、年齡、腫瘤臨床分期及組織學(xué)分級(jí)資料完整，病理切片均由兩位以上的病理學(xué)專家共同閱片證實(shí)，術(shù)前均未接受放化療及生物治療，臨床TNM分期按照國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)2002年標(biāo)準(zhǔn)，得到我院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，均簽署知情同意書。

1.2觀察指標(biāo) 分別選取腫瘤組織和癌旁正常組織切片進(jìn)行miRNA197表達(dá)水平檢測(cè)，方法為：將所取組織剪成直徑1 cm大小，放入液氮罐中保存，后置入-80℃冰箱備用，Trizol法提取細(xì)胞總RNA，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，提取的RNA純度和濃度采用紫外分光光度計(jì)分別測(cè)定波長(zhǎng)230、260和280 nm處的吸光度值。應(yīng)用實(shí)時(shí)PCR法檢測(cè)，目的基因miRNA197引物序列：5′-GGTTCACCACCTTCTC-3′，下游引物序列5′-CAGTGCGTGTCGTGGAG-3′，內(nèi)參U6引物序列：miRNA上游引物序列為5′-GCTTCGGCAGCACATATACTA-3′，下游引物序列為5′-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3′，逆轉(zhuǎn)錄條件、RT-PCR反應(yīng)條件分析參考文獻(xiàn)〔1〕，與內(nèi)參比值大于1.5定為高表達(dá)〔2〕。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)和Kaplan-Meier生存分析。

2 結(jié) 果

2.1miRNA197在NSCLC組織和癌旁正常組織中的表達(dá)量 miRNA197在NSCLC組織表達(dá)量(高表達(dá)73例，低表達(dá)48例)明顯高于癌旁正常組織(高表達(dá)11例，低表達(dá)110例)(χ2=70.091,P=0.000 9)，見表1。

2.2miRNA-197診斷價(jià)值 miRNA高表達(dá)的患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移較高(P<0.05)，臨床分期較高的患者miRNA197表達(dá)水平較高(P<0.05)，T分類為T3的患者miRNA197表達(dá)水平較高(P<0.05)，miRNA197表達(dá)水平與患者性別、年齡無關(guān)，見表1。

表1 miRNA197表達(dá)與各臨床病理特征的關(guān)系(n)

2.3miRNA-197與患者預(yù)后關(guān)系 miRNA-197高表達(dá)患者5年生存率(4.1%)明顯低于低表達(dá)患者(18.8%)(P<0.05)。見圖1。

圖1 miRNA197表達(dá)量與NSCLC患者預(yù)后關(guān)系

3 討 論

miRNAs是一類內(nèi)源表達(dá)的、約22 nt左右的小分子非編碼RNA，它們通過轉(zhuǎn)錄后水平對(duì)靶基因進(jìn)行調(diào)控，主要機(jī)制是剪切mRNA或者抑制mRNA的翻譯。miRNAs作為一種重要的生物分子，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、增殖、細(xì)胞凋亡等具有重要的調(diào)控作用。MiRNAs可以通過同一通道調(diào)控多個(gè)目標(biāo)而放大其生物學(xué)效應(yīng)，一個(gè)miRNAs可以作用于上千個(gè)mRNAs，因此，即使相對(duì)較小的miRNAs表達(dá)的改變也可產(chǎn)生重要的生物學(xué)效應(yīng)。研究表明超過50%的miRNAs位于與癌癥相關(guān)的染色體區(qū)域，其與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移有重要關(guān)系，在肺癌組織中miRNAs通過不同方式參與腫瘤發(fā)生與起源、增殖、轉(zhuǎn)移、血管化等過程〔3〕，在肺癌的病理分型中，約80%為NSCLC，并且其惡性程度高，因此，對(duì)NSCLC組織中miRNAs的深入研究，將為早期肺癌提供新的檢測(cè)方法，并在個(gè)性化治療、提高療效等方面提供幫助〔4〕。

miRNA197是與人類腫瘤相關(guān)性很大的一個(gè)miRNA，研究發(fā)現(xiàn)miRNA197在乳腺癌、甲狀腺癌和胰腺癌中高表達(dá)〔5，6〕，并與患者預(yù)后密切相關(guān)。李俊等〔7〕證實(shí)miRNA197表達(dá)在喉癌組織中顯著升高，下調(diào)miRNA197表達(dá)可以顯著抑制喉癌細(xì)胞增殖，減弱侵襲和增殖能力〔8〕，Du等〔9〕發(fā)現(xiàn)miRNA197的NSCLC組織中miRNA197表達(dá)量明顯高于正常支氣管上皮細(xì)胞。研究表明，在A459和NIH-H460肺癌細(xì)胞株中，miRNA197具有顯著致癌性，下調(diào)miRNA表達(dá)量可以增加肺癌細(xì)胞凋亡，抑制增殖〔10〕，提示miRNA在肺癌組織的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用，靶向miRNA的治療對(duì)于NSCLC的治療具有重要的臨床意義。但miRNA197將在肺癌的早期診斷及治療領(lǐng)域發(fā)揮重要作用：進(jìn)一步明確miRNA相互調(diào)控的確切分子機(jī)制，需要更多的基礎(chǔ)、臨床試驗(yàn)評(píng)估m(xù)iRNA197類似物以及拮抗劑的治療效果、細(xì)胞毒性、藥代動(dòng)力學(xué)等。

4 參考文獻(xiàn)

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8李 俊，王建中，白廣平，等.慢病毒介導(dǎo)的miRNA-197-3p-siRNA對(duì)喉癌細(xì)胞系Hep-2生物學(xué)行為的影響〔J〕.復(fù)旦學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2013；40(5)：550-5.

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