李秀娟 翟麗萍 劉軍超

(河北北方學(xué)院病理教研室，河北 張家口 075000)

食管癌的病因不明，預(yù)防困難，因缺乏十分有效的診治方法，發(fā)病率、死亡率居高不下，總五年生存率不超過10%。在胚胎發(fā)育過程中，八聚體結(jié)合蛋白4(Oct 4)是全能性或多能性干細(xì)胞標(biāo)記物，其在保持胚胎干細(xì)胞自我更新及全能性方面有著重要作用〔1〕，而在分化或成熟的組織中其表達(dá)水平降低或消失。腫瘤細(xì)胞，尤其是低分化腫瘤組織中的細(xì)胞，在自我更新和分化增殖能力上與干細(xì)胞相似。本研究探討Oct 4蛋白在食管癌中的表達(dá)。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來源 收集河北北方學(xué)院第一附屬醫(yī)院2010年6月至2011年12月期間切除的食管癌存檔標(biāo)本蠟塊60例，其中男36例，女24例，年齡(62.15±9.36)歲。高分化鱗癌12例，中分化鱗癌22例，低分化鱗癌26例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移29例；外膜浸潤(rùn)23例，無外膜浸潤(rùn)37例。全部病例術(shù)前未經(jīng)任何治療，經(jīng)術(shù)后病理切片證實(shí)為食管鱗狀細(xì)胞癌。另取20例距腫瘤邊緣大于5 cm的正常食管組織作為對(duì)照。

1.2試劑 鼠抗人Oct 4單克隆抗體，免疫組化二抗工作液和DAB顯色試劑盒均購自北京中杉金橋生物制品有限公司。

1.3方法 采用免疫組織化學(xué)SP法進(jìn)行染色，染色過程嚴(yán)格按試劑盒規(guī)定程序進(jìn)行。切片常規(guī)脫蠟至水，經(jīng)3%過氧化氫37℃ 5 min，封閉內(nèi)源性過氧化物酶活性，PBS沖洗后于檸檬酸緩沖液加熱抗原修復(fù)15 min，滴加一抗，37℃ 60 min，清洗后滴加二抗，37℃ 30 min，DAB顯色，流水沖洗、復(fù)染、脫水、透明，中性樹膠封片。同時(shí)用PBS代替一抗作染色的陰性對(duì)照，用已知Oct 4染色陽性的胃癌組織片做陽性對(duì)照。

1.4結(jié)果判斷 Oct 4主要定位于細(xì)胞核，細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性〔2〕。采用Image-pro-plurs圖像分析軟件進(jìn)行圖像分析。每張切片隨機(jī)觀察5個(gè)高倍(400×)視野計(jì)算均值，平均每高倍視野陽性癌細(xì)胞數(shù)占所觀察癌細(xì)胞總數(shù)的百分率作為陽性結(jié)果，陽性細(xì)胞數(shù)<5%為(-)，5%～25%為(+)，26%～50%為()，>50%為()區(qū)分染色強(qiáng)度〔2〕。最后隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野照相(400×)，由圖像分析軟件檢測(cè)總視野內(nèi)陽性反應(yīng)細(xì)胞的總面積和積分光密度(IOD)做半定量分析。平均光密度(AOD)=積分光密度(IOD)÷總面積(AREA SUM)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，Oct 4蛋白表達(dá)與各臨床病理參數(shù)的關(guān)系采用χ2檢驗(yàn)；不同分化程度食管鱗癌采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1兩組中Oct 4的表達(dá) 食管癌組中Oct 4陽性率(61.7%)顯著高于正常對(duì)照組(20.0%，χ2=10.423，P=0.001)。

2.2食管鱗癌中Oct 4表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系 低分化組中Oct 4的表達(dá)率明顯高于高中分化組(P<0.05)。食管癌組織中Oct 4的表達(dá)與患者年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及外膜浸潤(rùn)均無明顯相關(guān)性。見表1。

表1 食管鱗癌Oct 4表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系

2.3不同分化食管鱗癌組中Oct 4表達(dá)的AOD值 13例高中分化食管鱗癌組織中的AOD值(0.532±0.036)明顯低于24例低分化食管鱗癌組織(0.607±0.051,P<0.05)。

3 討 論

Oct 4是嚴(yán)密調(diào)控哺乳動(dòng)物胚胎發(fā)育過程中的一個(gè)關(guān)鍵基因，功能是保證組織分化和個(gè)體發(fā)育的有序進(jìn)行，也被稱為Oct3、POU5F1、OTF3或OTF4，屬POU轉(zhuǎn)錄因子家族〔3〕。人的Oct 4基因位于6號(hào)染色體(6p21.31),長(zhǎng)度為16.40 kb,具有多個(gè)轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)，轉(zhuǎn)錄不同的mRNA亞型，翻譯成多種蛋白質(zhì)〔4〕。作為胚胎干細(xì)胞的特異性基因，Oct 4主要表達(dá)于胚胎和生殖細(xì)胞腫瘤中，如睪丸生殖細(xì)胞瘤、精原細(xì)胞瘤、胚胎性癌和胚胎癌細(xì)胞系中。近來較多的研究表明Oct 4在非生殖系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞和組織中也有表達(dá)。Jin等〔5〕發(fā)現(xiàn)Oct4在乳腺癌細(xì)胞組織和乳腺癌細(xì)胞系中均有表達(dá)，而在正常乳腺組織中未見表達(dá)。另有研究表明Oct 4不僅在乳腺癌、腦癌和膀胱癌組織中高表達(dá)，而且還發(fā)現(xiàn)其表達(dá)水平越高，癌細(xì)胞的分化程度就越低〔6〕。此外，腎細(xì)胞癌〔7〕、肺腺癌〔8〕等組織中也檢測(cè)到了Oct 4的表達(dá)。

本研究說明在惡性腫瘤組織中確實(shí)存在Oct 4的高表達(dá)。本研究Oct4在細(xì)胞核中的表達(dá)程度與腫瘤組織的分化程度有著密切關(guān)系，與其他報(bào)道結(jié)論相符〔9，10〕。

因此食管癌組織中有可能存在著自我更新和增殖分化能力的干細(xì)胞樣細(xì)胞，這些細(xì)胞具有自我更新能力，提示Oct 4在食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用。Oct 4可以作為腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物，并且有望在分子水平上為腫瘤的診斷和治療提供新的方法和途徑。

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