黃少珍 (廣東省佛山市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 佛山 528000)

糖尿病是由于體內(nèi)胰島素絕對(duì)或相對(duì)不足而引起的脂肪和蛋白質(zhì)代謝紊亂的常見慢性疾病之一［1］，并隨著人們生活水平的提高，發(fā)病率逐年攀升，其診斷與防治是臨床研究焦點(diǎn)之一。有研究報(bào)道［2］，紅細(xì)胞膜磷脂酰膽堿與糖尿病的發(fā)生與發(fā)展有一定關(guān)系。筆者本次研究采用高效液相色譜色譜(HPLC)法測(cè)定糖尿病患者的紅細(xì)胞膜磷脂酰膽堿含量，旨在評(píng)價(jià)其臨床價(jià)值。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：研究組100例均為2010年4月 ～2012年11月我院收治患者，均符合1999年WHO有關(guān)糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)。其中男55例，女45例;年齡40～88歲，平均(53.4±14.7)歲;病程(0.5～15)年。對(duì)照組86例為我院同期健康體檢者。其中男45例，女41例;年齡38～87歲，平均(52.9±13.8)歲。并剔除：①糖尿病者;②心、腦、肝、肺、腎疾病者。比較兩組年齡和性別，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 紅細(xì)胞膜磷脂酰膽堿測(cè)定［3］：儀器與試劑：LC－10AT型高效液相色譜儀，日本島津SPD－10A型紫外檢測(cè)器，甲醇、乙腈為色譜純，水為重蒸水，其他試劑為分析純。色譜條件：Shim Pack CLC ODS C18柱(250×4.6 mm，5 mm);流動(dòng)相：乙腈－甲醇－85%磷酸溶液(90∶9∶1);檢測(cè)波長(zhǎng)：204 nm;柱溫：25℃;流速：1.0 ml/min;進(jìn)樣量：10 μl。樣品制備：晨間空腹肘靜脈采血并肝素抗凝，Dodge改進(jìn)法制備細(xì)胞膜后取1 ml，采用Higgins法重復(fù)提取3次膜脂質(zhì)，并精確定容至5 ml后N2氣吹干，使用封口膜封口，于－20℃保存，測(cè)試時(shí)用氯仿定容至所需濃度，0.45 μm有機(jī)微孔濾膜濾過。方法學(xué)考察：此條件下，樣品主成分與其他成分有很好的分離度;在0.1～1.0 mg/ml范圍之間線性良好(r=0.9990);精密度與重現(xiàn)性良好，RSD分別為：1.98%和1.79%;穩(wěn)定性試驗(yàn)表明樣品在8 h內(nèi)穩(wěn)定;加樣回收率為97.5%。樣品測(cè)定：按上述方法取血配置樣品，并按上述色譜條件測(cè)定其峰面積，外標(biāo)法計(jì)算紅細(xì)胞膜磷脂酰膽堿含量。

1.2.2 常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)測(cè)定：受試者晨間空腹晨間空腹肘靜脈采血，使用全自動(dòng)生化分析儀(日本東芝，TBA－40FR型)測(cè)定空腹血糖(Glu)、血清總膽固醇(TC)和三酰甘油(TG);并通過短時(shí)胰島素耐受實(shí)驗(yàn)，以時(shí)間和受試者短時(shí)胰島素耐受量血糖測(cè)量值作圖，算得葡萄糖利用常數(shù)(KITT);使用LBY－BX激光衍射儀(北京普利生公司)測(cè)定最大變形指數(shù)(DImax)和最大聚集指數(shù)(AImax)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS 13.0行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 兩組受試者紅細(xì)胞膜磷脂酰膽堿含量比較：對(duì)照組和研究組紅細(xì)胞膜磷脂酰膽堿含量分別為(0.501±0.029)mg/ml和(0.398±0.023)mg/ml，對(duì)照組86例患者的紅細(xì)胞膜磷脂酰膽堿為(0.501±0.029)mg/ml。研究組100例患者的紅細(xì)胞膜磷脂酰膽堿：0.398±0.02(mg/ml)，兩組研究結(jié)果顯示研究組顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。

2.2 兩組受試者常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)比較：研究組Glu、TC、TG和AImax顯著高于對(duì)照組，研究組DImax和KITT顯著低于對(duì)照組(P＜0.05或P＜0.01)，詳見表1。

表1 兩組受試者常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)比較(±s)

表1 兩組受試者常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)比較(±s)

常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)對(duì)照組(n=86)研究組(n=100) t值 P值Glu(mmol/L)4.92±0.69 10.56±5.22 2.973 ＜0.01 TC(mmol/L) 4.38±0.42 5.33±0.53 1.342 ＜0.05 TG(mmol/L) 1.22±0.37 1.98±0.59 1.796 ＜0.05 DImax(%) 39.11±1.38 36.45±1.56 1.229 ＜0.05 AImax(%) 39.30±4.51 42.31±5.74 1.483 ＜0.05 KITT 1.35±0.41 0.77±0.30 2.405 ＜0.01

3 討論

磷脂是紅細(xì)胞主要結(jié)構(gòu)與功能單位，紅細(xì)胞膜磷脂酰膽堿是紅細(xì)胞膜磷脂主要成分的之一，主要分布在膜的外層。紅細(xì)胞膜磷脂更新對(duì)紅細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能至關(guān)重要且不能自身合成，紅細(xì)胞膜磷脂酰膽堿更新主要靠與血漿中同系物自由交換［2－3］。本次研究，筆者觀察了糖尿病患者紅細(xì)胞膜磷脂酰膽堿及常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)，從而評(píng)價(jià)紅細(xì)胞膜磷脂酰膽堿的臨床價(jià)值。

結(jié)果顯示，患有糖尿病的研究組100患者紅細(xì)胞膜磷脂酰膽堿顯著高于對(duì)照組86例健康體檢者(P＜0.05)，同時(shí)兩組常規(guī)血糖(Glu)、血脂指標(biāo)(TC、TG)比較，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示糖尿病患者由于血液脂代謝紊亂而影響紅細(xì)胞膜磷脂酰膽堿等磷脂成分代謝;進(jìn)一步研究顯示，糖尿病患者AImax顯著高于健康者，同時(shí)糖尿病患者DImax和KITT顯著低于健康人群(P＜0.05或P＜0.01)，提示紅細(xì)胞膜磷脂酰膽堿等磷脂成分代謝紊亂進(jìn)一步影響紅細(xì)胞變形能力，增強(qiáng)聚集能力，并增加胰島素抵抗。雖然有關(guān)糖尿病患者紅細(xì)胞膜磷脂酰膽堿變化與糖尿病病情的嚴(yán)重程度關(guān)系的系統(tǒng)研究尚無，但其異常表達(dá)可作為臨床早期診斷的一項(xiàng)參考值。

綜上所述，紅細(xì)胞膜磷脂酰膽堿在糖尿病患者中異常表達(dá)與脂質(zhì)代謝紊亂有關(guān)，影響紅細(xì)胞功能并增加胰島素抵抗，具有良好臨床參考價(jià)值，更系統(tǒng)的研究有待進(jìn)行。

［1］ 劉昕陽(yáng)，沈建軍，韓香妮．2型糖尿病與2型糖尿病腎病患者血脂等生化指標(biāo)變化臨床分析［J］．陜西醫(yī)學(xué)雜志，2012，41(7)：800．

［2］ 劉蘊(yùn)玲，陳少華，岳 峰．老年2型糖尿病患者胰島素敏感性與紅細(xì)胞膜磷脂成分的關(guān)系［J］．中華老年醫(yī)學(xué)雜志，2005，24(8)：601．

［3］ 廖國(guó)玲，劉國(guó)生，韓學(xué)波．RP－HPLC法測(cè)定糖尿病患者紅細(xì)胞膜磷脂酰膽堿含量［J］．中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2010，5(8)：69．