滕 奇，陳文靜 ，王崇益

(江蘇正大清江制藥有限公司，江蘇 淮安 223001)

0 引言

炎癥刺激可誘導(dǎo)環(huán)氧化酶- 2(COX- 2)生成，因而導(dǎo)致炎性前列腺素類物質(zhì)的合成和聚積[1]，尤其是前列腺素E2，可引起炎癥、水腫和疼痛[2]。塞來昔布是具有獨(dú)特作用機(jī)制的新一代化合物，即特異性抑制環(huán)氧化酶- 2，可通過抑制環(huán)氧化酶- 2阻止炎性前列腺素類物質(zhì)的產(chǎn)生，達(dá)到抗炎、鎮(zhèn)痛及退熱作用[3]。塞來昔布由G.D. SEARLE(美國輝瑞Pfizer旗下)研發(fā)，于1998年12月獲得FDA批準(zhǔn)，商品名為Celebrex，國外許多臨床試驗(yàn)證明對關(guān)節(jié)炎有良好的治療作用, 并可顯著減少胃腸道不良反應(yīng)[4]，無論是對于急性創(chuàng)傷外傷導(dǎo)致的急性疼痛, 還是外科手術(shù)后的止痛, 都是理想的鎮(zhèn)痛藥物[5],也可治療原發(fā)性痛經(jīng)(PD)。其制劑批準(zhǔn)的規(guī)格有四種：50mg、100mg、200mg和400mg。2000年8月，國家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)G.D.SEARLE(輝瑞旗下)的塞來昔布膠囊進(jìn)口，2011年，進(jìn)口的塞來昔布膠囊年銷售額達(dá)人民幣5億元。

本品在甲醇、乙醇、丙酮和二甲亞砜中易溶，在水中幾乎不溶。目前關(guān)于塞來昔布的報道多見于臨床研究，也有少部分關(guān)于塞來昔布雜質(zhì)含量檢測方面的報道發(fā)表[6-7]，然而對塞來昔布膠囊溶出度的研究目前國內(nèi)尚未見報道。本文通過對塞來昔布膠囊溶出度測定方法的研究，建立一種準(zhǔn)確可靠、操作簡便的溶出度測定方法，以便更好的控制產(chǎn)品質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

溶出度儀：天大天發(fā)806型 液相色譜儀；Perkin Elmer；檢測器：Flexar UV/Vis可調(diào)波長檢測器；溶液輸送泵；Flexar四元泵

色譜工作站：TotalChrom；色譜柱；Hedera C-8(5 μm, 4.6×250 mm)

流動相：乙腈-0.5 %三乙胺溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH 7.0±0.1)(55:45)作為流動相； 柱溫：30℃

檢測波長：256 nm；進(jìn)樣量；20 μL

1.2 藥品與試劑

塞來昔布膠囊(批號120829、120830、120831，江蘇正大制藥有限公司提供 )；塞來昔布對照品(U.S.Pharmacopeia The Stand of Quality)；水為自制,乙腈為色譜純(美國天地公司)；三乙胺(廣東光華化學(xué)廠有限公司)；磷酸為分析純(美國天地公司)；十二烷基硫酸鈉(南京化學(xué)試劑有限公司)

2 方法學(xué)考察

2.1 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

理論板數(shù)以塞來昔布峰計(jì)不低于2000，塞來昔布與相鄰色譜峰的分離度大于1.5。

2.2 檢測波長的選擇

本品的水溶液(含0.5%十二烷基硫酸鈉)按HPLC法在256 nm的波長處有強(qiáng)紫外吸收。故選擇256nm為溶出度的檢測波長。

2.3 線性范圍

取塞來昔布對照品適量，精密稱定，26.23mg置于25mL量瓶中,加流動相溶解并定溶至刻度,分別吸取0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL、1.5mL和2.0mL置10mL量瓶中加流動相至刻度。取各濃度的溶液，照HPLC法，分別在256nm波長處測定峰面積，求出回歸方程：

Y= 57637371.26X-4487.66 r= 1.0000

線性關(guān)系數(shù)據(jù)見表1，塞來昔布峰面積對濃度線性圖如圖1所示。

表1 線性關(guān)系數(shù)據(jù)表

圖1 塞來昔布線性

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在0.0624mg/mL～0.208mg/mL的質(zhì)量濃度范圍內(nèi),峰面積對濃度線性關(guān)系良好。

2.4 回收率試驗(yàn)

精密稱取處方中主藥量的80%、100%、120%和處方中的各輔料適量制成模擬膠囊劑，取模擬膠囊劑細(xì)粉適量(約相相當(dāng)于含塞來昔布160mg、200mg和240mg各3份)，精密稱定，分別置1000mL溶出杯中,以溶出介質(zhì)溶解,過濾，吸取續(xù)濾液5mL至10mL量瓶中用流動稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液，另取塞來昔布對照品適量，加流動相溶解并稀釋制成每1mL含0.1mg的溶液作為對照品溶液，精密量取20ul注入液相色譜儀，并記錄色譜圖，計(jì)算回收率，結(jié)果見表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果

由表2中的結(jié)果可見，平均回收率為99.5%，RSD為0.39%，表明回收率較好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取本品的溶液，置室溫下放置，分別于0、2、4、8、12、24 h測定，峰面積基本不變，表明在24 h內(nèi)溶液穩(wěn)定。

3 溶出條件設(shè)計(jì)

3.1 溶出方法選擇

中國藥典中規(guī)定溶出度的檢測方法有轉(zhuǎn)籃法、槳法、小杯槳法，因本品規(guī)格為每粒200mg，而舍棄對小杯法的實(shí)驗(yàn)研究。對第一法籃法和第二法槳法進(jìn)行研究和篩選，本品以水(含0.5%十二烷基硫酸鈉)為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速50 r/min，照溶出度測定法第一法籃法、第二法槳法進(jìn)行測定，由測定的結(jié)果可知第二法槳法溶出度為91.9%，比第一法籃法溶出量89.6%高，故選用第二法槳法作為本品的溶出方法。

3.2 溶劑的選擇

分別以水、0.1mol/L的鹽酸溶液、pH6.8的磷酸鹽緩沖液中添加十二烷基硫酸鈉(濃度分別為0.1% 0.5%、1.0%)HPLC法測定，不同溶劑在同一轉(zhuǎn)速(50 r/min)下的溶出結(jié)果見表3。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，膠囊在0.5%十二烷基硫酸鈉的稀鹽酸溶液和0.5%十二烷基硫酸鈉的pH6.8磷酸鹽緩沖溶液溶液中溶出不完全，在0.5%、1%十二烷基硫酸鈉的水溶液中溶出較完全，故可選用0.5%十二烷基硫酸鈉的水溶液。

3.3 轉(zhuǎn)速的選擇

取本品以0.5%十二烷基硫酸鈉的水溶液為溶劑，分別以50、100 r/min進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，本品在轉(zhuǎn)速50 r/min、100 r/min溶出相同。從節(jié)約能耗和儀器磨損角度出發(fā)，故采用轉(zhuǎn)速50 r/min作為本品的溶出度測定轉(zhuǎn)速。

3.4 溶出時間

取本品三批及原研樣品，分別照溶出度測定法第二法，以含0.5%十二烷基硫酸鈉的水溶液1000mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為每分鐘50轉(zhuǎn)，依法操作，分別于5、15、30、45、60分鐘時取溶液8mL(同時補(bǔ)充等量溶出介質(zhì))濾過，分別精密量取續(xù)濾液適量，用溶出介質(zhì)稀釋成每1mL中約含0.1mg的溶液，作為供試品溶液，HPLC法，在256nm波長處分別測定。另取塞來昔布對照品適量，加流動相溶解并稀釋制成每1mL含0.1mg的溶液作為對照品溶液，同法測定，計(jì)算每粒在不同時間的溶出量，根據(jù)時間與溶出量繪制溶出曲線。由表3可見，當(dāng)取樣時間在45 分鐘時本樣品及原研樣品的溶出量均在85%以上。根據(jù)原標(biāo)準(zhǔn)中取樣時間的規(guī)定并考慮到大生產(chǎn)的條件，故本品的取樣時間定為45分鐘，本品的溶出量限度定為標(biāo)示量的75%。

表3 溶出介質(zhì)的篩選

3.5 空白輔料及膠囊殼的干擾性試驗(yàn)

按照處方配比稱取除主藥外的其他附加劑適量，以含0.5%十二烷基硫酸鈉的水溶液1000mL為溶劑，照HPLC法，結(jié)果測得，附加劑在256nm處無吸收，表明附加劑對測定無干擾。

3.6 實(shí)驗(yàn)結(jié)論

取本品適量，照溶出度測定法第二法槳法，以含0.5%十二烷基硫酸鈉的水溶液1000mL溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為每分鐘50轉(zhuǎn)，依法操作，經(jīng)45分鐘時，取樣，濾過，分別精密量取續(xù)濾液適量，用流動相稀釋成每1mL中約含0.1mg的溶液，作為供試品溶液，照HPLC法，在256nm波長處分別測定。另取塞來昔布對照品，精密稱取適量用流動相溶解并稀釋制成1mL約含0.1mg的溶液，作為對照品溶液，同法測定，計(jì)算每粒在不同時間的溶出量。使用上述方法，操作簡便快速、精密度較高、測定結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定性良好。

4 結(jié)論

在吸取溶出液時應(yīng)用0.45 μm的濾膜進(jìn)行過濾,可消除不溶輔料對測定結(jié)果的影響。

按照緩釋、控釋和遲釋制劑指導(dǎo)原則規(guī)定，釋放介質(zhì)以脫氣的新鮮純化水為常用釋放介質(zhì)，或根據(jù)藥物的溶解特性、處方特性、吸收部位，使用稀鹽酸(0.001～0.1mol/L)或pH3～8的磷酸鹽緩沖液，對難溶性藥物不宜采用有機(jī)溶劑，可加入少量表面活性劑。因?yàn)楸酒吩谒袠O微溶，所以加入適量助溶劑十二烷基硫酸鈉溶液助溶。在實(shí)驗(yàn)過程中，通過對不同pH值的條件下，不同濃度十二烷基硫酸鈉溶液，溶出介質(zhì)的對比篩選，在發(fā)現(xiàn)0.5%十二烷基硫酸鈉的稀鹽酸溶液；0.5%十二烷基硫酸鈉的pH6.8磷酸鹽緩沖溶中，溶出不完全，而在0.5%、1%十二烷基硫酸鈉的水溶液中溶出較完全，故選用0.5%十二烷基硫酸鈉的水溶液作為塞來昔布的溶出介質(zhì)。

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