昆明中藥廠有限公司，云南 昆明 650228

益母顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

朱敏楊彩春孫蓉*

昆明中藥廠有限公司，云南 昆明 650228

目的建立益母顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用TLC法對制劑中川芎、當(dāng)歸進(jìn)行鑒別；用HPLC-ELSD法測定制劑中鹽酸水蘇堿的含量，采用丙基酰胺鍵合硅膠柱(AGT Venusil HILIC 柱；4.6×250mm,5μm),流動相為乙腈-0.2%冰醋酸(81：19)，流速為1.0ml/min，柱溫為25℃，ELSD參數(shù)：霧化氣體流速2.8L/min，漂移管溫度105℃。結(jié)果定性鑒別方法能檢出當(dāng)歸、川芎，且薄層色譜中陰性無干擾，專屬性強(qiáng)；鹽酸水蘇堿在1.2～6.0μg范圍內(nèi)的自然對數(shù)值與峰面積的自然對數(shù)值呈良好線性關(guān)系，r=0.9994，平均回收率為102.37%，RSD為2.01%。結(jié)論該方法簡便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于益母顆粒的質(zhì)量控制。

益母顆粒；鹽酸水蘇堿；當(dāng)歸；川芎； HPLC；TLC；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

益母顆粒的處方來源于部頒中藥成方制劑第九冊(標(biāo)準(zhǔn)號：WS3-B-1812-94)[1]，由益母草、川芎等4味藥組成，具有活血調(diào)經(jīng)、行氣止痛的功效，用于氣滯血瘀，月經(jīng)不調(diào)，痛經(jīng)，產(chǎn)后淤血腹痛。原標(biāo)準(zhǔn)無定性鑒別和定量檢測項(xiàng)，為了更好地控制其質(zhì)量，本文建立了川芎、當(dāng)歸的薄層色譜鑒別方法，并采用HPLC-ELSD法對益母草中鹽酸水蘇堿進(jìn)行含量測定。經(jīng)試驗(yàn)證明，該方法簡便快捷，專屬性強(qiáng)，可用于益母顆粒的質(zhì)量控制。

1 儀器與試劑

高效液相色譜儀(美國Agilent 1200液相色譜儀系統(tǒng))；Alltech(奧泰)2000增強(qiáng)型(2000ES)ELSD；安捷倫35900E型數(shù)模轉(zhuǎn)換器；SK3300LHC超聲機(jī)(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)。

鹽酸水蘇堿(批號：110712-201010)、當(dāng)歸對照藥材(批號：120927-200411)、川芎對照藥材(批號：120918-200406)均購自中國藥品生物制品檢定所；益母顆粒(昆明中藥廠有限公司生產(chǎn)，規(guī)格：3g/袋，批號：111111、120401、120402、120403)；乙腈、甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 當(dāng)歸、川芎的鑒別 取益母顆粒10g，研碎，加乙酸乙酯40ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴?ml使溶解，作為供試品溶液。取當(dāng)歸、川芎對照藥材各0.2g，各加乙酸乙酯10ml，同法制成對照藥材溶液。另取缺當(dāng)歸陰性樣品、缺川芎陰性樣品、缺當(dāng)歸和川芎的雙陰性對照樣品各10g，同供試品制備方法制得陰性對照溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄 Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液10～15μl，對照藥材溶液5～10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(9:1)為展開劑，展開，取出晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，且缺當(dāng)歸、川芎的雙陰性對照樣品無干擾。結(jié)果見附圖1。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：丙基酰胺鍵合硅膠柱(AGT Venusil HILIC 柱，4.6×250mm，5μm)；流動相：乙腈-0.2%冰醋酸(81∶19)；柱溫：25℃；流速：1.0ml/min；ELSD參數(shù)：霧化氣體流速2.8L/min，漂移管溫度105℃。進(jìn)樣量：對照品溶液5μl、10μl，供試品溶液10μl。理論板數(shù)以鹽酸水蘇堿峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2.2.2 對照品溶液的制備 取鹽酸水蘇堿對照品適量，精密稱定，加70%乙醇制成每1ml含0.3mg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取益母顆粒適量，研細(xì)，取約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率180W，頻率35kHz)1.5小時，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 專屬性試驗(yàn) 取處方中除益母草外的其他藥材，按處方劑量及制法和工藝要求制備缺益母草的陰性樣品，照含量測定項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制成陰性對照樣品溶液。

分別吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10μl，在色譜條件下進(jìn)行測定，結(jié)果顯示，陰性對照溶液中色譜峰對鹽酸水蘇堿含量測定無干擾。

2.2.5 線性關(guān)系考察 分別精密吸取上述鹽酸水蘇堿對照品溶液2、4、6、8、10μl，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積。以峰面積的自然對數(shù)為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣量的自然對數(shù)為橫坐標(biāo)作線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程： Y=1.6726X+6.8279(r=0.9994)，結(jié)果表明，鹽酸水蘇堿在1.2～6.0μg范圍內(nèi)的自然對數(shù)值與峰面積的自然對數(shù)值呈良好線性關(guān)系。

2.2.6 精密度試驗(yàn) 分別精密吸取同一鹽酸水蘇堿對照品溶液各10?l，按測定方法重復(fù)進(jìn)樣8次，測定峰面積值。RSD為0.98%。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品(批號：111111)溶液，分別于0h、2h、4h、8h、12h各進(jìn)樣10μl，按上述色譜條件進(jìn)行測定，結(jié)果5次鹽酸水蘇堿峰面積值的RSD=2.615%，表明供試品溶液在10小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取批號為111111的益母顆粒6份，按供試品制備方法，平行制備6份，依法測定鹽酸水蘇堿含量，鹽酸水蘇堿含量分別為4.3067、4.3476、4.5227、4.5422、4.5366、4.5686mg·g,平均值為4.4707mg·g，RSD為2.53%(n=6)。

2.2.9 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的益母顆粒(批號：111111，鹽酸水蘇堿含量：4.4707mg/g)樣品6份，每份約0.5g，精密稱定，分別精密加入鹽酸水蘇堿對照品，按2.2.3項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，測定鹽酸水蘇堿含量，計(jì)算回收率，結(jié)果(見表1)表明，本法有良好的回收率。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2.10 樣品測定 取3個批號的益母顆粒樣品，分別按2.2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測定鹽酸水蘇堿含量，結(jié)果見表2。

表2 益母顆粒鹽酸水蘇堿含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 當(dāng)歸、川芎的薄層鑒別，曾參照《中國藥典》項(xiàng)下當(dāng)歸、川芎[2]的鑒別方法試驗(yàn)，經(jīng)過試驗(yàn)比較，提取溶劑選用乙酸乙酯比選用乙醚提取的效果好，斑點(diǎn)更清晰。從安全、環(huán)保方面考慮，藥典方法中的展開劑正己烷-乙酸乙酯(4:1)調(diào)整為毒性較小環(huán)己烷-乙酸乙酯(9∶1)點(diǎn)板，效果好且缺當(dāng)歸、川芎的陰性沒有干擾，專屬性強(qiáng)，特征斑點(diǎn)明顯，故采用。

3.2 曾進(jìn)行木香薄層鑒別試驗(yàn)，采用石油醚(60～90℃)、乙酸乙酯、乙醇等不同提取溶劑提取制備供試品；以石油醚(30～60℃)-乙酸乙酯(9:1)、環(huán)己烷-乙酸乙酯(9∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至顯色清楚。試驗(yàn)結(jié)果：對照藥材色譜顯一藍(lán)色主斑點(diǎn)，供試品色譜中均未檢視到與對照藥材相應(yīng)的藍(lán)色主斑點(diǎn)。

3.3 曾參照文獻(xiàn)[3]，選擇高效液相法-紫外檢測器進(jìn)行鹽酸水蘇堿的含量測定研究，測定波長：192nm，流速：1.000ml/min，柱溫：25℃，流動相曾試過：乙腈-水(90∶10)、甲醇-水(90∶10)、乙腈-0.2%乙酸(80∶20)、乙腈-0.2%冰醋酸(80∶20)，結(jié)果采用乙腈-0.2冰醋酸(80∶20)分離度較好，但由于重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果較差(RSD=5.7%)，故未采用。

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會．中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)：中藥成方制劑第九冊[S]．北京：中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會，1994：157．

[2] 國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010．

[3] 李政海，蘇作林，廖展葦，等．HPLC法測定益母草顆粒(無蔗糖型)中鹽酸水蘇堿的含量 [J]．中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2011，8(26)：70-72．

朱敏，男，工程師，研究方向：中藥質(zhì)量控制。E-mail:darkuyzhu@sina.com。

孫蓉，女，高級工程師，研究方向：中藥制劑工藝及質(zhì)量控制。E-mail:sunrong09@hotmail.com。

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1007-8517(2014)05-0023-02

2013.12.20)