1.廣西中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530022；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530001

GC-MS用于廣西三七炮制品中有機氯農(nóng)藥殘留測定方法的研究

張赟赟1覃潔萍2

1.廣西中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530022；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530001

目的測定廣西三七炮制品中有機氯農(nóng)藥的殘留量。方法采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的選擇離子檢測(SIM)方法，測定廣西三七炮制品中九種有機氯類農(nóng)藥殘留量。結(jié)果九種有機氯類農(nóng)藥定量測定的線性關(guān)系在0.01ng-0.1ng的范圍內(nèi)良好,方法回收率為96.75%-101.84%，RSD%<3.73%。所測定的16個不同品種中有機氯農(nóng)藥殘留量均小于2×10-7g/g。結(jié)論該方法準確可靠、重復(fù)性好，可較好地對三七炮制品中有機氯農(nóng)藥殘留量進行控制。

GC-MS；廣西三七炮制品；有機氯；農(nóng)藥殘留

目前，藥材中農(nóng)藥殘留的問題引起世界各國學(xué)者的重視，特別是由于早期BH、DDT廣泛大量地使用，因其不易分解的性質(zhì)，長期殘留在自然界，藥材植物體在生長期吸收了土壤或水中的有機氯農(nóng)藥，并在體內(nèi)細胞中得到富集[1]。研究顯示[2]，西洋參、三七部分藥材中有機氯農(nóng)藥殘留嚴重超標，說明目前雖已禁用BHC、DDT，但土壤中殘留的農(nóng)藥仍對藥材有著影響。三七為五加科人參屬植物三七Panax notoginseng (Bμrk.)F.H.Chen的干燥根，根據(jù)不同炮制方法，又分“生七”及“熟七”兩種。傳統(tǒng)中醫(yī)及民間對三七均有“生消熟補”之說，即認為生三七有止血祛瘀、消腫活血、鎮(zhèn)痛之效；而熟三七則有補氣補血、強身健體之功[3～5]。因此，本實驗針對廣西三七不同炮制品采用GC-MS分析方法，用選擇離子掃描方式進行了有機氯農(nóng)藥的定量分析，以期為提高廣西三七藥材的質(zhì)量標準、進一步研究開發(fā)三七和開展GAP種植提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 安捷侖氣相-質(zhì)譜聯(lián)用儀(5973-6890)；離心機(LD24-0.8，北京醫(yī)用離心機廠)；超聲波臺式清洗器(BRANSON B3200S-T)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 (RE-52AA，上海亞榮生化儀器廠)；色譜柱為DB-1彈性石英毛細管柱(30m×0.25mm×0.25μm)。

1.2 試劑及材料 丙酮、二氯甲烷、正己烷均為農(nóng)殘級，硫酸、無水硫酸鈉、氯化鈉均為分析純，有機氯對照品(α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、PCNB、PP′-DDE、PP′-DDD、OP′-DDT、PP′-DDT)含量均為0.1mg/ml，中國藥品生物制品檢定所提供，三七藥材產(chǎn)自廣西靖西縣，并按傳統(tǒng)炮制方法進行炮制。詳見表1。

表1 廣西三七不同炮制品的批號及其炮制方法

2 實驗方法和結(jié)果

2.1 氣相色譜條件 DB-1 彈性石英毛細管柱(30m×0.25mm×0.25um)。程序升溫：初始100℃，每分鐘10℃升至220℃，每分鐘8℃升至250℃，保持8 分鐘。進樣口溫度為230℃，進樣量1μl。載氣為高純He氣，不分流進樣。

2.2 質(zhì)譜條件 EI 離子源，離子源溫度230℃。MS檢測器，檢測器溫度為250℃。

2.3 SIM條件

時間(min)特征碎片離子(m/z)3145，181，25410 18214，237，265，29514 0246，31814 5235，237

2.4 測定方法 在上述色譜及質(zhì)譜條件下，以選擇離子檢測方式進行質(zhì)譜采集，以九種有機氯成份的保留時間和特征質(zhì)量離子進行定性分析，以峰面積為定量指標，計算樣品中九種有機氯的殘留量。

2.5 混合對照品儲備溶液的制備 精密量取九種有機氯農(nóng)藥對照品溶液(0.1mg/ml)各1ml于250ml容量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，制得濃度為400μg/L的混合對照品儲備液，備用。

精密量取上述混合對照品儲備液1ml至10ml容量瓶中，用正己烷制成濃度為40ug/L 的標準溶液，即得。

2.6 供試品溶液的制備 取三七炮制品于60℃干燥4小時，粉碎成細粉，取約2g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，加水20ml浸泡過夜，精密加丙酮40ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，用丙酮補足減失的重量，再加氯化鈉約6g,精密加二氯甲烷30ml，稱定重量，超聲處理15分鐘，用二氯甲烷補足減失的重量，靜置(使分層)，將有機相迅速移入裝有適量無水硫酸鈉的100ml具塞錐形瓶中，放置4小時。精密量取35ml，于40℃水浴上減壓濃縮至近干，加少量正己烷如前反復(fù)操作至二氯甲烷及丙酮除凈，用正己烷溶解并轉(zhuǎn)移至10ml具塞刻度的試管中，加正己烷稀釋至5ml，小心加入濃硫酸1ml，振搖1分鐘，轉(zhuǎn)移上清液至離心管中，離心(3000轉(zhuǎn)/分)10分鐘，精密量取上清液2ml，40℃下(或用氮氣)將溶液濃縮至適量，精密稀釋至 1ml，即得。

2.7 標準曲線的測定 分別精密量取混合對照品儲備液2.5、2、1ml至10ml容量瓶中，用正己烷分別制成濃度為100、80、40μg/L的混合對照品溶液；精密量取濃度為40μg/L的混合對照品溶液5ml至10ml容量瓶中，用正己烷制成濃度為20μg/L的混合對照品溶液；精密量取濃度為20μg/L的混合對照品溶液5ml至10ml容量瓶中，用正己烷制成濃度為10μg/L的混合對照品溶液。分別進樣1.0μL，以進樣量(ng)為橫坐標，以相應(yīng)峰面積為叢坐標，繪制標準工作曲線，并計算回歸方程，,得回歸方程和相關(guān)系數(shù)。由表2可以看出，九種有機氯成分在0.01ng-0.1ng的濃度范圍內(nèi)均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

表2 九種農(nóng)藥的標準曲線

2.8 精密度實驗 以濃度為40μg/L的混合對照品溶液進行重復(fù)5次測定，按上述色譜條件測定峰面積，結(jié)果表明九種有機氯農(nóng)藥標準品溶液的RSD為1.4%-3.7%，說明儀器精密度良好，符合要求。

2.9 穩(wěn)定性實驗 在0、2、6、10、12h時間段對濃度為40μg/L的混合對照品溶液進行測定，結(jié)果表明九種有機氯農(nóng)藥對照品溶液在12個小時內(nèi)的穩(wěn)定性良好，能滿足含量測定的要求。

2.10 加樣回收實驗 稱取樣品(批號：E20040324)約2g，平行精密稱定6份，分別精密加入濃度為400μg/L的混合對照品溶液1ml，即對照品的加入量為0.40μg，按“供試品溶液的制備”項下操作提取，在上述色譜條件下，精密吸取供試溶液和對照品溶液各1μl進樣，測定峰面積，并按下式分別計算九種有機氯農(nóng)藥的回收率。結(jié)果見表3。

表3 回收率實驗(n=6)

2.11 檢測限實驗 農(nóng)藥殘留分析時，要求分析方法具有一定的靈敏度和分辨率。參照2005年版藥典信噪比法,在上述實驗條件下，用10μg/L的混合對照品逐級稀釋為5μg/L和2.5μg/L的混合對照品,分別進樣檢測,根據(jù)信噪比3:1的比例，計算得各有機氯農(nóng)藥的檢出濃度分別為：α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、PCNB、PP′-DDD、OP′-DDT、PP′-DDT的濃度為5μg/L，PP′-DDE的濃度為2.5μg/L。檢出量：α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、PCNB、PP′-DDD、OP′-DDT、PP′-DDT 為0.005ng，PP’-DDE為0.0025ng。

2.12 樣品含量測定 準確稱取16批采集的樣品(粉碎混勻)，按“供試品溶液的制備”項下操作提取，測定，重復(fù)兩次，用濃度為40μg/L混合對照品溶液做隨行標準，計算樣品中有機氯農(nóng)藥殘留量。

表4 16批樣品有機氯農(nóng)藥測定結(jié)果(μg/g)

注：“-”為未檢測出(低于檢測限量)

3 討論

從本次實驗結(jié)果可以看出廣西范圍內(nèi)的這16批三七炮制品中，有5批的總滴滴涕(PP′-DDE、PP′-DDD、OP′-DDT、PP′-DDT)的殘留量不符合藥典標準的要求，而總六六六(BHC)和五氯硝基苯(PCNB)的殘留量都符合藥典標準的要求。其余11批次中九種有機氯農(nóng)藥的殘留量均符合藥典標準的要求(總六六六(BHC)≤千萬分之二，總滴滴涕(DDT)≤千萬分之二，五氯硝基苯(PCNB)≤千萬分之一)。說明了廣西三七的種植環(huán)境較好，藥材的質(zhì)量較好，但有機氯農(nóng)藥殘留對藥材的質(zhì)量仍有一定的影響，應(yīng)該得到有關(guān)部門和相關(guān)研究人員的重視。

[1]Aboμ-Arab AAK，Aboμ DMA．Pesticicle resdμes in some Egyptian spicics and medicinal plants as attected by processing[J]．Food Chem 2001，72(4)：439.

[2]張曙明，郭懷忠，陳建民．三七和西洋參中多種有機氯農(nóng)藥殘留量分析[J]．中國中藥雜志，2000，25(7)：402.

[3]武孔云，陳寶兒，趙伯濤．中藥材種養(yǎng)關(guān)鍵技術(shù)叢書[M]．南京：江蘇科學(xué)技術(shù)出版社，2001：1.

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GC-MSfororganochlorinepesticidesresiduesinGuangxinotoginsengprocessedproductsresearchmethod

ZHANG Yunyun1QIN Jieping2

1.Guangxi Institution of chinese Medicine & Pharmaceutical Science，Nanning 530022，China；2．Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530022,China

Objective：Determination of residue of organichlorine pesticides in Guangxi notoginseng processed products.MethodsSelected ion monitoring scan mode (SIM) of GC-MS were adopted.ResultsThis method had good relativity of linearity in 0.01ng-0.1ng, the recoveries of samples were 96.75%-101.84%, RSD%<3.73%. The residue of organichlorine pesticides in Guangxi notoginseng processed products were all less than 2×10-7g/g.ConclusionThe method is accurate and reliable, good repeatability, it can be better for notoginseng organochlorine pesticide residues in processed products.

GC-MS；Guangxi notoginseng processed products；Organochlorine；pesticides

R283

A

1007-8517(2014)05-0019-03

2013.12.09)