亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        大鼠DAI特殊染色觀察及NF-κB的表達*

        2014-09-06 07:46:30陳仁輝范兆慧
        關(guān)鍵詞:軸索髓鞘彌漫性

        陳仁輝,范兆慧,高 輝

        (1.福建警察學(xué)院刑事科學(xué)技術(shù)系,福建 福州 350007;2.福州市公安局倉山分局刑偵大隊,福建 福州 350007;3.吉首大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室,湖南 吉首 416000)

        大鼠DAI特殊染色觀察及NF-κB的表達*

        陳仁輝1,范兆慧2,高 輝3

        (1.福建警察學(xué)院刑事科學(xué)技術(shù)系,福建 福州 350007;2.福州市公安局倉山分局刑偵大隊,福建 福州 350007;3.吉首大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室,湖南 吉首 416000)

        為了分析大鼠彌漫性軸索損傷(DAI)后病理學(xué)變化及核因子-κB(NF-κB)的表達,探討了NF-κB在彌漫性軸索損傷中的作用,構(gòu)建了大鼠DAI動物模型.運用Glees-Marsland染色法和Weil氏染色法觀察傷后不同時間段的病理學(xué)改變,并運用免疫組化SABC法觀察NF-κB的表達.實驗結(jié)果表明,大鼠彌漫性軸索損傷后1 h即可觀察到部分軸索腫脹、斷裂,髓鞘水腫、分層等現(xiàn)象,24 h可見典型軸索收縮球形成,髓鞘崩解呈篩網(wǎng)狀改變,72 h軸索斷裂數(shù)量、范圍及髓鞘篩網(wǎng)狀改變達到高峰;傷后1 h,腦組織內(nèi)可見NF-κB陽性細胞,傷后3 h陽性細胞數(shù)增多,傷后24 h達到高峰,持續(xù)到72 h,傷后7 d,仍可見陽性細胞表達,但數(shù)量減少.對照組細胞核未見陽性表達.大鼠彌漫性軸索損傷后NF-κB表達增加,可能與軸索繼發(fā)性損傷有關(guān).

        彌漫性軸索損傷;特殊染色法;NF-κB;免疫組織化學(xué)

        彌漫性軸索損傷(Diffuse Axonal Injury,DAI)是顱腦損傷的一種重要形式.其最突出的臨床表現(xiàn)是在沒有明確局灶損傷的情況下出現(xiàn)快速的進行性加重意識障礙.DAI由于缺乏特異性的神經(jīng)定位體征以及影象學(xué)改變,其最終診斷需要通過組織病理學(xué).大量的研究表明,DAI的發(fā)生是由機械性的原發(fā)損傷引起并與繼發(fā)性的蛋白水解通路激活共同參與所致,但是最近的研究認為炎癥反應(yīng)可能也參與了DAI的發(fā)生發(fā)展[1].

        NF-κB是一種具有多向性轉(zhuǎn)錄激活功能的調(diào)節(jié)因子,其主要作用是參與多種與免疫、炎癥、細胞凋亡等生理和病理過程相關(guān)基因的表達調(diào)控,通路是炎癥反應(yīng)通路中重要的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[2].筆者構(gòu)建了大鼠DAI動物模型,運用Glees-Marsland染色法、Weil氏染色法觀察傷后不同時間段軸索的病理學(xué)改變,并對相應(yīng)時間段NF-κB的表達變化進行觀察,探討NF-κB與DAI經(jīng)過時間及損傷程度的關(guān)系.

        1 材料與方法

        1.1實驗材料

        1.1.1 動物分組 健康成年雄性SD大鼠45只(福建醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供),其質(zhì)量為280~300 g,隨機分為8個實驗組(分別在打擊后30 min,1 h,3 h,6 h,12 h,24 h,72 h,7 d處死)及1個對照組,共9組.每組5只大鼠.

        1.1.2 主要試劑 Weil蘇木精、4%鐵明釩、硝酸銀、氯化金(上海化學(xué)試劑總廠)、硫代硫酸鈉、飽和氨水,兔抗大鼠NF-κB p65多克隆抗體、DAB顯色試劑盒及SABC試劑盒(武漢博士德公司).

        1.2實驗方法

        1.2.1 DAI動物模型制作 實驗組參照文獻[3]中報道的方法建立DAI動物模型,用1%戊巴比妥鈉作腹腔注射(每千克大鼠注射35 mg),麻醉成功后,大鼠頭部中線切開暴露顱骨,將直徑10 mm、厚3 mm的打擊墊片用高分子聚脂固定于顱頂?shù)墓跔羁p與人字縫之間的中央部,然后將大鼠俯臥固定已知厚度及彈性系數(shù)的海綿床上,待大鼠恢復(fù)意識,有肢體活動時,移至有機玻璃管下端,墊片正對管中央.質(zhì)量為450 g的鐵棒從2 m高度自管內(nèi)自由墜落至打擊墊片上,立即移開海綿床以免二次損傷.在設(shè)定的時間點處死大鼠.1.2.2 組織及切片處理 打開顱骨后迅速用4%多聚甲醛液預(yù)固定,取出大鼠全腦于多聚甲醛液后固定12 h,沿大腦正中裂矢狀切開大腦、小腦、腦干,于正中切面左右外側(cè)3 mm處切取左右大腦皮質(zhì)、胼胝體、丘腦以及腦干組織各一塊,分別做常規(guī)石蠟包埋.切片厚度為5 μm,分別作HE染色、Glees-Marsland染色、Weil氏染色[4]及NF-κB免疫組織化學(xué)染色.

        2 實驗結(jié)果

        2.1Glees-Marsland染色

        打擊后1 h即可觀察到部分神經(jīng)纖維不規(guī)則增粗、腫脹、呈波浪樣改變,6 h神經(jīng)纖維明顯增粗、腫脹并呈串珠狀、螺旋狀改變,斷端收縮球形成,12 h收縮球較為明顯,24 h可見典型軸索收縮球,72 h軸索斷裂數(shù)量及范圍達到高峰(圖1).對照組神經(jīng)纖維排列整齊有序.

        2.2Weil氏染色

        圖1 腦損傷后腦干軸索腫脹、斷裂改變(G-M×400)

        圖2 腦損傷后腦干神經(jīng)纖維脫髓鞘改變(Weil×400)

        打擊后1 h神經(jīng)髓鞘水腫、分層,6 h可見髓鞘崩解,聚集成團,12~24 h髓鞘病變范圍擴大,組織結(jié)構(gòu)排列紊亂,部分呈空泡狀、篩網(wǎng)狀改變,72 h髓鞘篩網(wǎng)狀改變達高峰(圖2).對照組髓鞘無水腫、分層改變.

        2.3NF-κB免疫組織化學(xué)染色

        圖3 腦損傷后1 h陽性表達(SABC×400)

        DAI后1 h,在腦組織內(nèi)可見NF-κB少量細胞核表達(圖3),呈棕黃色顆粒,著色較淺;傷后3 h染色細胞核增多,著色加深(圖4),呈散分布,與對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05),隨著損傷時間的延長,陽性細胞數(shù)增加,染色加深;傷后24 h,表達達到高峰(圖5),持續(xù)到72 h,傷后7 d,仍可見陽性細胞表達,但數(shù)量減少,與對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05).最顯著的表達區(qū)域在大腦皮層、腦干,其他部位的表達略有差異,但表達趨勢一致.對照組細胞核未見陽性表達.NF-κB表達情況見表1(例數(shù)n=5).

        圖4 腦損傷后3 h陽性表達(SABC×400)

        圖5 腦損傷后24 h陽性表達(SABC×400)

        表1 對照組及DAI組腦組織中NF-κB陽性單位值

        注 肩標a表示P<0.05,肩標b表示P<0.01.

        3 討論

        彌漫性軸索損傷一般發(fā)生在頭部遭受剪切力或加速性外力作用后,腦內(nèi)不同密度的組織產(chǎn)生不同的位移,造成這些界面處軸索的腫脹斷裂,其主要病理改變集中于神經(jīng)軸索聚集區(qū),如灰白質(zhì)交界處、胼胝體、腦干、小腦及內(nèi)囊基底節(jié)區(qū),軸縮球的形成是確認彌漫性軸索損傷的主要依據(jù).軸索的膨脹和斷裂可由外力直接作用引起,但絕大多數(shù)情況下則是傷后病理生理變化的結(jié)果,軸縮球的形成是一個繼發(fā)的病生過程,病理學(xué)稱之為非中斷性軸索損傷[6].非中斷性軸索損傷后至延遲性軸索斷裂及軸縮球的形成,這期間是一個復(fù)雜的病理生理學(xué)過程.Glees-Marsland染色、Weil氏染色作為神經(jīng)組織特殊染色方法,可以很好地顯示神經(jīng)纖維軸索、髓鞘的病理學(xué)改變.筆者研究發(fā)現(xiàn)DAI后早期僅可見部分神經(jīng)纖維不規(guī)則增粗、腫脹,呈波浪樣改變,隨著損傷時間的延長,軸索腫脹程度加重,出現(xiàn)了斷裂、軸索球的形成,并于傷后72 h軸索斷裂數(shù)量及范圍達到高峰.在損傷早期僅見少量髓鞘水腫、分層改變,隨著損傷時間的延長,髓鞘出現(xiàn)崩解,髓鞘病變范圍擴大,呈空泡狀、篩網(wǎng)狀改變,于傷后72 h達高峰.上述病理學(xué)改變,主要位于腦干、胼胝體等腦中線部位,腦白質(zhì)部位多見,這與DAI損傷的生物力學(xué)機制有關(guān),也與神經(jīng)纖維的分布有關(guān).特殊染色結(jié)果證實軸索斷裂不是單純外力即可作用所致,“繼發(fā)性腦損傷”因素在DAI的發(fā)展中起著重要的作用.

        NF-κB在神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛存在,并且在腦組織內(nèi)的活性相對高于其他組織.在正常情況下,它以非活性形式存在胞漿中,當細胞受到外界刺激時,NF-κB被激活,并由胞質(zhì)移位至胞核[7].文中研究結(jié)果表明:DAI后1 h,在腦組織內(nèi)可見NF-κB在少量細胞核表達,隨著時間的延長,陽性細胞數(shù)增加,染色加深,傷后24 h,表達達到峰值,持續(xù)到72 h,傷后7 d,仍可見陽性細胞表達,但數(shù)量減少.NF-κB的表達規(guī)律和神經(jīng)纖維損傷程度變化規(guī)律具有某種程度的一致性.

        最新的研究表明,炎癥反應(yīng)參與了DAI的發(fā)生發(fā)展,軸索損傷時髓鞘崩解產(chǎn)物激活炎性細胞,如小膠質(zhì)細胞、巨噬細胞,上調(diào)炎癥因子如腫瘤壞死因子(TNF)-α、(IL)-1等,參與DAI的發(fā)展[1].NF-κB作為真核細胞轉(zhuǎn)錄因子,參與調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄功能,是許多生理活動的分子基礎(chǔ),其中對編碼炎性分子基因的轉(zhuǎn)錄是NF-κB最主要的功能.錢偉等[8]研究發(fā)現(xiàn),顱腦損傷后NF-κB存在高度活化,并長時間維持,通過上調(diào)炎癥因子TNF-α的表達直接或間接導(dǎo)致顱腦的損傷.文中研究結(jié)果表明,DAI后隨著損傷時間的延長,神經(jīng)纖維損傷程度逐漸加重,軸索髓鞘崩解產(chǎn)物增多,NF-κB表達也逐漸增強,提示NF-κB的激活程度和DAI損傷程度有關(guān)聯(lián),可能通過啟動炎癥反應(yīng)通路參與DAI的繼發(fā)性損傷.

        目前DAI尚無特異性的治療手段,這與其發(fā)病機制的復(fù)雜性有關(guān).炎癥反應(yīng)作為新的DAI發(fā)病機制,積極控制炎癥反應(yīng)也應(yīng)是治療DAI的策略之一.NF-κB在DAI中的表達激活提示,它可能通過啟動的炎癥反應(yīng)通路參與DAI的發(fā)生發(fā)展,阻斷NF-κB活化途徑,抑制NF-κB活性,減少NF-κB的活化因素,是可能會成為減輕DAI的有效途徑之一.

        [1] YANG X F,WANG H,WEN L,et al.From Myelin Debris to Inflammatory Responses:A Vicious Circle in Diffuse Axonal Injury[J].Med. Hypotheses,2011,77:60-62.

        [2] ALTAVILLA D,DEODATO B,CAMPO G M,et al.IRFI 042,a Novel Dual Vitamin E-Like Antioxidant,Inhibits a ctivation of Nuclear Factor-Kappa B and Reduces the Inflammatory Response in Myocardial Ischaemia-Reperfusion Injury[J].Cardiovasc Res.,2000,47(3):515-528.

        [3] FODA M A,MARMAROU A.A New Model of Diffuse Brain Injury in Rats.Part II:Morphological Characterization[J].Neurosurg,1994,80(2):301-313.

        [4] C.F.A卡林,著.組織病理學(xué)與組織化學(xué)技術(shù)手冊[M].孔慶雷,譯.第1版.北京:科學(xué)出版社,1982:445-446.

        [5] 申 洪,陸藥丹.免疫組織化學(xué)染色的定量方法研究[J].生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志,1993,10(4):281-284.

        [6] POVLISHOCK J T,CHRISTMAN C W.The Pathobiology of Traumatically Induced Axonal Injury in Animals and Humans:A Review of Current Thoughts[J].J. Neurotrauma,1995,12(3):555-564.

        [7] SEEGERS H,GRILLON E,TRIOULLIER Y,et al.Nuclear Factor-Kappa B Activation in Permanent Intraluminal Focal Cerebral Ischemia in the Rats[J].Neurosci. Lett.,2000,288(3):241-245.

        [8] 錢 偉,錢志遠,沈合春,等.大鼠顱腦損傷后腦NF-κB的活性和NF-κB mRNA表達的變化及意義[J].中華醫(yī)學(xué)雜志,2013(7):2 024-2 027.

        (責任編輯 陳炳權(quán))

        SpecialStainingPathologicChangesandtheExpressionofNF-κBAfterDiffuseAxonalInjuryinRats

        CHEN Renhui1,FAN Zhaohui2,GAO Hui3

        (1.Department of Criminal Sciences and Technology,Fujian Police Institute,Fuzhou 350007,China;2.Criminal Investigation Detachment of Public Security Bureau Cangshan Branch,Fuzhou 350007,China;3.Department of Pharmacology,Medical College of Jishou University,Jishou 416000,Hunan China)

        To observe the pathologic changes and the expression of nuclear factor-kappa B(NF-κB)after diffuse axonal injury(DAI) in rats,its mechanism is firstly explored.The rat DAI model was established.Immunohistochemical SABC method was used to observe the expression of NF-κB,combining Glees-Marsland and Weil staining to observe the pathologic changes in different stage of DAI.Swollen and ruptured axon were found in brain tissue 1 h after DAI,and myelin sheath showed edema,delamination,marked axonal retraction ball and screen shape changes were detected after 24 h,and those morphological changes reached the peak after 72 h.The expression of NF-κB could be detected 1h after injury,the positive cells increased after 3 h,peaked after 24 h,and kept this tendency for 72 h.The positive cells decreased after 7 d.The control group showed negative staining.The findings showed that the expression of NF-κB increased in rat DAI model.The NF-κB may play an important role in secondary axonal injury.

        diffuse axonal injury;special staining;nuclear factor-kappa B(NF-κB);immunohistochemistry

        1007-2985(2014)05-0063-04

        2014-03-20

        福建省教育廳科技項目(JA13339);湖南省科技廳科技計劃資助項目(2013SK3179)

        陳仁輝(1979—),男,安徽寧國人,福建警察學(xué)院刑事科學(xué)技術(shù)系講師,博士生,主要從事閉合性顱腦損傷的分子病理學(xué)研究.

        R89

        B

        10.3969/j.issn.1007-2985.2014.05.015

        猜你喜歡
        軸索髓鞘彌漫性
        聽覺神經(jīng)系統(tǒng)中的髓鞘相關(guān)病理和可塑性機制研究進展
        機械敏感性離子通道TMEM63A在髓鞘形成障礙相關(guān)疾病中的作用*
        彌漫性軸索損傷患者應(yīng)用高壓氧與神經(jīng)節(jié)苷脂聯(lián)合治療的效果研究
        健康之家(2021年19期)2021-05-23 09:10:44
        羊水栓塞和彌漫性血管內(nèi)凝血是如何發(fā)生的
        支氣管鏡技術(shù)在彌漫性肺疾病中的應(yīng)用進展
        人從39歲開始衰老
        腦白質(zhì)病變是一種什么病?
        益壽寶典(2018年1期)2018-01-27 01:50:24
        CT與MRI技術(shù)用于腦彌漫性軸索損傷診斷價值對比評價
        依達拉奉治療彌漫性軸索損傷療效觀察
        Bc1-2與Bcl-6在彌漫性大B細胞淋巴瘤中的表達及意義
        亚洲国产成人手机在线电影| 免费国产在线精品一区| 东北老女人高潮大喊舒服死了| 亚洲精品久久久久中文字幕二区| 精品在免费线中文字幕久久| 久久久精品人妻一区二区三区免费 | 亚洲综合另类小说色区| 特级做a爰片毛片免费看108| jjzz日本护士| 成年人视频在线播放麻豆| 国产精品成人亚洲一区| 欧美性巨大╳╳╳╳╳高跟鞋| 澳门毛片精品一区二区三区| 亚洲天堂av大片暖暖| 91九色成人蝌蚪首页| 国产肥熟女视频一区二区三区| 热久久网站| 人妻乱交手机在线播放| 久久精品国产免费观看三人同眠 | 国语少妇高潮对白在线| 国产黑色丝袜在线观看视频| 日本高清一区二区不卡| 久久天天躁夜夜躁狠狠| 大地资源中文在线观看官网第二页| 国产精品不卡无码AV在线播放| 国产精品久久久黄色片| 久久久亚洲精品一区二区三区 | 91精品国产91久久久无码色戒| 人妻少妇偷人精品一区二区三区| 精品精品国产自在97香蕉| 亚洲午夜精品久久久久久人妖| 日本中文字幕一区二区视频| 森中文字幕一区二区三区免费| 人妻精品动漫h无码网站| 男性一插就想射是因为啥| 日产国产亚洲精品系列| 午夜裸体性播放| 欧美国产亚洲日韩在线二区| 精品女同一区二区三区在线播放器| 天天综合天天爱天天做| 国产女女精品视频久热视频 |