戴利，謝乙明，劉銀娣

(深圳市寶安區(qū)人民醫(yī)院 普外一區(qū)，廣東 深圳 518101)

早期腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)對(duì)大鼠胃缺血再灌注損傷的影響

戴利，謝乙明，劉銀娣

(深圳市寶安區(qū)人民醫(yī)院 普外一區(qū)，廣東 深圳 518101)

目的探討早期腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)對(duì)大鼠胃缺血-再灌注損傷(gastric ischemia- reperfusion injury，GI-RI)的影響及主要作用機(jī)制。方法建立大鼠GI-RI模型，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用隨機(jī)數(shù)字表法分為早期腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)組(early enteral nutrition，EEN)、單純損傷組(I)和正常對(duì)照組(C)，肉眼計(jì)數(shù)胃黏膜損傷指數(shù)、光鏡下行病理評(píng)分、采用比色法檢測(cè)胃黏膜脂質(zhì)過(guò)氧化物丙二醛(maleic dialdehvde,MDA)含量和血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力，并觀察大鼠的體質(zhì)量變化。結(jié)果EEN組和I組的胃黏膜潰瘍指數(shù)、病理評(píng)分、MDA含量、體質(zhì)量下降值在GI-RI后明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，SOD活力明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。EEN組和I組比較，除6 h以外的各時(shí)間點(diǎn)，EEN組胃黏膜損傷指數(shù)、MDA含量、體質(zhì)量下降值均明顯低于I組(P<0.05)，SOD活力高于I組(P<0.01)。72 h病理評(píng)分EEN組低于I組(P<0.05)。結(jié)論早期腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)能明顯減輕大鼠缺血-再灌注后的胃黏膜損傷，其可能機(jī)制是通過(guò)促進(jìn)機(jī)體氧化與抗氧化平衡實(shí)現(xiàn)的。

早期腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng);缺血再灌注;急性胃黏膜損傷;氧化；抗氧化

[Nurs J Chin PLA,2014，31(20)：20-23]

胃缺血-再灌注損傷(gastric ischemia- reperfusion injury，GI-RI)是臨床常見(jiàn)的一種病理生理現(xiàn)象，機(jī)體在嚴(yán)重?zé)齻?、大型手術(shù)、危重疾病等時(shí)發(fā)生的應(yīng)激性黏膜病變(stress related mucosal disease,SRMD)與GI-RI密切相關(guān)[1-3]。而在臨床危重患者中，SRMD的發(fā)生可導(dǎo)致患者住院時(shí)間延長(zhǎng)、身心負(fù)擔(dān)加重，如并發(fā)應(yīng)激性潰瘍出血等，使病死率也隨之增高。早期腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)在預(yù)防SRMD、促進(jìn)機(jī)體康復(fù)方面發(fā)揮著積極作用[4-6]。為了探討早期腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)對(duì)GI-RI的影響及其主要作用機(jī)制，本研究采用大鼠建立GI-RI模型，觀察GI-RI后行早期腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)對(duì)大鼠胃黏膜損傷進(jìn)展的抑制作用，以期為臨床早期合理應(yīng)用腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物模型 健康雄性SD 4月齡大鼠45只，體質(zhì)量250～280 g，由南華大學(xué)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)：SYXK(湘)2010-0006，實(shí)驗(yàn)方法符合動(dòng)物倫理學(xué)要求。實(shí)驗(yàn)前，大鼠禁食18 h，自由飲水。按Wada等[7]方法建立GI-RI模型：給予10%水合氯醛腹腔麻醉，仔細(xì)分離腹腔動(dòng)脈及周?chē)M織，用無(wú)創(chuàng)動(dòng)脈夾夾閉腹腔動(dòng)脈30 min后去除動(dòng)脈夾，形成缺血-再灌注損傷。

1.2 分組 采用隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為早期腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)組(early enteral nutrition，EEN)、單純損傷組(injury,I)及正常對(duì)照組(control,C)。其中EEN組與I組又分為再灌注后6、24、48、72 h 4個(gè)時(shí)間點(diǎn)組，每組5只。正常對(duì)照組5只。(1)EEN組：再灌注2 h后經(jīng)胃腸道灌喂?fàn)I養(yǎng)液，選用德國(guó)Milupa GmbH公司生產(chǎn)的百普素，為短肽型腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)制劑，126 g加水配制成500 ml(1 ml含4.18 kJ)。第1個(gè)24 h攝入量為正常大鼠日需總量[836 kJ/(kg·d)]的1/4，第2個(gè)24 h攝入量為日需總量的1/3，第3個(gè)24 h攝入量為日需總量的1/2，每日6次按時(shí)灌胃，其余時(shí)間自由飲水。(2)I組：再灌注2 h后用同樣喂養(yǎng)方法按時(shí)灌喂等量的生理鹽水，其余時(shí)間自由飲水。(3)C組：無(wú)創(chuàng)傷，取標(biāo)本前禁食18 h，禁水2 h。

1.3 主要試劑盒 脂質(zhì)過(guò)氧化物丙二醛(maleic dialdehvde,MDA)及血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.4 測(cè)定樣品的制備 按照各時(shí)間點(diǎn)予深麻醉處死，取胃迅速測(cè)定胃黏膜損傷指數(shù)，留取腺胃觀察胃黏膜損傷深度并測(cè)定分子生物學(xué)指標(biāo)。

1.5 觀察指標(biāo)

1.5.1 胃黏膜損傷指數(shù)測(cè)定 將每個(gè)鼠胃進(jìn)行編號(hào)后，由一位不參與實(shí)驗(yàn)的觀察者在10倍放大鏡下測(cè)定胃黏膜損傷指數(shù)。按Guth標(biāo)準(zhǔn)[8]：斑點(diǎn)糜爛記為1分，糜爛長(zhǎng)度<1 mm為2分，1～2 mm為3分，2～4 mm為4分，>4 mm為5分；若寬度>1 mm加倍得分。每個(gè)胃所得之總分即為該鼠的胃黏膜損傷指數(shù)。

1.5.2 胃黏膜損傷病理評(píng)分 H-E染色后行病理切片，按Zhang等[9]改良方法進(jìn)行雙盲法評(píng)分。正常胃黏膜為0分；黏膜上皮細(xì)胞輕度損傷為1分；黏膜上皮細(xì)胞廣泛損傷，胃小凹細(xì)胞破壞、片狀脫落為2分；涉及胃底腺細(xì)胞損傷為3分。在400倍高倍視野下計(jì)算6個(gè)視野平均分作為該標(biāo)本的胃黏膜損傷病理評(píng)分。

1.5.3 胃黏膜MDA含量、SOD活力測(cè)定 采用硫代巴比妥比色法測(cè)定胃黏膜MDA含量，黃嘌呤氧化酶法測(cè)定胃黏膜SOD活力。

1.5.4 體質(zhì)量變化 在術(shù)前及術(shù)后72 h(麻醉后，取標(biāo)本前)稱(chēng)大鼠體質(zhì)量。

2 結(jié)果

2.1 組織學(xué)結(jié)果

2.1.1 胃黏膜損傷指數(shù) 缺血-再灌注后6 h，肉眼可見(jiàn)胃黏膜點(diǎn)狀、條索狀和片狀糜爛、潰瘍及大量出血點(diǎn)。EEN組、I組各時(shí)間點(diǎn)與C組胃黏膜損傷指數(shù)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。其中I組于再灌注24 h損傷達(dá)到高峰，EEN組于6 h達(dá)到高峰，以后損傷面積逐漸減少。EEN組與I組比較，除再灌注6 h外，其余各時(shí)間點(diǎn)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠不同灌注時(shí)間

a:與C組比較,P<0.01；b:與EEN組比較,P<0.01

2.1.2 病理切片 缺血-再灌注后6 h，光鏡下可見(jiàn)胃黏膜表面上皮細(xì)胞大片脫落和纖維蛋白滲出，黏膜下層有出血，血管內(nèi)充血，可見(jiàn)大量紅細(xì)胞，胃黏膜結(jié)構(gòu)排列紊亂，失去連續(xù)性及完整性，可見(jiàn)中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，黏膜損傷未達(dá)肌層。再灌注48 h，EEN組與I組均發(fā)現(xiàn)有深達(dá)肌層的潰瘍形成，72 h時(shí)損傷減輕。EEN組、I組各時(shí)間點(diǎn)與C組病理評(píng)分比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；EEN組與I組比較，僅在再灌注72 h時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

2.2 MDA含量 缺血-再灌注后，MDA含量先升高后降低，EEN組于再灌注6 h達(dá)高峰，I組于再灌注24 h達(dá)高峰，以后均逐漸下降。EEN組、I組與C組的MDA含量在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；EEN組與I組在24、48 h(P<0.01)與72 h (P<0.05)差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠不同灌注時(shí)間胃黏膜MDA、SOD、體質(zhì)量變化值比較

與C組比較，a：P<0.05，b:P<0.01；與EEN組比較,c：P<0.05，d：P<0.01

2.3 SOD活力 缺血-再灌注后，SOD活力先降低后升高，EEN組于再灌注6 h達(dá)最低值，I組于再灌注24 h達(dá)最低值，以后均逐漸上升。EEN組、I組與C組的SOD活力在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；EEN組與I組在24、48、72 h也均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)，見(jiàn)表2。

2.4 體質(zhì)量變化 缺血-再灌注后，大鼠體質(zhì)量下降明顯，EEN組、I組體質(zhì)量下降值與C組比較在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；EEN組與I組在24、48、72 h也均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，見(jiàn)表2。

3 討論

本研究中，EEN組與I組在再灌注后6 h即可見(jiàn)明顯的出血性損傷，胃黏膜的完整性破壞;損傷在再灌注后24 h內(nèi)以淺表侵蝕為主，48 h后可見(jiàn)潰瘍形成，表明GI-RI造成了大鼠急性胃黏膜損傷。相比I組，EEN組的損傷面積和深度于再灌注6 h后即開(kāi)始下降，而I組卻在再灌注24 h時(shí)損傷達(dá)到高峰，表明早期腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)抑制了缺血-再灌注的損傷進(jìn)展，促進(jìn)了大鼠胃黏膜損傷的愈合。

在體質(zhì)量變化指標(biāo)上，可以看出，大鼠術(shù)后體質(zhì)量較術(shù)前明顯減輕。在手術(shù)應(yīng)激狀態(tài)下，大鼠的神經(jīng)內(nèi)分泌反應(yīng)加強(qiáng)，交感神經(jīng)興奮，腎上腺素、去甲腎上腺素等兒茶酚胺物質(zhì)大量釋放，同時(shí)胰高血糖素、皮質(zhì)醇激素分泌增加，而合成代謝激素相對(duì)減少，出現(xiàn)耗氧量、能量消耗增加及負(fù)氮平衡，導(dǎo)致機(jī)體呈現(xiàn)負(fù)氮平衡的狀態(tài)。但EEN組體質(zhì)量指標(biāo)優(yōu)于I組，可能與試驗(yàn)用營(yíng)養(yǎng)液為百普素，由蛋白水解物為氮源所組成的營(yíng)養(yǎng)劑經(jīng)少量消化過(guò)程即可吸收有關(guān)；同時(shí)，根據(jù)大鼠胃腸道狀態(tài)和機(jī)體需要量，由少到多給予，在考慮大鼠耐受性的情況下保證了部分能量的供給。

綜上所述，早期腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)可通過(guò)促進(jìn)機(jī)體氧化與抗氧化平衡，減輕缺血-再灌注后胃黏膜的損傷，促進(jìn)胃黏膜愈合。早期腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)對(duì)于GI-RI的防治具有積極的效果，有助于減少SRMD的發(fā)生。在能量供給上，可根據(jù)胃腸道的狀態(tài)適當(dāng)增加營(yíng)養(yǎng)的攝入和胃腸外營(yíng)養(yǎng)，減輕機(jī)體高代謝狀態(tài)下的負(fù)氮平衡及各種并發(fā)癥，促進(jìn)機(jī)體的恢復(fù)[13]。

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(本文編輯：仇瑤琴)

TheEffectsofEarlyEnteralNutritiononRatsGastricIschemiaReperfusionInjury

Dai Li，Xie Yiming，Liu Yindi

(First Ward of General Surgery，People’s Hospital of Baoan District of Shenzheng，Shenzheng 518101，Guangdong Province，China)

ObjectiveTo investigate the effects of early enteral nutrition on rats gastric ischemia reperfusion injury.MethodsSetting GI-RI mode，and the rats were randomly divided into 3 groups：early enteral nutrition group(EEN group)，injury group(I group)，and control group(C group).Gastric mucosal injury index，light microscope pathological score，gastric mucous membrane lipid peroxide MDA and vitality of serum superoxide dismutase was tested by using colorimetric method，and body mass change were observed.ResultsThe gastric mucosal injury index，pathological score，the content of MDA，the value of weight loss in both EEN group and injury group were higher than those in control group after GI-RI (P<0.05).Meanwhile，the activity of SOD were lower than control group (P<0.05).The gastric mucosal injury index，the content of MDA，the value of weight loss exhibited significant decrease in EEN group compared with injury group at all time points except 6 h after the reperfusion (P<0.05)，and the activity of SOD was higher than injury group(P<0.01).The pathological score was lower in EEN group than injury group at 72 h after reperfusion(P<0.05).ConclusionThis study shows that early enteral nutrition exhibits a gastro protective effect against acute gastric mucosal lesions in rats induced by ischemia-reperfusion，which probably involves promoting the balance of peroxidation and antioxidation.

early enteral nutrition;ischemia-reperfusion;acute gastric mucosal lesion;oxidation;antioxidation

2014-02-26

2014-06-29

戴利，碩士，主管護(hù)師，研究方向?yàn)榕R床護(hù)理學(xué)、護(hù)理教育學(xué)

10.3969/j.issn.1008-9993.2014.20.006

R197.323

A

1008-9993(2014)20-0020-04