劉俊慧 閭愛斌 徐士榮 徐紅珍 張善輝

肝細胞癌患者血清中MMP-9、m-AST檢測的臨床意義

劉俊慧 閭愛斌 徐士榮 徐紅珍 張善輝

目的 探討肝細胞癌患者檢測基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶線粒體同工酶(m-AST)的臨床意義。方法 對40例肝細胞癌(不同病情)患者(肝細胞癌組)與40例對照組血清中MMP-9、m-AST檢測結(jié)果進行比較。結(jié)果 肝細胞癌組與對照組血清中MMP-9、m-AST比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；肝細胞癌患者血清中MMP-9、m-AST與患者有無合并腹水、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、病理分化程度有關(guān), 其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 MMP-9、m-AST與肝細胞癌密切相關(guān), 可能是肝細胞癌的診斷和治療的重要線索, 其濃度水平對肝細胞癌的病情變化具有重要的價值。

基質(zhì)金屬蛋白酶-9；天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶線粒體同工酶 ；肝細胞癌

中國肝癌的發(fā)病率僅次于肺癌和胃癌, 而其死亡率在中國腫瘤病中列第二位［1］。肝細胞癌是原發(fā)性肝癌的主要類型,其發(fā)病過程復(fù)雜, 很多機制尚不明確。本研究通過測定肝細胞癌患者血清中MMP-9、m-AST, 觀察這兩種酶在肝細胞癌發(fā)生、發(fā)展中所起的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 40例肝細胞癌患者均來源于本院2012年2月~2014年2月腫瘤科住院的患者。其中男29例, 女11例,年齡32~71歲, 平均年齡(52.8±15.3)歲。所有患者均經(jīng)過病理組織學(xué)確診, 且臨床分期明確。對照組40例為本院體檢中心健康體檢者。兩組一般資料比較, 差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05), 具有可比性。

1.2 方法 80例受試者均空腹12 h, 清晨采靜脈血4 ml于一次性真空采血管中, 在1 h內(nèi)以3000 r/min離心10 min分離血清置于-30℃冰箱保存待測。MMP-9用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗( ELISA) 法檢測( 試劑盒為深圳晶美公司產(chǎn)品) , 用抗人單克隆抗體預(yù)包被酶聯(lián)板, 加入待測樣品及標準品, 再加酶標抗體, 催化顯色, 使用瑞士TECAN 全自動酶聯(lián)檢測儀測光密度值, 根據(jù)標準曲線測得樣品濃度。m-AST的活性用速率法原理檢測, 首先運用免疫抑制法的原理, 使用特異性抗體抑制血清中天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶細胞質(zhì)同工酶(s-AST)的活性, 而保留m-AST的活性, 然后加入底物L-天門冬氨酸和α-酮戊二酸反應(yīng)生成草酰乙酸和L-谷氨酸。草酰乙酸再跟指示系統(tǒng)還原輔酶(NADH)反應(yīng)在340 nm處, 連續(xù)監(jiān)測NADH下降吸光度值, 通過下降速率計算m-AST濃度。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理。計量資料以均數(shù)±標準差( x-±s)表示, 采用t檢驗；多組間比較用方差分析。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肝細胞癌組與對照組血清中MMP-9、m-AST比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05), 見表1。

表1 肝細胞癌組與對照組MMP-9、m-AST比較( x-±s)

2.2 肝細胞癌患者血清中MMP-9、m-AST水平與病情情況分析 肝細胞癌患者血清中MMP-9、m-AST與患者有無合并腹水、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、病理分化程度有關(guān), 其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05), 見表2。

表2 肝細胞癌患者血清中MMP-9、m-AST水平與病情情況分析( x-±s)

3 討論

MMP-9正常情況下主要由纖維母細胞、巨噬細胞等間質(zhì)細胞合成, 以非活性酶原的形式存在于細胞周圍。無活性的基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)可被其他的 MMPs 或纖溶酶激活?；罨?MMP-9 主要功能是降解破壞細胞外基質(zhì)中最主要的組份Ⅰ、Ⅳ型膠原和Ⅰ、Ⅴ型明膠。有研究表明 MMP-9 參與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移主要與下面幾方面作用有關(guān)： ①降解細胞外基質(zhì)(ECM), 破壞 ECM 的完整性； ②促進腫瘤的新生血管形成； ③調(diào)節(jié)細胞粘附和生長［2,3］。

天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase, AST)廣泛存在于人體各組織細胞中, 尤其以肝臟細胞、心肌細胞含量最為豐富, AST分為胞漿型AST(cytosolic AST, c-AST)和線粒體型AST(mitochondrial AST, m-AST)［4,5］。正常情況下, 血清中主要存在的是 s-AST, m-AST活性在10% 以下, 但當肝細胞壞死或線粒體崩解時, 血清中m-AST顯著升高, 則提示有活動性肝細胞損傷。

本研究證實, 肝細胞癌患者血清中MMP-9、m-AST水平明顯高于健康對照組, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。此外,肝細胞癌患者血清中MMP-9、m-AST水平的升高還跟患者的病情情況密切相關(guān), 它們對腫瘤的性質(zhì)和發(fā)展有重要影響,可能共同促進了肝細胞癌的發(fā)生和發(fā)展, 但具體機制還有待進一步研究, 有可能是肝細胞癌的診斷和治療的重要線索。

［1］ Ferlay J, Shin HR, Bray F, et al.Estimates of worldwide burden of cancer in 2008.Int J Cancer, 2010, 127(12):2893-2917.

［2］ Parson SL, Watson SA, Brown PD, et al.Matrix metal lopreoteinases.Br J Surg, 1997(84):160.

［3］ Reimers N, Zafrakas K, Assmann V, et al.Expression of extracellular matrix metalloproteases inducer on micrometastatic and primary mammary carcinoma cells.Clin Cancer Res, 2004(10):3422-3428.

［4］ 魏晨玲, 張淑蘭.天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶線粒體同工酶的應(yīng)用價值與研究進展.國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志, 2006, 27(12):1102-1103.［5］ 張顯坤, 張強.血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶線粒體同工酶、視黃醇結(jié)合蛋白濃度在肝臟疾病的臨床價值.檢驗醫(yī)學(xué), 2011, 26(5):348-350.

Clinical significance of serum MMP-9 and m-AST detection in hepatocellular carcinoma

LIU Jun-

hui, LYU Ai-bin, XU Shi-rong, et al.Department of Clinical Laboratory, Taizhou Second Affiliated Hospital of Yangzhou University, Taizhou 225599, China

Objective To investigate the clinical significance of matrix metallo preteinases-9 (MMP-9) and mitochondrial aspartic transaminase (m-AST) detection in hepatocellular carcinoma.Methods Levels of serum MMP-9 and m-AST of 40 patients of hepatocellular carcinoma with different conditions (hepatocellular carcinoma group) and 40 control cases were compared.Results The differences of serum MMP-9 and m-AST between hepatocellular carcinoma group and control group had statistical significance (P<0.05).Levels of serum MMP-9 and m-AST of hepatocellular carcinoma cases were related with ascites, tumor quantity and size, differentiation grade, and the differences were statistically significant (P<0.05).Conclusion MMP-9 and m-AST have close relation with hepatocellular carcinoma, and they play important roles in diagnosis and treatment of hepatocellular carcinoma.Concentration levels of MMP-9 and m-AST have important value for change of hepatocellular carcinoma.

Matrix metalloproteinase-9; Mitochondrial aspartic transaminase; Hepatocellular carcinoma

2014-06-05］

225599 揚州大學(xué)附屬泰州市第二人民醫(yī)院檢驗科