宋魏 于慶凱

·實(shí)驗(yàn)研究·

miR-150再表達(dá)通過靶向c-Myb誘導(dǎo)EBV陽性Burkitt淋巴瘤分化

宋魏 于慶凱

目的 探討miR-150再表達(dá)通過靶向c-Myb誘導(dǎo)EBV陽性Burkitt淋巴瘤的分化機(jī)制。方法 使用再表達(dá)后的miR-150基因, 分別對EBV陽性和EBV陰性的Burkitt淋巴瘤進(jìn)行分化誘導(dǎo),并利用流式細(xì)胞技術(shù), 對比分析分化后細(xì)胞的免疫表型及細(xì)胞大小。結(jié)果 流式細(xì)胞技術(shù)分析結(jié)果中, EBV陽性細(xì)胞群中CD19蛋白中的熒光蛋白比例及miR-150比例均明顯低于EBV陰性細(xì)胞群, 且EBV陽性組的細(xì)胞大小及細(xì)胞器數(shù)量較EBV陰性組均明顯增多, 組間分析結(jié)果的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 miR-150的再表達(dá)可通過靶向誘導(dǎo)c-Myb的表達(dá), 使EBV陽性Burkitt淋巴瘤向正常細(xì)胞分化, 具有較高的治療應(yīng)用價(jià)值。

miR-150再表達(dá)；靶向c-Myb誘導(dǎo)；EBV陽性Burkitt淋巴瘤；分化機(jī)制

Burkitt淋巴瘤是侵襲性較強(qiáng)的細(xì)胞性淋巴瘤, 現(xiàn)階段的常用療法往往伴隨較大的副作用, 因此需積極研究更安全有效的治療方法。有研究表明, miRNA可通過靶向調(diào)控,使腫瘤細(xì)胞向正常細(xì)胞方向分化［1］。現(xiàn)對miR-150再表達(dá)對EBV陽性Burkitt淋巴瘤的誘導(dǎo)分化機(jī)制進(jìn)行研究, 探討miR-150誘導(dǎo)分化作用對Burkitt淋巴瘤的治療價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)抽取EBV陽性的Burkitt淋巴瘤細(xì)胞系及EBV陰性的Burkitt淋巴瘤細(xì)胞系, 均為本院實(shí)驗(yàn)室保存完好、未發(fā)生外源性感染的細(xì)胞系。將兩組細(xì)胞系分別置于含有15%胎牛血清的培養(yǎng)基中進(jìn)行細(xì)胞增殖培養(yǎng), 培養(yǎng)箱內(nèi)的環(huán)境條件設(shè)為37℃、含氧濃度90%。培養(yǎng)1～2 d后取對數(shù)期、分化情況良好的細(xì)胞作為本次的實(shí)驗(yàn)對象。兩組細(xì)胞群的一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 方法 兩組細(xì)胞分別進(jìn)行下述處理：①對混有細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)液進(jìn)行離心處理, 在室溫下離心5～7 min后取下部沉淀物, 裂解處理后再行離心, 并提取細(xì)胞的總RNA；②按照TAKARA試劑盒的操作要求, 對所得的細(xì)胞總RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄操作, 并在相同條件下培養(yǎng)對應(yīng)細(xì)胞, 將逆轉(zhuǎn)錄后所得的cDNA重新置入細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行蛋白質(zhì)表達(dá)；③利用蛋白提取試劑盒提取細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì), 使用BCA法測定蛋白質(zhì)濃度；④使用Ⅰ抗洗滌液按照1：104的比例對c-Myb抗體進(jìn)行稀釋,并對抗體進(jìn)行熒光細(xì)胞(GFP)染色；⑤當(dāng)細(xì)胞計(jì)數(shù)≥1×107/ml時(shí), 吸取100～200 μl細(xì)胞, 并加入染色后抗體, 離心處理后取懸濁物, 對其進(jìn)行流式細(xì)胞技術(shù)分析。

1.3 觀察指標(biāo) 在顯微鏡視野下, 分別觀察兩組細(xì)胞群中CD19的GFP和miR-150的百分比, 同時(shí)觀察兩組細(xì)胞群中FS及SS的百分比, 以此判斷細(xì)胞的大小及細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器的多少。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采取SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

流式細(xì)胞技術(shù)分析共進(jìn)行4次, 取平均值作為最終結(jié)果。結(jié)果顯示, EBV陽性細(xì)胞群中CD19蛋白中的熒光蛋白比例及miR-150比例均低于EBV陰性細(xì)胞群, 且EBV陽性組的細(xì)胞大小及細(xì)胞器數(shù)量均明顯增多, 組間分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組細(xì)胞群分析結(jié)果比較( x-±s, %)

3 討論

miR-150屬miRNA范疇, 是內(nèi)源性RNA小分子物質(zhì),具有時(shí)序性、細(xì)胞特異性等特點(diǎn), 可在轉(zhuǎn)錄后的基因表達(dá)過程產(chǎn)生水平調(diào)控作用, 即可促進(jìn)基因的負(fù)性表達(dá)。有研究表明, miR-150是B淋巴細(xì)胞正常分化的重要因子, 其在Burkitt淋巴瘤細(xì)胞中的表達(dá)呈現(xiàn)出低表達(dá)特點(diǎn)［2］。c-Myb是原癌基因的一種, 是正常B細(xì)胞向腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程中的關(guān)鍵性調(diào)控基因。miR-150通過對c-Myb基因表達(dá)過程的負(fù)性調(diào)節(jié), 可控制腫瘤細(xì)胞向正常細(xì)胞分化, 從而達(dá)到誘導(dǎo)Burkitt淋巴瘤細(xì)胞正常分化的目的［3］。本次研究結(jié)果顯示, EBV陽性的Burkitt淋巴瘤細(xì)胞的細(xì)胞免疫性明顯低于EBV陰性細(xì)胞, 且陽性組的細(xì)胞大小及細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器數(shù)量均明顯高于EBV陰性組。分析miR-150對EBV陰性細(xì)胞無明顯影響的原因?yàn)椋宏栃约?xì)胞起源于記憶B細(xì)胞或生發(fā)中心細(xì)胞,而陰性細(xì)胞的主要來源則為早期母細(xì)胞。

綜上所述, miR-150可通過靶向誘導(dǎo)c-Myb的再表達(dá),使EBV陽性Burkitt淋巴瘤細(xì)胞向正常細(xì)胞分化, 具有較高的治療價(jià)值。

［1］ 王志林, 李桑, 孫冠星, 等.彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤中miR-30a、 miR-155表達(dá)與MYC基因重排的關(guān)系.臨床檢驗(yàn)雜志, 2012, 30(8):625-626.

［2］ 賀榮芳, 趙強(qiáng), 王婧, 等.miR-23a與RUNX1在惡性淋巴瘤中的表達(dá)及其臨床意義.中國腫瘤臨床, 2012, 29(10):674-678.

［3］ 劉棋, 閆慧芝, 溫振科.miRNA與淋巴瘤發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展.中華腫瘤防治雜志, 2011, 18(23):1897-1900.

2014-08-22］

河南省衛(wèi)生廳科技攻關(guān)項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：200803121)

450008 鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院病理科

于慶凱