房海靈　盧艷花　聶等

摘要：通過單因素試驗結(jié)合響應(yīng)面法對廣東紫珠中總黃酮的提取工藝進行優(yōu)化研究。以乙醇濃度、料液比、提取時間為自變量，總黃酮提取率為響應(yīng)值，設(shè)計3因素 3水平響應(yīng)面分析試驗，來確定廣東紫珠總黃酮最佳超聲提取工藝。超聲波法提取廣東紫珠中總黃酮的優(yōu)化條件為：提取溶劑66%乙醇，料液比1 ∶42，提取時間為44 min；該條件下，總黃酮得率可達到16.15%。

關(guān)鍵詞：廣東紫珠；總黃酮；超聲波提??；響應(yīng)面法

中圖分類號： R284.2 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2014）07-0265-03

收稿日期：2013-10-25

基金項目：國家自然科學(xué)青年基金（編號：81102799）；江西省科技支撐計劃（編號：20111BBG70030-4）；江西省博士后科研擇優(yōu)資助項目；江西省財政林業(yè)專項（編號：2011511201）。

作者簡介：房海靈（1983—），女，山西晉中人，博士，助理研究員，主要從事藥用植物資源及質(zhì)量評價研究。Tel：（0791）83833641；E-mail：fanghailing2013@163.com。

通信作者：朱培林，研究員，主要從事森林藥材與食品研究。Tel：（0791）83833803；E-mail：yczpl@126.com。廣東紫珠（Callicarpa kwangtungensis Chun.）為馬鞭草科（Verbenaceae）紫珠屬（Callicarpa L.）多年生落葉灌木，別名萬年青、珍珠風(fēng)、臭常山、老鴉飯、金刀菜等。2010年版《中國藥典》收載[1]，廣東紫珠以干燥莖、葉入藥，其味苦、澀，性涼，具有收斂止血、散瘀、清熱解毒之功效，臨床上常用于治療宮頸糜爛出血、陰道炎、宮頸炎等癥。研究表明，廣東紫珠的主要化學(xué)成分為黃酮、苯乙醇苷、萜類及揮發(fā)油等。其中黃酮類成分如木犀草素、鼠李秦素等具有顯著的抗菌、消炎、抗病毒、抗腫瘤等藥理作用[2-6]，因此，研究廣東紫珠黃酮類化合物的提取工藝對廣東紫珠的進一步開發(fā)利用具有重要意義。

1材料與方法

1.1材料

試驗材料為廣東紫珠，于2011年10月采自江西省萍鄉(xiāng)市蘆溪縣。主要試劑：蕓香苷對照品購于中國藥品生物制品檢定所（批號100802200306）。無水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉等均為分析純。主要儀器：FA1104電子天平，CTXNW 循環(huán)超聲提取機，754型紫外可見分光光度計。

1.2測定方法

1.2.1標準曲線建立精確稱取105 ℃干燥恒重的蕓香苷對照品25.90 mg，加70%乙醇溶解并定容至25 mL中，搖勻得質(zhì)量濃度1.036 mg/mL的對照品溶液，取1 mL對照品溶液至10 mL容量瓶中定容。分別取上述蕓香苷對照品溶液0、0.1、0.5、1.0、2.0、3.0 mL于6個10 mL容量瓶中，各加入5% NaNO2溶液0.3 mL，搖勻，放置6 min后加入10% Al（NO3）3溶液0.3 mL，搖勻，6 min后加入4% NaOH溶液 2 mL，混勻，70%乙醇定容至刻度。10 min后于510 nm處測吸光度，空白試劑為參比，以吸光度為縱坐標、蕓香苷質(zhì)量濃度為橫坐標繪制標準曲線，用最小二乘法進行線性回歸，得蕓香苷質(zhì)量濃度與吸光度間回歸方程：D=1.036C+0.016，r=0.997。

1.2.2供試樣品總黃酮含量測定稱取廣東紫珠粉末 0.2 g，加入提取溶液浸泡12 h后，進行提取，過濾，得樣品溶液，備用。取1 mL樣品溶液至10 mL容量瓶中定容，精密量取2 mL上述溶液，按照上述建立標準曲線的方法，依次加入NaNO2溶液、Al（NO3）3溶液和NaOH溶液，混勻，70%乙醇定容至刻度。靜置10 min后測定吸光度，根據(jù)回歸方程計算樣品中總黃酮含量。

1.3提取方法確定

在相同提取溫度、提取溶劑、料液比條件下，采用超聲波和回流提取法對廣東紫珠總黃酮進行提取，超聲波提取總黃酮得率為15.43%，高于回流提?。?.98%）。此外，超聲波提取操作簡單，具有省時、高效、節(jié)能的優(yōu)點，故本試驗采用超聲波提取法。

1.4超聲波輔助提取總黃酮的單因素試驗

分別以乙醇濃度、料液比、提取時間、提取溫度為單因素，考察各單因素對廣東紫珠總黃酮得率的影響。每個單因素水平重復(fù)3次，測其吸光值。

1.5響應(yīng)面分析法優(yōu)化超聲波輔助提取總黃酮的工藝參數(shù)

在單因素試驗的基礎(chǔ)上，確定Box-Behnken設(shè)計的自變量，運用Design-Expert 8.0.5軟件程序，根據(jù)Box-Behnken中心組合試驗設(shè)計原理[7-9]，采用3因素3水平的響應(yīng)面分析法，以總黃酮得率為響應(yīng)值作響應(yīng)面，對提取條件進行優(yōu)化。

2結(jié)果與分析

2.1超聲波輔助提取廣東紫珠總黃酮的單因素試驗結(jié)果

2.1.1乙醇濃度對總黃酮得率的影響精確稱取廣東紫珠粉末0.2 g，以料液比1 g ∶40 mL分別加入40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%乙醇溶液8 mL，50 ℃下作用 30 min，進行超聲波提取，結(jié)果見圖1。乙醇濃度在40%～70%范圍內(nèi)，總黃酮得率隨乙醇濃度增加而增加，70%乙醇濃度廣東紫珠總黃酮得率最高為15.69%，顯著高于其他乙醇濃度的得率。乙醇濃度選用60%、70%、80%作為響應(yīng)面試驗的3個水平。70%顯著高于其他乙醇濃度的得率，因此，乙醇濃度選用70%。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典：一部[M]. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：40.

[2]周伯庭，李新中，鐘廣蓉，等. 廣東紫珠地上部位主要藥效學(xué)試驗[J]. 中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2006，16（2）：204-206.

[3]周伯庭，李新中，徐平聲，等. 廣東紫珠地上部位化學(xué)成分研究（Ⅰ）[J]. 中南藥學(xué)，2004，2（4）：238-239.

[4]陳艷華，馮鋒，任冬春，等. 廣東紫珠地上部分的化學(xué)成分[J]. 中國天然藥物，2008，6（2）：120-122.

[5]賈安，楊義芳，孔德云，等. 廣東紫珠超臨界提取物的GC-MS成分分析及體外抗菌活性[J]. 中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2012，43（3）：178-181.

[6]賈安，楊義芳，孔德云，等. 廣東紫珠揮發(fā)油化學(xué)成分的GC-MS分析及體外抗菌活性[J]. 中藥材，2012，35（3）：415-418.

[7]李君玲. 紫荊皮總黃酮超聲提取工藝優(yōu)化[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（7）：266-267.

[8]Box G P，Hunter W G，Hunter J S. Statistics for experimenters，an introduction to design，data analysis and model building[M]. New York：John Wiley and Sons，1990.

[9]栗紅生. 冬凌草總黃酮提取工藝的正交設(shè)計優(yōu)化[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（5）：237-238.endprint

摘要：通過單因素試驗結(jié)合響應(yīng)面法對廣東紫珠中總黃酮的提取工藝進行優(yōu)化研究。以乙醇濃度、料液比、提取時間為自變量，總黃酮提取率為響應(yīng)值，設(shè)計3因素 3水平響應(yīng)面分析試驗，來確定廣東紫珠總黃酮最佳超聲提取工藝。超聲波法提取廣東紫珠中總黃酮的優(yōu)化條件為：提取溶劑66%乙醇，料液比1 ∶42，提取時間為44 min；該條件下，總黃酮得率可達到16.15%。

關(guān)鍵詞：廣東紫珠；總黃酮；超聲波提取；響應(yīng)面法

中圖分類號： R284.2 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2014）07-0265-03

收稿日期：2013-10-25

基金項目：國家自然科學(xué)青年基金（編號：81102799）；江西省科技支撐計劃（編號：20111BBG70030-4）；江西省博士后科研擇優(yōu)資助項目；江西省財政林業(yè)專項（編號：2011511201）。

作者簡介：房海靈（1983—），女，山西晉中人，博士，助理研究員，主要從事藥用植物資源及質(zhì)量評價研究。Tel：（0791）83833641；E-mail：fanghailing2013@163.com。

通信作者：朱培林，研究員，主要從事森林藥材與食品研究。Tel：（0791）83833803；E-mail：yczpl@126.com。廣東紫珠（Callicarpa kwangtungensis Chun.）為馬鞭草科（Verbenaceae）紫珠屬（Callicarpa L.）多年生落葉灌木，別名萬年青、珍珠風(fēng)、臭常山、老鴉飯、金刀菜等。2010年版《中國藥典》收載[1]，廣東紫珠以干燥莖、葉入藥，其味苦、澀，性涼，具有收斂止血、散瘀、清熱解毒之功效，臨床上常用于治療宮頸糜爛出血、陰道炎、宮頸炎等癥。研究表明，廣東紫珠的主要化學(xué)成分為黃酮、苯乙醇苷、萜類及揮發(fā)油等。其中黃酮類成分如木犀草素、鼠李秦素等具有顯著的抗菌、消炎、抗病毒、抗腫瘤等藥理作用[2-6]，因此，研究廣東紫珠黃酮類化合物的提取工藝對廣東紫珠的進一步開發(fā)利用具有重要意義。

1材料與方法

1.1材料

試驗材料為廣東紫珠，于2011年10月采自江西省萍鄉(xiāng)市蘆溪縣。主要試劑：蕓香苷對照品購于中國藥品生物制品檢定所（批號100802200306）。無水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉等均為分析純。主要儀器：FA1104電子天平，CTXNW 循環(huán)超聲提取機，754型紫外可見分光光度計。

1.2測定方法

1.2.1標準曲線建立精確稱取105 ℃干燥恒重的蕓香苷對照品25.90 mg，加70%乙醇溶解并定容至25 mL中，搖勻得質(zhì)量濃度1.036 mg/mL的對照品溶液，取1 mL對照品溶液至10 mL容量瓶中定容。分別取上述蕓香苷對照品溶液0、0.1、0.5、1.0、2.0、3.0 mL于6個10 mL容量瓶中，各加入5% NaNO2溶液0.3 mL，搖勻，放置6 min后加入10% Al（NO3）3溶液0.3 mL，搖勻，6 min后加入4% NaOH溶液 2 mL，混勻，70%乙醇定容至刻度。10 min后于510 nm處測吸光度，空白試劑為參比，以吸光度為縱坐標、蕓香苷質(zhì)量濃度為橫坐標繪制標準曲線，用最小二乘法進行線性回歸，得蕓香苷質(zhì)量濃度與吸光度間回歸方程：D=1.036C+0.016，r=0.997。

1.2.2供試樣品總黃酮含量測定稱取廣東紫珠粉末 0.2 g，加入提取溶液浸泡12 h后，進行提取，過濾，得樣品溶液，備用。取1 mL樣品溶液至10 mL容量瓶中定容，精密量取2 mL上述溶液，按照上述建立標準曲線的方法，依次加入NaNO2溶液、Al（NO3）3溶液和NaOH溶液，混勻，70%乙醇定容至刻度。靜置10 min后測定吸光度，根據(jù)回歸方程計算樣品中總黃酮含量。

1.3提取方法確定

在相同提取溫度、提取溶劑、料液比條件下，采用超聲波和回流提取法對廣東紫珠總黃酮進行提取，超聲波提取總黃酮得率為15.43%，高于回流提?。?.98%）。此外，超聲波提取操作簡單，具有省時、高效、節(jié)能的優(yōu)點，故本試驗采用超聲波提取法。

1.4超聲波輔助提取總黃酮的單因素試驗

分別以乙醇濃度、料液比、提取時間、提取溫度為單因素，考察各單因素對廣東紫珠總黃酮得率的影響。每個單因素水平重復(fù)3次，測其吸光值。

1.5響應(yīng)面分析法優(yōu)化超聲波輔助提取總黃酮的工藝參數(shù)

在單因素試驗的基礎(chǔ)上，確定Box-Behnken設(shè)計的自變量，運用Design-Expert 8.0.5軟件程序，根據(jù)Box-Behnken中心組合試驗設(shè)計原理[7-9]，采用3因素3水平的響應(yīng)面分析法，以總黃酮得率為響應(yīng)值作響應(yīng)面，對提取條件進行優(yōu)化。

2結(jié)果與分析

2.1超聲波輔助提取廣東紫珠總黃酮的單因素試驗結(jié)果

2.1.1乙醇濃度對總黃酮得率的影響精確稱取廣東紫珠粉末0.2 g，以料液比1 g ∶40 mL分別加入40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%乙醇溶液8 mL，50 ℃下作用 30 min，進行超聲波提取，結(jié)果見圖1。乙醇濃度在40%～70%范圍內(nèi)，總黃酮得率隨乙醇濃度增加而增加，70%乙醇濃度廣東紫珠總黃酮得率最高為15.69%，顯著高于其他乙醇濃度的得率。乙醇濃度選用60%、70%、80%作為響應(yīng)面試驗的3個水平。70%顯著高于其他乙醇濃度的得率，因此，乙醇濃度選用70%。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典：一部[M]. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：40.

[2]周伯庭，李新中，鐘廣蓉，等. 廣東紫珠地上部位主要藥效學(xué)試驗[J]. 中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2006，16（2）：204-206.

[3]周伯庭，李新中，徐平聲，等. 廣東紫珠地上部位化學(xué)成分研究（Ⅰ）[J]. 中南藥學(xué)，2004，2（4）：238-239.

[4]陳艷華，馮鋒，任冬春，等. 廣東紫珠地上部分的化學(xué)成分[J]. 中國天然藥物，2008，6（2）：120-122.

[5]賈安，楊義芳，孔德云，等. 廣東紫珠超臨界提取物的GC-MS成分分析及體外抗菌活性[J]. 中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2012，43（3）：178-181.

[6]賈安，楊義芳，孔德云，等. 廣東紫珠揮發(fā)油化學(xué)成分的GC-MS分析及體外抗菌活性[J]. 中藥材，2012，35（3）：415-418.

[7]李君玲. 紫荊皮總黃酮超聲提取工藝優(yōu)化[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（7）：266-267.

[8]Box G P，Hunter W G，Hunter J S. Statistics for experimenters，an introduction to design，data analysis and model building[M]. New York：John Wiley and Sons，1990.

[9]栗紅生. 冬凌草總黃酮提取工藝的正交設(shè)計優(yōu)化[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（5）：237-238.endprint

摘要：通過單因素試驗結(jié)合響應(yīng)面法對廣東紫珠中總黃酮的提取工藝進行優(yōu)化研究。以乙醇濃度、料液比、提取時間為自變量，總黃酮提取率為響應(yīng)值，設(shè)計3因素 3水平響應(yīng)面分析試驗，來確定廣東紫珠總黃酮最佳超聲提取工藝。超聲波法提取廣東紫珠中總黃酮的優(yōu)化條件為：提取溶劑66%乙醇，料液比1 ∶42，提取時間為44 min；該條件下，總黃酮得率可達到16.15%。

關(guān)鍵詞：廣東紫珠；總黃酮；超聲波提??；響應(yīng)面法

中圖分類號： R284.2 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2014）07-0265-03

收稿日期：2013-10-25

基金項目：國家自然科學(xué)青年基金（編號：81102799）；江西省科技支撐計劃（編號：20111BBG70030-4）；江西省博士后科研擇優(yōu)資助項目；江西省財政林業(yè)專項（編號：2011511201）。

作者簡介：房海靈（1983—），女，山西晉中人，博士，助理研究員，主要從事藥用植物資源及質(zhì)量評價研究。Tel：（0791）83833641；E-mail：fanghailing2013@163.com。

通信作者：朱培林，研究員，主要從事森林藥材與食品研究。Tel：（0791）83833803；E-mail：yczpl@126.com。廣東紫珠（Callicarpa kwangtungensis Chun.）為馬鞭草科（Verbenaceae）紫珠屬（Callicarpa L.）多年生落葉灌木，別名萬年青、珍珠風(fēng)、臭常山、老鴉飯、金刀菜等。2010年版《中國藥典》收載[1]，廣東紫珠以干燥莖、葉入藥，其味苦、澀，性涼，具有收斂止血、散瘀、清熱解毒之功效，臨床上常用于治療宮頸糜爛出血、陰道炎、宮頸炎等癥。研究表明，廣東紫珠的主要化學(xué)成分為黃酮、苯乙醇苷、萜類及揮發(fā)油等。其中黃酮類成分如木犀草素、鼠李秦素等具有顯著的抗菌、消炎、抗病毒、抗腫瘤等藥理作用[2-6]，因此，研究廣東紫珠黃酮類化合物的提取工藝對廣東紫珠的進一步開發(fā)利用具有重要意義。

1材料與方法

1.1材料

試驗材料為廣東紫珠，于2011年10月采自江西省萍鄉(xiāng)市蘆溪縣。主要試劑：蕓香苷對照品購于中國藥品生物制品檢定所（批號100802200306）。無水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉等均為分析純。主要儀器：FA1104電子天平，CTXNW 循環(huán)超聲提取機，754型紫外可見分光光度計。

1.2測定方法

1.2.1標準曲線建立精確稱取105 ℃干燥恒重的蕓香苷對照品25.90 mg，加70%乙醇溶解并定容至25 mL中，搖勻得質(zhì)量濃度1.036 mg/mL的對照品溶液，取1 mL對照品溶液至10 mL容量瓶中定容。分別取上述蕓香苷對照品溶液0、0.1、0.5、1.0、2.0、3.0 mL于6個10 mL容量瓶中，各加入5% NaNO2溶液0.3 mL，搖勻，放置6 min后加入10% Al（NO3）3溶液0.3 mL，搖勻，6 min后加入4% NaOH溶液 2 mL，混勻，70%乙醇定容至刻度。10 min后于510 nm處測吸光度，空白試劑為參比，以吸光度為縱坐標、蕓香苷質(zhì)量濃度為橫坐標繪制標準曲線，用最小二乘法進行線性回歸，得蕓香苷質(zhì)量濃度與吸光度間回歸方程：D=1.036C+0.016，r=0.997。

1.2.2供試樣品總黃酮含量測定稱取廣東紫珠粉末 0.2 g，加入提取溶液浸泡12 h后，進行提取，過濾，得樣品溶液，備用。取1 mL樣品溶液至10 mL容量瓶中定容，精密量取2 mL上述溶液，按照上述建立標準曲線的方法，依次加入NaNO2溶液、Al（NO3）3溶液和NaOH溶液，混勻，70%乙醇定容至刻度。靜置10 min后測定吸光度，根據(jù)回歸方程計算樣品中總黃酮含量。

1.3提取方法確定

在相同提取溫度、提取溶劑、料液比條件下，采用超聲波和回流提取法對廣東紫珠總黃酮進行提取，超聲波提取總黃酮得率為15.43%，高于回流提取（9.98%）。此外，超聲波提取操作簡單，具有省時、高效、節(jié)能的優(yōu)點，故本試驗采用超聲波提取法。

1.4超聲波輔助提取總黃酮的單因素試驗

分別以乙醇濃度、料液比、提取時間、提取溫度為單因素，考察各單因素對廣東紫珠總黃酮得率的影響。每個單因素水平重復(fù)3次，測其吸光值。

1.5響應(yīng)面分析法優(yōu)化超聲波輔助提取總黃酮的工藝參數(shù)

在單因素試驗的基礎(chǔ)上，確定Box-Behnken設(shè)計的自變量，運用Design-Expert 8.0.5軟件程序，根據(jù)Box-Behnken中心組合試驗設(shè)計原理[7-9]，采用3因素3水平的響應(yīng)面分析法，以總黃酮得率為響應(yīng)值作響應(yīng)面，對提取條件進行優(yōu)化。

2結(jié)果與分析

2.1超聲波輔助提取廣東紫珠總黃酮的單因素試驗結(jié)果

2.1.1乙醇濃度對總黃酮得率的影響精確稱取廣東紫珠粉末0.2 g，以料液比1 g ∶40 mL分別加入40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%乙醇溶液8 mL，50 ℃下作用 30 min，進行超聲波提取，結(jié)果見圖1。乙醇濃度在40%～70%范圍內(nèi)，總黃酮得率隨乙醇濃度增加而增加，70%乙醇濃度廣東紫珠總黃酮得率最高為15.69%，顯著高于其他乙醇濃度的得率。乙醇濃度選用60%、70%、80%作為響應(yīng)面試驗的3個水平。70%顯著高于其他乙醇濃度的得率，因此，乙醇濃度選用70%。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典：一部[M]. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：40.

[2]周伯庭，李新中，鐘廣蓉，等. 廣東紫珠地上部位主要藥效學(xué)試驗[J]. 中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2006，16（2）：204-206.

[3]周伯庭，李新中，徐平聲，等. 廣東紫珠地上部位化學(xué)成分研究（Ⅰ）[J]. 中南藥學(xué)，2004，2（4）：238-239.

[4]陳艷華，馮鋒，任冬春，等. 廣東紫珠地上部分的化學(xué)成分[J]. 中國天然藥物，2008，6（2）：120-122.

[5]賈安，楊義芳，孔德云，等. 廣東紫珠超臨界提取物的GC-MS成分分析及體外抗菌活性[J]. 中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2012，43（3）：178-181.

[6]賈安，楊義芳，孔德云，等. 廣東紫珠揮發(fā)油化學(xué)成分的GC-MS分析及體外抗菌活性[J]. 中藥材，2012，35（3）：415-418.

[7]李君玲. 紫荊皮總黃酮超聲提取工藝優(yōu)化[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（7）：266-267.

[8]Box G P，Hunter W G，Hunter J S. Statistics for experimenters，an introduction to design，data analysis and model building[M]. New York：John Wiley and Sons，1990.

[9]栗紅生. 冬凌草總黃酮提取工藝的正交設(shè)計優(yōu)化[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（5）：237-238.endprint