郝建萍 馬成龍 張凡

·論著·

AS患者血漿MCP-1、bFGF水平變化與疾病進展關(guān)系的研究

郝建萍 馬成龍 張凡

目的觀察動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)患者血漿單核細胞趨化因子(monocyte chemoattractic prptein-1,MCP-1)、堿性成纖維生長因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)水平與病變進展的相關(guān)分析。方法分別收集50例AS患者作為實驗組、健康體檢者32例作為對照組。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血漿MCP-1、bFGF水平，同時收集患者臨床病理參數(shù)，分析血漿MCP-1、bFGF水平與動脈硬化進展的內(nèi)在聯(lián)系。結(jié)果AS組MCP-1水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，且血漿MCP-1水平與患者冠脈病變支數(shù)、冠脈病變程度、E/A比值、射血分數(shù)間呈正相關(guān)(r值分別為0.3541、0.5501、0.6237和0.8564，P<0.05)；AS組血漿bFGF水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，且血漿bFGF水平與冠脈病變程度、左室射血分數(shù)間呈正相關(guān)(r值分別為0.6359和0.8751，P<0.01)；血漿MCP-1與bFGF水平之間呈正相關(guān)(r=0.4702，P<0.01)。結(jié)論MCP-1、bFGF是促進AS進展的關(guān)鍵因素，動態(tài)檢測其變化可以評估療效及預后。

單核細胞趨化因子；堿性成纖維生長因子；動脈粥樣硬化

動脈粥樣硬化是一種多種細胞因子參與的慢性炎癥反應，其始動因素是內(nèi)皮細胞損傷，同時脂蛋白與內(nèi)皮細胞粘附侵入內(nèi)膜下，積聚的脂蛋白氧化后與單核細胞表面受體結(jié)合導致單核細胞趨化進入內(nèi)膜下，單核細胞釋放脂蛋白吸引更多單核細胞進入內(nèi)膜下，同時這一過程受到多種因子的調(diào)控，阻斷這一過程將為臨床治療帶來希望；巨噬細胞系統(tǒng)分泌的MCP-1因子在募集更多單核細胞侵入到內(nèi)膜下層發(fā)揮重要作用，而單核細胞吞噬的脂蛋白溢出細胞外形成脂湖，刺激更多MCP-1釋放，惡性循環(huán)，而MCP-1與AS不同病理參數(shù)的關(guān)系以及調(diào)控機制尚不清楚。bFGF是多種細胞分泌的促纖維化細胞因子，與多種病理過程中的纖維化進程密切相關(guān)，研究顯示動脈硬化病灶中浸潤的單核細胞和淋巴細胞都分泌bFGF，可促進AS患者血管中層平滑肌的增生和纖維化，而在動脈硬化進程中上述兩種因子是否存在協(xié)同作用以及具體的調(diào)控機制鮮見報道，我們選取不同疾病階段的AS患者進行上述兩個指標的對比檢測，期望為AS的臨床治療和發(fā)病的分子機制研究提供初步科學依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取河北北方學院附屬第一醫(yī)院、河北省康保縣醫(yī)院內(nèi)科2005年1月至2007年10月間收治的AS患者50例，男31例，女19例；年齡46～63歲，平均年齡(52.4±2.6)歲；NYHA心功能分級：Ⅰ級3例，Ⅱ級17例，Ⅲ級24例，Ⅳ6例。冠脈造影均在河北北方學院附屬第一醫(yī)院導管室完成，選擇性冠脈造影術(shù)采用judkins法，記錄左、右冠脈主干、前降支、回旋支病變情況。右冠狀動脈病變13例，左冠狀動脈病變25例，左右冠狀動脈均存在病變12例。SCAI病變分類：冠狀動脈病變程度Ⅰ型14例，Ⅱ型3例，Ⅲ型26例，Ⅳ型7例。

1.2 研究方法

1.2.1 左心功能測定：采用Philips iE 33型彩色多普勒超聲心動圖儀，配有S5—1探頭(頻率1～5 MHz)及X3—1全容積探頭(頻率1～3 MHz)。受檢者左側(cè)臥位，囑平靜呼吸，同步記錄心電圖。常規(guī)超聲心動圖檢查完畢后，采集心尖四腔心切面動態(tài)二維圖像(圖像幀頻在50～70幀以上，取連續(xù)3個心動周期)，啟動“FuUVol—ume”模式，將左心室心內(nèi)膜完整置于取樣框，固定探頭位置，采集連續(xù)3個心動周期的圖像。脫機后使用Qlab 7．1軟件進行分析。實時三維超聲心動圖分析進入3DQA模式，在三維數(shù)據(jù)庫中選取心內(nèi)膜清晰的左心室切面分別置于3個相互正交的參考平面上，手動勾畫左心室內(nèi)膜面，計算左心室舒張末期容積(EDV)、左心室收縮末期容積(ESV)及左心室射血分數(shù)(LVEF)、二尖瓣口測舒張期血流E峰、A峰、E/A比值。

1.2.2 MCP-1、bFGF測定：MCP-1、bFGF ELISA檢測試劑盒購自上海灝晶生物試劑公司，患者分別入院后即刻抽取2 ml靜脈血，加入EDTA(1.5 mg/ml)，4℃離心15 min(3 500 r/min)，取血漿-70℃保存待測。按試劑說明采用ELISA方法測定MCP-1、bFGF。同時檢測CK、CK-MB、TnT、肝腎功能、血脂、血糖及電解質(zhì)測定。

2 結(jié)果

2.1 MCP-1血漿水平在不同組間的比較 所有50例患者中50歲以上年齡組水平明顯高于50歲以下組(P<0.01)；NYHAⅠ級、Ⅱ級與Ⅲ級、Ⅳ級無明顯差別(P>0.05)；LVEF≤50%組明顯低于LVEF>50%組(P<0.01)；E/A≤1組明顯高于E/A>1組(P<0.01)。血脂增高組明顯高于正常組(P<0.01)。

2.2 bFGF血漿水平在不同組間的比較 所有50例患者中50歲以上年齡組水平與50歲以下年齡組無明顯差異(P>0.05)；NYHAⅠ級、Ⅱ級明顯高于Ⅲ級、Ⅳ；LVEF≤50%組(21例)水平明顯小于>50%組(P<0.01)；E/A≤1組與E/A>1組比較無明顯差別(P>0.01)；冠狀動脈病變程度Ⅰ型、Ⅱ型明顯低于Ⅲ型、Ⅳ型(P<0.01)。血脂增高組明顯高于正常組(P<0.01)。見表1。

表1不同分組患者MCP-1、bFGF血漿水平變化比較

項目MCP-1(pg/ml)bFGF(Pg/ml)t值P值50歲以上(n=24)149±7443±9.4tM=5.3007<0.00150歲以下(n=26)97±3438±4.6tb=1.0923>0.05心功能ⅠⅡ級(n=20)78±14.542±6.1tM=8.3246>0.001心功能ⅢⅣ級(n=30)88±4.636±4.5tb=0.9234>0.05LVEF>50%(n=21)163±1474±10.3tM=5.6679<0.001LVEF≤50%(n=29)98±6.437±7.2tb=4.2483<0.001E/A≤1(n=25)110±10.639±6.0tM=0.8653<0.05E/A>1(n=25)174±12.443±8.1tb=1.2355>0.05冠狀動脈病變程度Ⅰ、Ⅱ型(n=17)82±1120±3.7tM=3.8027<0.01冠狀動脈病變程度Ⅲ、Ⅳ型(n=33)160±9343±4.1tb=1.2355<0.01血脂正常(n=19)93±7320±3.5tM=4.5437<0.05血脂升高(n=31)175±5242±9.8tb=5.8921<0.01

注：tM代表MCP-1,tb代表bFGF

2.3 MCP-1、bFGF與心功能指標的相關(guān)性分析 MCP-1上升幅度與患者冠脈病變支數(shù)、冠脈病變程度、E/A比值、射血分數(shù)間呈正相關(guān)(r值分別為0.3541、0.5501、0.6237和0.8564)；bFGF上升幅度與冠脈病變程度、左室射血分數(shù)間呈正相關(guān)(r值分別為0.6359何0.8751，P<0.01)。

2.4 MCP-1、bFGF 水平變化的相關(guān)性 MCP-1、bFGF升高幅度在疾病早期存在正相關(guān)關(guān)系(r=0.6712，P<0.01)。

3 討論

AS是一種與高血脂和內(nèi)皮細胞持續(xù)損傷相關(guān)的慢性炎癥疾病，主要累及血流動力學較高的血管，多種炎癥細胞分泌的細胞因子在疾病發(fā)展過程中共同作用。首先內(nèi)皮細胞損傷導致低密度脂蛋白進入內(nèi)膜下，同時低密度脂蛋白通過內(nèi)皮細胞間隙下遷移后被氧化修飾，誘導單核細胞進入內(nèi)膜下吞噬脂蛋白，吞噬脂質(zhì)后單核細胞形成泡沫細胞，脂蛋白對細胞具有毒性作用，破壞細胞后脂質(zhì)分泌到細胞外形成粥湖，繼續(xù)誘導單核細胞的趨化，同時刺激中層平滑肌細胞增殖，導致粥樣斑塊形成并不斷擴大，血管壁增厚變硬，而這一過程中伴隨促纖維化細胞因子分泌(比如MCP-1)，導致內(nèi)皮下血管中層的平滑肌細胞增生、間質(zhì)纖維化，但是其過程的具體調(diào)控網(wǎng)絡尚不清楚[1，2]，我們試驗選取單核細胞趨化因子和纖維細胞生長因子對其過程進行動態(tài)觀察，希望為尋找新的治療靶點和手段提供較為客觀的依據(jù)。

MCP-1是趨化因子CC家族中的一員，由76個氨基酸殘基組成，可由多種細胞如成纖維細胞、平滑肌細胞、血管內(nèi)皮細胞分泌。其基因啟動子上游有核轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點，與NF-kB的DNA結(jié)合可以激活MCP-1基因的轉(zhuǎn)錄[3，4]。MCP-1具有誘導單核巨噬細胞趨化和激活的雙重作用，是炎癥反應的始動因子，主要的作用機制是(1)趨化外周單核細胞浸潤至血管內(nèi)皮，誘導因子反應；(2)誘導單核細胞表達組織因子，參與血栓形成；(3)活化血管平滑肌細胞并促進增殖；(4)促進動脈粥樣硬化斑塊中的血管新生，使斑塊不穩(wěn)定[5]。研究發(fā)現(xiàn)敲除小鼠MCP-1基因或CCR2基因可使斑塊巨噬細胞含量和損傷面積明顯下降，過表達則加速動脈硬化的形成。臨床研究發(fā)現(xiàn),MCP-1水平變化與冠狀動脈粥樣斑塊的穩(wěn)定性有一定的相關(guān)性，并在冠心病炎癥的發(fā)生和發(fā)展過程中起重要作用[6，7]。我們實驗結(jié)果顯示：MCP-1血漿水平在不同組間的比較 ， 所有50例患者中50歲以上年齡組水平明顯高于50歲以下組；NYHAⅠ級、Ⅱ級與Ⅲ級、Ⅳ級無明顯差別；LVEF≤50%組明顯低于LVEF>50%組；E/A≤1組明顯高于E/A>1組；血脂增高組明顯高于正常組。說明血流動力學的改變和血脂的升高時促使多種細胞分泌MCP-1增加；相關(guān)分析顯示MCP-1上升幅度與患者冠脈病變支數(shù)、冠狀動脈病變程度、E/A比值、射血分數(shù)之間存在正相關(guān)；說明MCP-1隨冠脈硬化程度的加重和心功能降低其表達水平明顯增高。

研究表明，內(nèi)皮細胞的增殖、分化及其形態(tài)和功能變化與bFGF有密切關(guān)系[8，9]。bFGF在動脈粥樣硬化斑塊形成過程中發(fā)揮重要作用。bFGF具有內(nèi)皮趨化性，并刺激內(nèi)皮細胞產(chǎn)生纖溶酶元活化物和膠原酶，能降解血管基底膜和細胞外基質(zhì)[10]。本組資料提示bFGF血漿水平在不同組間的比較： 所有50例患者中50歲以上年齡組水平與50歲以下年齡組無明顯差異；NYHAⅠ級、Ⅱ級明顯高于Ⅲ級、Ⅳ；LVEF≤50%組(21例)水平明顯小于>50%組；E/A≤1組與E/A>1組比較無明顯差別；冠狀動脈病變程度Ⅰ型、Ⅱ型明顯低于Ⅲ型、Ⅳ型；血脂增高組明顯高于正常組。說明bFGF可通過促進纖維化促進動脈硬化的進展。

動脈硬化是一個多因素共同參與的復雜過程，內(nèi)皮細胞損傷、繼發(fā)炎癥、氧化應激、免疫功能障礙相互作用是加速AS的主要因素。相關(guān)分析顯： MCP-1、bFGF升高幅度在AS早期存在正相關(guān)。說明MCP-1、bFGF的協(xié)同作用在AS早期斑塊形成中發(fā)揮主要作用，當然AS是一個復雜的病理生理過程，多種細胞因子參與動脈粥樣硬化過程的機制尚需深入的研究，以便為今后的臨床治療和藥物的開發(fā)提供新的分子靶點。

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075000 河北省康?？h醫(yī)院心內(nèi)科(郝建萍、馬成龍)；河北北方學院附屬第一醫(yī)院病理科(張凡)

R 543

A

1002-7386(2014)13-2014-03

2014-02-23)