陳 紅 （湖北省黃岡市英山縣人民醫(yī)院檢驗科，湖北黃岡 438700）

·基礎(chǔ)與轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)·

新的產(chǎn)色培養(yǎng)基 Chrom ID ESBL在檢測產(chǎn)超廣譜 β-內(nèi)酰胺酶腸桿菌科細(xì)菌中的可靠性

陳 紅 （湖北省黃岡市英山縣人民醫(yī)院檢驗科，湖北黃岡 438700）

目的：評價 Chrom ID ESBL產(chǎn)色培養(yǎng)基檢測產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶腸桿菌科菌株的可靠性．方法：共使用 2組腸桿菌科菌株對平板進(jìn)行評估，第 1組細(xì)菌是我院 2010-04／2013-03各病區(qū)和門診臨床分離送檢的樣本，共982株，第2組細(xì)菌是本地區(qū)歷往年分離培養(yǎng)，且確定產(chǎn)酶特性的腸桿菌科細(xì)菌20株．結(jié)果：Chrom ID ESBL顯色平板可快速有效的篩查腸桿菌科細(xì)菌是否產(chǎn) ESBLs．結(jié)論：Chrom ID ESBL產(chǎn)色培養(yǎng)基是一種快速可靠的對產(chǎn) ESBLs的腸桿菌科菌株進(jìn)行篩選的產(chǎn)色培養(yǎng)基．

腸桿菌科；超廣譜 β-內(nèi)酰胺酶；Chrom ID ESBL平板

1 材料和方法

1．1 材料

1．1．1 菌株來源 實驗所用第 1組細(xì)菌是我院2010-04／2013-03各病區(qū)和門診臨床分離送檢的樣本，共982株，大腸埃希菌樣本共624株、肺炎克雷伯菌樣本共265株、其他變形腸桿菌樣本共93株；第2組細(xì)菌是本地區(qū)往年分離培養(yǎng)，且確定產(chǎn)酶特性的腸桿菌科細(xì)菌20株，這些菌株中有肺炎克雷伯菌9株、大腸埃希菌7株、陰溝腸桿菌4株．質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)菌株為大腸桿菌菌株（ATCC25922）與肺炎克雷伯菌菌株（ATCC700603，攜帶ESBLs SHV-18型）．

1．1．2 試劑 藥敏紙片（BD公司生產(chǎn)）是頭孢噻肟（30 μg）、頭孢他啶（30 μg）、頭孢噻肟-克拉維酸（30～10 μg）以及 頭孢他啶-克拉維酸（30～10 μg）．產(chǎn)色培養(yǎng)基Chrom ID ESBL（梅里埃公司生產(chǎn)），血平板以及水解酪蛋白胨（MH）平板．

1．2 方法

1．2．1 ESBLs藥敏紙片試驗的確證 依循 CLSI（美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會）紙片擴(kuò)散確證實驗的條件和方法進(jìn)行確證［2］．使用第 1組細(xì)菌 982株，當(dāng)其在MH平板上培養(yǎng)好后，分別進(jìn)行四種紙片對比試驗，紙片實驗方案見表1．頭孢類抗生素的用量為 30 μg，克拉維酸用量為10 μg，過夜培養(yǎng)，記錄四種紙片各自抑菌圈的直徑，當(dāng)含①③紙片比②④紙片抑菌圈的直徑大5 mm時，判斷紙片實驗陽性．

1．2．2 Chrom ID ESBL平板試驗 將在血平板上培養(yǎng)的第2組細(xì)菌接種到 Chrom ID ESBL顯色平板上，35℃，16～18 h培養(yǎng)過夜，并按照顏色判讀試驗結(jié)果．產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌會呈現(xiàn)出粉紅或酒紅色，產(chǎn) ESBLs的克雷伯菌屬、沙雷菌屬、枸櫞酸菌屬和腸桿菌屬會顯綠色、藍(lán)色或褐色菌落，產(chǎn) ESBLs的變形桿菌屬、摩根菌屬和普羅威登斯菌屬菌株在顯淺灰或深灰色．

表1 紙片驗證實驗方案

2 結(jié)果

2．1 982株菌種紙片確證試驗和 Chrom ID ESBL顯色平板試驗結(jié)果對比 確證試驗中產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌有401株，不產(chǎn) ESBLs菌有223株，產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌有144株，不產(chǎn)ESBLs菌 121株，其他變形腸桿菌產(chǎn)ESBLs的為40株，不產(chǎn) ESBLs的為53株．菌株直接接種到 Chrom ID ESBL平板上后，產(chǎn)ESBLs的菌株生長良好，不產(chǎn) ESBL的菌株不能生長．產(chǎn) ESBLs的大腸埃希菌中，紅色菌落的菌343株，另有菌58（14．5%）株為白色菌落．產(chǎn)ESBLs的肺炎克雷伯菌呈藍(lán)綠色菌落，其他變形腸桿菌則呈淺灰或深灰菌落，菌種的產(chǎn)酶特性和顯色平板試驗結(jié)果對比見表2．

表2 982株菌種紙片確證試驗和 Chrom ID ESBL顯色平板試驗結(jié)果對比

2．2 已知產(chǎn)酶特性的 20株腸桿菌科菌株產(chǎn)色平板檢測 產(chǎn)酶特性和基因型的 20株腸桿菌科菌株在Chrom ID ESΒL平板檢測情況見表3．

3 討論

ESBLs主要是由腸桿菌科的細(xì)菌生產(chǎn)，尤其是大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌．ESBLs由質(zhì)粒介導(dǎo)，可通過多種方式在細(xì)菌之中傳遞，從而導(dǎo)致耐藥現(xiàn)象大面積擴(kuò)散，進(jìn)而引發(fā)嚴(yán)重的感染情況．為有效控制產(chǎn)ESBLs細(xì)菌的散播，紙片篩選和確證試驗等篩選方法都被建立起來［3］．但以上這些方法均需要獲得純培養(yǎng)的菌種，操作不便．此次研究評估使用的ESBLs產(chǎn)色平板可快速可靠的篩選產(chǎn) ESBLs的細(xì)菌，簡便易行．

Chrom ID ESBL產(chǎn)色平板中含有多種抑制真菌以及革蘭陽性菌藥物，以頭孢泊肟作為底物，主要用于篩選菌株是否產(chǎn)ESBLs，同時該平板還有1種天然底物和2種產(chǎn)色底物，以便于直接鑒定腸桿菌科細(xì)菌是否產(chǎn) ESBLs．大部分的大腸埃希菌菌株都可產(chǎn) β-葡萄糖醛酸苷酶，因此其菌落可在此平板上呈現(xiàn)粉紅或酒紅色，不產(chǎn) β-葡萄糖醛酸苷酶的大腸埃希菌菌株顯白色．克雷伯菌屬等細(xì)菌皆可產(chǎn)β-葡萄糖苷酶，因此其菌落在平板上呈藍(lán)色、綠色或棕綠色．變形桿菌屬等細(xì)菌能產(chǎn)脫氨酶，這些菌株在平板上呈現(xiàn)淺灰或深灰色．以上結(jié)果表明，將菌株直接接種在 Chrom ID ESBL顯色平板上可以達(dá)到篩選菌株產(chǎn)ESBLs與輔助鑒定的兩方面效果．此次研究結(jié)果和紙片確證試驗結(jié)果相比完全符合，效果令人滿意．

近些年來，我國在分離革蘭陰性桿菌產(chǎn)ESBLs的流行現(xiàn)狀、基因型別以及檢測方法等方面都進(jìn)行了大量的研究．研究表明PER、VEB及CTX-M型［4］等基因型是我國各地區(qū)臨床分離的腸桿菌科細(xì)菌主要的 ESBLs型．此次研究選取的20株通過雙抑制劑平行紙片抑制試驗和聚合酶鏈反應(yīng)等生物學(xué)方法確認(rèn)產(chǎn)酶基因型和表型的腸桿菌科細(xì)菌，這20株菌株是產(chǎn)ESBLs或／和產(chǎn)AmpC酶的菌株，攜帶的ESBLs主要基因型包括各種VEB、PER和CTX-M型等．此試驗證明了 Chrom ID ESBL產(chǎn)色平板可有效篩選這些菌株．

綜上所述，Chrom ID ESBL產(chǎn)色培養(yǎng)基可用于臨床標(biāo)本中腸桿菌科細(xì)菌是否產(chǎn)ESBLs的快速篩選．并且Chrom ID ESBL平板可大大縮短篩選產(chǎn) ESBLs腸桿菌科菌株所用的時間，也為醫(yī)院感染控制和臨床抗感染的治療等提供了有力支持．

［1］Wilkinson KM，Winstanley TG，Lanyon C，et al．Comparison of four chromogenic culture media for carbapenemase-producing Enterobacteriaceae［J］．J Clin Microbiol，2012，50（9）：3102－3104．

［2］韓立中，祝艷萍，等．ChromID ESBL顯色平板對產(chǎn) ESBLs腸桿菌科細(xì)菌篩選作用的評估［J］．檢驗醫(yī)學(xué)，2010，2（25）：118－120．

［3］Carr?r A，F(xiàn)ortineau N，Nordmann P．Use of ChromID extended-spectrum β-lactamase medium for detecting carbapenemase-producing Enterobacteriaceae［J］．J Clinical Microbiol，2010，48（5）：1913－1914．

［4］Dhara M，Disha P，Sachin P，et al．Comparison of various methods for the detection of extended spectrum beta lactamase in Klebsiella Pneumoniae isolated from neonatal intensive care unit，ahmedabad ［J］．Natl J Med Res，2012，2（3）：348－353．

The reliability of the New Chrom ID ESBL colored medium for detect of extended spectrum β-lactamase in Enterobactericaeae

CHEN Hong
Clinical Laboratory，People's Hospital of Yingshan County Hubei Province，Huanggang 438700，China

AIM：To Evaluate the reliability of Chrom ID ESBL medium for detection of extended spectrum β-lactamase in Enterobactericaeae．METHODS：2 sets of Enterobacteriaceae Bacteria to test the medium，1th set of collected bacteria samples was from March 2010 to April 2013 of our clinical hospital wards and outpatient，a total of 982，and 2nd set of 20 collected bacteria samples of our region was isolated，cultured and identified in previous years．RESULTS：Chrom ID ESBL medium can fast and effectively screening ESBLs．CONCLUSION：Chrom ID ESBL medium is a fast and reliable filtering of ESBLs．

Enterobactericaeae；extended-spectrum β-lactamases；Chrom ID ESBL medium

2095-6894（2014）05-009-03

R93．31

A

0 引言

醫(yī)院和社區(qū)臨床獲得性感染的主要細(xì)菌是腸桿菌科細(xì)菌，同時由于 β-內(nèi)酰胺類抗生素的臨床應(yīng)用，腸桿菌科細(xì)菌逐漸變異，其耐藥問題愈發(fā)加重，臨床的治療遇到了很大的困難．為防止此細(xì)菌暴發(fā)流行，我們必須建立準(zhǔn)確、快速以及易于操作的耐藥菌的篩選方法，對高危人群進(jìn)行流行病學(xué)檢測［1］．近年來，已推出幾種 β-內(nèi)酰胺酶的篩選平板，但這些平板重點檢測對第三代頭孢菌素耐藥的細(xì)菌，并不是產(chǎn) ESBLs的腸桿菌科的細(xì)菌．最近開發(fā)出一種新的含顯色酶的平板 Chrom lD ESBL，能用于篩查腸桿菌科細(xì)菌是否產(chǎn) ESBLs．此研究采用 2組菌株作為該平板對產(chǎn) ESBLs的腸桿菌科菌篩選的效果評價．

2014-08-16；接受日期：2014-09-01

陳 紅．中專，主任技師．研究方向：臨床微生物．Tel：0713-7012030 E-mail：635394623＠qq．com