黃 可 沈 瑛 樊滿齊 楊偉康 劉 翱

氣道、肺實質及肺血管的慢性炎癥是慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)的特征性改變，炎癥導致氣管壁反復損傷-修復，COPD急性發(fā)作導致炎癥加??；普通肺炎是感染導致的終末氣道、肺泡和肺間質的炎癥，經(jīng)抗感染治療炎癥消退，機體康復。COPD的非特異性炎癥和肺炎的感染性炎癥兩種之間存在差異，我們通過檢測COPD急性發(fā)作期炎癥及普通肺炎炎癥患者外周血中Treg細胞比例及IL-17水平的變化來探討Treg/Th17細胞在兩種氣道肺實質炎癥中的作用及影響。

對象與方法

一、臨床資料

選取2012年7月至2013年5月入住我院呼吸內(nèi)科的COPD急性發(fā)作期患者26例，男23例，女3例，平均年齡(63.12±11.32)歲；選取呼吸內(nèi)科住院普通肺炎患者22例，男15例，女7例，平均年齡(61.91±11.27)歲；另選取健康對照組15例，男8例，女7例，平均年齡(58.60±12.05)歲。各組間無統(tǒng)計學差異。三組肺功能FEV1%分別為：(42.412±20.476)、(90.743±18.865)、(110.727±21.014)，統(tǒng)計有差異性。FEV1/FVC分別為(55.763±10.527)、(82.535±7.327)、(82.968±26.530)，AECOPD組較肺炎組及對照組統(tǒng)計有差異性。

二、納入標準

COPD患者符合2007年慢性阻塞性肺疾病診治指南[1]，經(jīng)病史、癥狀、肺功能及相關檢查確診為COPD，且患者咳嗽咳痰、呼吸困難加劇等癥狀和體征符合COPD急性加重診斷標準。普通肺炎患者符合社區(qū)獲得性肺炎診斷和治療指南，影像學提示肺部明顯感染征象，病史、癥狀及相關檢查確診普通肺炎，經(jīng)抗感染治療有效，病變吸收[2]。所有患者1月內(nèi)未接受過全身或局部糖皮質激素治療，1周內(nèi)未規(guī)律使用長效支氣管擴張劑，排除有肺結核、肺間質纖維化、支氣管擴張、胸腔積液、結節(jié)病等肺部疾病及合并其他系統(tǒng)疾病。對照組為正常健康者，無明確心肺疾病史、1個月內(nèi)無呼吸道感染史。

三、實驗方法

所有患者于入院第2天清晨6時抽取肘正中靜脈血3 ml置于ETDA-K2抗凝管中行流式細胞儀檢測，另抽取2 ml靜脈血，以離心半徑8 cm，3000 r/min離心10 min。分離血清置于-80 ℃冰箱保存ELISA待檢。流式細胞儀檢測方法：取ETDA抗凝血100 μl，加入CD4-FiTC、CD25-PCS、CD127-PE各10 μl，混勻后室溫下避光孵育2 min，PBS洗滌1次，每管加入紅細胞裂解液室溫避光10 min后，以離心半徑8 cm，1000 r/min離心5 min，棄上清，PBS洗滌2次，固定液固定重懸，上流式細胞儀(Coulter Epics XL, Beckman)檢測。IL-17ELISA抗體試劑為Bio-Swamp公司人IL-17 ELISA檢測試劑盒，按操作說明書檢測。

四、統(tǒng)計學方法

結 果

一、AECOPD組與肺炎組、對照組患者Treg細胞比例、IL-17水平比較，見表1。

二、各組間Treg細胞與IL-17及其他因素的相關性分析

普通肺炎組Treg細胞與IL-17間呈微弱的正相關(r=0.443，P=0.044)，與其他指標間未發(fā)現(xiàn)相關性；IL17與中性粒細胞比例呈正相關(r=0.558，P=0.011)。AECOPD組Treg細胞與IL-17間未發(fā)現(xiàn)相關性，與各指標間也未見相關性。

表1 AECOPD、肺炎、對照組Treg細胞比例(%)、IL-17水平(pg/ml)比較

注：IL17水平，與對照組比較aP<0.001， AECOPD與肺炎組之間比較P=0.021； Treg細胞比例，與對照組比較aP<0.001，bP=0.030，AECOPD與肺炎組之間比較P<0.001

討 論

調節(jié)性T細胞(regulatory T cells, Treg細胞)是一類具有免疫抑制功能的CD4+T淋巴細胞亞群，通過細胞間直接接觸機制和分泌抑制性因子機制對效應T淋巴細胞起抑制作用；叉頭翼狀螺旋轉錄因子(forkhead winged helix transcription factor p3, Foxp3)被認為是CD4+CD25+Treg的特異性標志，但由于Foxp3位于細胞核內(nèi)，檢測步驟繁瑣，近來文獻報告，位于細胞膜表面的CD4+CD25+CD127low較CD4+CD25+Foxp3標記能夠定量更多的Treg細胞，CD4+CD25+CD127low能更好的定量和純化、標記Treg細胞[3]。Treg細胞抑制進入機體的外來抗原引起的免疫應答，一方面對宿主起到保護作用，避免免疫反應對組織造成病理損傷，但另一方面卻不利于病毒、細菌、寄生蟲等清除，形成持續(xù)感染[4]。輔助性T17細胞(T17 cell helper, Th17)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種新效應T細胞亞群，并特異性地產(chǎn)生IL-17，在防御胞外病原菌感染、自身免疫性疾病和感染性疾病中發(fā)揮重要作用[5-7]。

本研究中COPD急性發(fā)作患者及普通肺炎患者Treg細胞比例較對照組均升高，差異有統(tǒng)計學意義，表明在不同炎癥反應中Treg細胞可能發(fā)揮抑制作用控制炎癥的發(fā)展，促進炎癥的轉歸[8]。COPD急性發(fā)作組較肺炎組Treg細胞比例升高更明顯，這可能與COPD氣道存在持續(xù)慢性非特異性炎癥有關，也可能與COPD患者存在免疫紊亂有關。研究表明，在健康者體內(nèi)，Treg細胞通過直接抑制巨噬細胞和其他抗原提呈細胞的功能或者誘導細胞凋亡，調節(jié)炎癥反應。而在慢性炎癥中，抗原提呈細胞可能逃脫Treg細胞的調節(jié)，繼續(xù)分泌致炎因子，介導炎癥反應。近年有學者提出COPD存在自身免疫性應答的假說，Cosio等[9]認為COPD是由吸煙所致的自身免疫性疾病，自身免疫及免疫紊亂在COPD的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。IL17作為促炎因子，通過趨化中性粒細胞向炎癥部位聚集，有效清除病原體感染，促進損傷的修復[10]。本研究中COPD急性發(fā)作患者及普通肺炎患者外周血IL-17水平均見升高，表明IL-17作為致炎因子，參與了炎癥反應過程，COPD急性發(fā)作患者較肺炎患者IL-17水平升高更明顯，可能與COPD患者抗原提呈細胞逃脫了Treg細胞的調節(jié)，繼續(xù)引起炎癥反應，導致炎癥反應遷延不愈有關，表明COPD患者機體的免疫平衡已經(jīng)失調。

Treg細胞與Th17細胞分化上相互關聯(lián)，功能上相互拮抗，Treg/Th17細胞的平衡在維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)中起著重要作用，失調可引起機體局部或者全身異常的炎癥反應，因此Treg/Th17細胞的失調也是感染性疾病發(fā)生發(fā)展的一個重要因素[11-12]。

本研究相關性分析發(fā)現(xiàn)，肺炎組Treg細胞與IL-17間呈微弱的正相關，AECOPD組Treg細胞與IL-17間未發(fā)現(xiàn)相關性，與各指標間也未見相關性，提示肺炎組Treg/Th17細胞在肺部炎癥反應中可能仍能保持著微弱平衡，共同維持免疫調節(jié)過程，控制炎癥反應過程，而COPD炎癥中平衡可能已經(jīng)失衡[13]。相關研究發(fā)現(xiàn)，在COPD患者局部氣道，Treg/Th17平衡向Thl7方向偏移，抑制炎癥作用不足，IL-17分泌增多，IL-17與FEV1%和FEV1/FVC分別呈負相關，IL-17通過促進氣道炎癥、黏液高分泌及氣道重塑參與COPD的發(fā)生、發(fā)展[14-15]。本研究未發(fā)現(xiàn)IL-17與肺功能的相關性，但IL-17水平升高。

目前，人們對Treg細胞和Th17細胞在肺部炎癥疾病中的作用認識有限，對Treg細胞和Th17細胞的分化、發(fā)育、相互作用等的研究，可能有助于判斷病情的嚴重程度，并為臨床弄清炎癥免疫機制和治療提供理論依據(jù)。

參 考 文 獻

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