岳語喃 楊水祥

房顫患者小分子RNA組學(xué)研究結(jié)果與分析

岳語喃 楊水祥

目的 探討非瓣膜病心房顫動(dòng)（房顫）患者血清小分子RNA（miRNA）全基因組表達(dá)差異及其可能的調(diào)控作用和早期預(yù)警價(jià)值。方法 15例房顫患者，分為陣發(fā)性、持續(xù)性和永久性房顫組，每組5例，對照組5例健康人。射頻消融術(shù)前和術(shù)中分別取外周血和冠狀竇血，提取血漿總RNA，使用microRNA芯片（microRNA v 18.0）進(jìn)行全基因組miRNA表達(dá)譜微陣列分析，Volcano Plot法獲得差異表達(dá)miRNAs，并用tMEV軟件進(jìn)行聚類分析，以及通過mirbase、miranda、targetscan數(shù)據(jù)庫進(jìn)行靶基因分析，并進(jìn)行RT-PCR的差異表達(dá)驗(yàn)證。結(jié)果 房顫組冠狀竇血與外周血比較有14個(gè)miRNAs表達(dá)差異顯著，其中6個(gè)表達(dá)上調(diào)：即 miR-1266、miR-4279、miR-4787-5p、miR-4666a-3p、kshv-miR-K12-6-3p 和 miR-3150a-5p，8 個(gè)表達(dá)下調(diào)：即 miR-892a、miR-3149、miR-3171、miR-3664-5p、miR-3591-3p、miR-4423-5p、miR-4473 和 miR-574-3p。其中，miR-1266在陣發(fā)性、持續(xù)性和永久性房顫組均明顯升高，而miR-3171則顯著降低。房顫組與對照組外周血及冠狀竇血比較miRNAs表達(dá)也有明顯差異。結(jié)論 房顫患者冠狀竇血與外周血比較miRNAs表達(dá)均有顯著差異，而冠狀竇血miRNAs更能反映心臟的代謝與調(diào)控狀況；血清miR-3171、miR-892a、miR-3149在房顫發(fā)生發(fā)展早期出現(xiàn)且持續(xù)表達(dá)差異，有可能成為早期預(yù)警診斷的標(biāo)志物；miR-1266、miR-4279、miR-4666a-3p有可能成為未來治療房顫的干預(yù)靶點(diǎn)。

心房顫動(dòng)； 小分子RNA； 基因調(diào)控； 早期診斷

心房顫動(dòng)（房顫，atrial fibrillation，AF）是目前最常見的心律失常，是造成腦卒中及心功能損害的主要原因[1-3]。但發(fā)病機(jī)制至今尚不清楚，且缺乏有效的早期預(yù)警診斷方法。

研究表明，小分子RNA（miRNA）參與調(diào)控房顫相關(guān)的多種基因[4]。隨著檢測技術(shù)的不斷成熟[5,6]，針對房顫相關(guān)miRNA的研究越來越多地受到了關(guān)注。Lu等[7]發(fā)現(xiàn)miR-328與瓣膜性房顫相關(guān)；張瑜等[8]、Liu等[9]分別用芯片和測序技術(shù)進(jìn)行了非瓣膜性房顫外周血miRNA表達(dá)差異分析。但房顫患者冠狀竇血miRNA與外周血比較的差異表達(dá)尚未見報(bào)道。本研究以高通量生物芯片技術(shù)，觀察了20例陣發(fā)性、持續(xù)性和永久性房顫患者冠狀竇血及外周血miRNA的特異性差異表達(dá)，并通過冠狀竇血與外周血及與健康人的比較，試圖發(fā)現(xiàn)miRNA調(diào)控房顫的機(jī)制，以及一些可能的房顫早期預(yù)警診斷標(biāo)記物和干預(yù)靶點(diǎn)。

1 對象與方法

1.1 研究對象 本研究選取我院心內(nèi)科15例行房顫射頻消融術(shù)患者（分為陣發(fā)性、持續(xù)性和永久性房顫組各 5例），平均年齡（67.67±5.75）歲，女性8例，男性7例。正常對照組5例，平均年齡（61.40±3.36）歲。每位患者均有5份以上不同時(shí)間的ECG支持房顫診斷。排除標(biāo)準(zhǔn)：年齡＞75歲，甲狀腺功能亢進(jìn)，糖尿病，血壓控制不良（＞140/90 mm Hg）（1 mm Hg=0.133 kPa），左室功能減低（EF＜40%），嚴(yán)重冠狀動(dòng)脈疾病，肝、腎功能障礙，急、慢性感染疾病，心肌結(jié)構(gòu)性病變?；颊呷虢M后均接受β受體阻滯劑（β-blocker）、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑（ACEI）、血管緊張素受體抑制劑（ARB）、他汀類等藥物規(guī)范控制血壓、血脂。

本研究方案經(jīng)院倫理委員會(huì)審批通過。參與患者均簽署知情同意書。

1.2 試驗(yàn)儀器材料 第七代miRCURYTMLNA microRNA 芯片（v8.0 Exqion）、miRCURY Array Power Labeling kit標(biāo)記試劑盒（Cat#208032-A Exiqon）Wash buffer試劑盒（Exiqon）、TRIzol Reagent（Invitrogen life technologies）、miRNeasy mini試劑盒（Qiagen）、分光光度計(jì)（Sigma NanodropR ND-1000）、Axon Gene Pix 4000B微陣列芯片掃描儀。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)本收集及儲(chǔ)存 射頻消融術(shù)前、術(shù)中分別抽取外周血、冠狀竇血各4 ml，分別置于EDTA抗凝管中，2 h內(nèi)分離血漿，1500 r/min離心15 min，吸上清液至凍存管中，-80℃保存。

1.3.2 RNA的提取及標(biāo)記 按照說明書用TRIzol Reagent和miRNeasy mini試劑盒提取總 RNA，分光光度計(jì)測定RNA濃度和純度。分離RNA，采用miRCURYTMArray Power Labeling kit標(biāo)記試劑盒進(jìn)行miRNA標(biāo)記。CIP和CIP buffer的混合物（1∶1），經(jīng)孵育、離心后，依次加入標(biāo)記緩沖液、熒光探針（Hy3TM）、DMSO和標(biāo)記酶等，16℃下孵育1 h后終止，置于4℃保存。

1.3.3 芯片雜交 標(biāo)記后，采用miRCURYTMLNA microRNA芯片對Hy3TM標(biāo)記的樣品進(jìn)行雜交，操作按芯片說明書進(jìn)行。樣品混合物與雜交緩沖液混合，經(jīng)變性、冰上孵育、雜交過夜后離心5 min，干燥；微陣列芯片掃描儀掃描玻片，GenePix pro V6.0數(shù)據(jù)分析。

1.3.4 實(shí)時(shí)定量PCR（real-time PCR） Real-time PCR檢測標(biāo)本中 5種 miRNA（miR-1266、miR-4279、miR-3171、miR-3149、miR-892a） 的表達(dá)情況。按照說明書Trizol LS Reagent提取樣品中RNA。紫外吸收測定法進(jìn)行RNA質(zhì)量檢測，使用Nano Drop ND-1000測定RNA濃度、純度。使用樣品的RNA進(jìn)行cDNA合成。RT primers合成如表1（上海百力格生物）。

利用ViiA7 Real-time PCR System進(jìn)行Realtime PCR反應(yīng)。內(nèi)參（has-miR-93）及所有指標(biāo)均按以下程序進(jìn)行：95℃，10 min；40個(gè) PCR循環(huán)（95℃，10 sec；60℃，60 sec收集熒光），建立 PCR產(chǎn)物溶解曲線。各樣品目的miRNA和內(nèi)參分別進(jìn)行Realtime PCR反應(yīng)。數(shù)據(jù)采用2-△△CT法分析。

1.3.5 靶基因預(yù)測 預(yù)測miRNA靶基因主要通過mirbase、miranda、targetscan三個(gè)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行。利用Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes（KEGG）數(shù)據(jù)庫對預(yù)測結(jié)果進(jìn)行信號通路歸類，而后根據(jù)Gene Ontology project數(shù)據(jù)庫對靶基因參與的生化過程、細(xì)胞組分及分子功能進(jìn)行分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件。本研究中均采用t檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 RT引物序列

2 結(jié)果

芯片研究結(jié)果以標(biāo)準(zhǔn)值比值＞1.5倍為顯著上調(diào)（P＜0.05），比值＜1.5倍為顯著下調(diào)（P＜0.05）。

2.1 房顫患者組與正常對照組miRNAs表達(dá)的差異 房顫患者組冠狀竇血（AFCS組）與正常對照外周血（N組）比較，共有64種表達(dá)增多，132種減少。其中miR-1266上調(diào)11.38倍，miR-4279上調(diào)2.38倍；miR-3171、miR-3664-5p 下調(diào)比值分別是0.09、0.14（相當(dāng)于下調(diào) 11.43、6.96 倍），miR-892a、miR-3149無顯著變化。見表2。

表2 房顫患者冠狀竇血與正常外周血比較miRNAs表達(dá)差異

房顫患者組外周血（AFPB）與正常對照組外周血（N組）比較，86種miRNAs表達(dá)增高，202種降低，其中16種明顯上調(diào)，24種明顯下降。其中miR-892a、miR-3149分別增加約 2.32倍和 2.35倍；而miR-3171表達(dá)下降比值約為0.21（相當(dāng)于下調(diào)4.75倍）。見表3。

2.2 房顫患者組自身miRNAs表達(dá)差異 房顫患者組（包括所有陣發(fā)性、持續(xù)性和永久性房顫患者）冠狀竇血與自身外周血比較，共有142種miRNAs表達(dá)差異，6種miRNAs顯著上調(diào)，其中miR-1266分別在陣發(fā)性房顫、持續(xù)性房顫和永久性房顫組上調(diào)5.55倍、8.41倍和4.70倍；miR-4279在三組則分別上調(diào)5.55倍、8.41倍和4.41倍；而miR-4666a-3p分別上調(diào)6.41倍、4.50倍和2.11倍。見表4。

表3 房顫患者外周血與正常外周血比較miRNAs表達(dá)差異

8種顯著下調(diào)，其中miR-3171分別在陣發(fā)性房顫、持續(xù)性房顫和永久性房顫組比值為0.52（1.92倍）、0.47（2.12倍）和 0.25（3.97倍）；miR-3149則是 0.24（4.21倍）、0.28（3.59倍）和 0.15（5.11倍），miR-892a 的改變分別是 0.29、0.13、0.20，約為下調(diào)3.40倍、4.38倍和5.11倍。見表4。

2.3 Real-time PCR結(jié)果 本試驗(yàn)中使用Realtime PCR檢測驗(yàn)證5種候選miRNAs（miR-1266、miR-4279、miR-892a、miR-3149、miR-3171） 在全部房顫患者組冠狀竇血及自身外周血的表達(dá)差異，miR-1266與miR-4279在兩組中的表達(dá)差異均呈明顯上調(diào)，而 miR-892a、miR-3149、miR-3171 表達(dá)則明顯下調(diào)。五種miRNAs的表達(dá)趨勢與芯片結(jié)果保持一致。見圖1。

2.4 miRNAs靶基因預(yù)測結(jié)果 為揭示miRNAs參與調(diào)控房顫病理生理過程的機(jī)制，本研究進(jìn)一步對上述差異表達(dá)的miRNAs進(jìn)行靶基因預(yù)測，對不同功能的靶基因歸類，篩選出可能與房顫相關(guān)的靶基因，其功能涉及房顫發(fā)病機(jī)制的多個(gè)方面。本研究主要通過 3 個(gè)數(shù)據(jù)庫（mirbase、miranda、targetscan）進(jìn)行預(yù)測，篩選所得靶基因至少存于2個(gè)數(shù)據(jù)庫中。

表4 不同類型房顫患者冠狀竇血與自身外周血比較miRNAs表達(dá)差異

3 討論

房顫的發(fā)生涉及多種離子通道功能的改變[10]。而miRNA參與調(diào)控多種心臟電活動(dòng)相關(guān)蛋白的表達(dá)[11]，miRNA失衡引起離子通道功能失調(diào)可能是房顫發(fā)生的基礎(chǔ)，也可能成為心律失常的潛在標(biāo)志物[12,13]。MiRNAs作為生物學(xué)標(biāo)志物已應(yīng)用于心肌梗死、心衰的診斷、治療中[14,15]，房顫患者外周循環(huán)血及心房組織中miRNA的表達(dá)水平已有報(bào)道[9,16]，但結(jié)果不完全一致，不能明確揭示房顫的miRNA調(diào)控機(jī)制，差異表達(dá)的miRNA也不能完全作為早期預(yù)警診斷的標(biāo)記物。

結(jié)合以上問題，我們從臨床實(shí)際出發(fā)，提出了“不同病因所致房顫中參與調(diào)控的miRNA可能不同；房顫不同發(fā)展階段有不同的miRNA參與調(diào)控。尋找從陣發(fā)性到永久性房顫均參與的關(guān)鍵miRNA可能對未來房顫的預(yù)警、診斷和干預(yù)具有重要意義”。同時(shí)提出“冠狀竇血miRNA可能更能反映房顫發(fā)作時(shí)心肌miRNA的調(diào)控狀況和代謝水平”的設(shè)想。所以，本研究在房顫射頻消融術(shù)中從冠狀竇取血，分別與自身外周血和正常外周血對照比較，力求發(fā)現(xiàn)參與從陣發(fā)性、持續(xù)性到永久性房顫發(fā)生發(fā)展和維持的關(guān)鍵miRNA，為房顫的早期預(yù)警診斷治療奠定基礎(chǔ)。

3.1 冠狀竇血與外周血比較的意義 本研究發(fā)現(xiàn)，房顫組冠狀竇血與外周血比較，共有142種miRNAs表達(dá)差異，14個(gè)miRNAs表達(dá)顯著差異，其中6個(gè)表達(dá)上調(diào)：即miR-1266、miR-4279、miR-4787-5p、miR-4666a-3p、kshv-miR-K12-6-3p、miR-3150a-5p；8個(gè)表達(dá)下調(diào)：即miR-892a、miR-3149、miR-3171、miR-3664-5p、miR-3591-3p、miR-4423-5p、miR-4473、miR-574-3p。房顫組與對照組外周血及房顫組冠狀竇血與對照組外周血比較，miRNAs表達(dá)也有明顯差異。本結(jié)果與張瑜等[8]對房顫患者外周血進(jìn)行芯片檢測有所不同，他們發(fā)現(xiàn)持續(xù)和陣發(fā)性房顫患者血清中miR-3169、miR-3612、miR-634、miR-376a、miR-377* 上調(diào) 2 倍以上，下調(diào)的有kshv-miR-K12-5、miR-378c及miR-204。Liu等[9]用測序技術(shù)檢測房顫患者外周血發(fā)現(xiàn)，miR-146-5p、miR-155-5p、miR-199a 表達(dá)上調(diào)。上述研究與本結(jié)果不一致的原因可能有：①樣本來源不同，患者冠狀竇血與外周血表達(dá)miRNA有較明顯差異；②入組患者病情輕重、病程長短、基礎(chǔ)疾病等差別的影響；③所采用的芯片版本、檢測手段不一致；④高通量檢測手段靈敏度過高可能造成結(jié)果偏差。另外，本研究結(jié)果中發(fā)現(xiàn)的關(guān)鍵miRNA多為新發(fā)現(xiàn)的miRNA，可能與本試驗(yàn)采用冠狀竇血及采用最新芯片分析有關(guān)。

3.2 新發(fā)現(xiàn)miRNAs的可能價(jià)值 本結(jié)果發(fā)現(xiàn)，所有房顫組患者中自身冠狀竇血與外周血比較，miR-1266、miR-4279、miR-4666a-3p 均明顯上調(diào)。靶基因預(yù)測結(jié)果顯示，三者分別調(diào)控?cái)?shù)十種離子通道相關(guān)基因。MiR-1266靶基因NALCN稱為“Na漏”電流通道基因，可調(diào)節(jié)細(xì)胞起搏活性[17]；靶基因CACNA1E缺失可致大鼠心律失常發(fā)生[18]；miR-4279可能同時(shí)調(diào)控Ca2+通道基因CACNA1C，以及Ca2+激活K+通道蛋白基因3（KCNN3）。循證醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，KCNN3基因能明顯增加房顫的風(fēng)險(xiǎn)。Lu等[7]動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已證實(shí)靶基因CACNA1C參與房顫調(diào)控。MiR-1266、miR-4279均可能調(diào)控 K+通道基因 KCNE1、KCNH2、KCNJ5。大規(guī)?；蚝Y查發(fā)現(xiàn)，這些K+通道基因多態(tài)性與房顫的發(fā)生密切相關(guān)[19-23]。MiR-4666a-3p同樣可調(diào)控 CACNA1C基因及K+通道蛋白的KCNG3基因，其與神經(jīng)遞質(zhì)釋放、神經(jīng)興奮性、心率、平滑肌收縮等調(diào)節(jié)有關(guān)。

上述分析進(jìn)一步說明，miR-1266、miR-4279、miR-4666a-3p在房顫患者冠狀竇血與自身外周血中均明顯增高，說明其可能是來自心肌組織的特異性miRNA，上述代謝特征支持其作為房顫調(diào)控關(guān)鍵miRNA的研究，它們不僅可能參與調(diào)控房顫的發(fā)生發(fā)展，更有可能成為未來房顫治療的潛在靶點(diǎn)。但三者在患者外周血中未表現(xiàn)明顯增高，可能與樣本量不足有關(guān)，其能否作為房顫早期標(biāo)志物有待進(jìn)一步研究。

與健康人外周血比較，miR-3171在房顫患者冠狀竇血和自身外周血中的表達(dá)均降低，提示其可能主要由心臟以外組織分泌，經(jīng)過冠脈循環(huán)與心肌組織結(jié)合參與房顫調(diào)控后，使冠狀竇血和外周血中水平降低。其中miR-3171在陣發(fā)性、持續(xù)性和永久性房顫組患者外周血均明顯、持續(xù)下降，有可能成為房顫早期診斷的標(biāo)志物。

各組房顫患者外周血miR-892a、miR-3149的表達(dá)均高于冠狀竇血及正常對照組外周血，而冠狀竇血與正常外周血之間未見明顯差異，這些代謝特征說明其可能來源于心肌外組織，經(jīng)冠脈循環(huán)后結(jié)合于心肌組織，所以冠狀竇血中水平降低。這可能是其成為調(diào)控房顫關(guān)鍵miRNA的有力證據(jù)。此外，二者雖在冠狀竇血中表達(dá)降低，但在外周血中明顯增高，極可能成為房顫診斷的標(biāo)志物，也可能與患者衰老、高血壓、高脂血癥等全身疾病或交感興奮和炎癥反應(yīng)狀態(tài)有關(guān)。

3.3 展望與不足 本研究發(fā)現(xiàn)的miRNA多數(shù)為新近發(fā)現(xiàn)，對其功能的研究仍處于探索階段。未來與房顫相關(guān)的關(guān)鍵miRNA的探討，可能不僅僅局限與離子通道調(diào)控相關(guān)的miRNA，要做到早期預(yù)警診斷、預(yù)防和治療，可能要涉及細(xì)胞增殖、衰老、凋亡、炎癥、纖維化等多種生物學(xué)過程的調(diào)控。已有報(bào)道稱，miR-1266在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮調(diào)控作用[24]，miR-892a則介導(dǎo)細(xì)胞色素P450轉(zhuǎn)錄后抑制[25]，但與房顫發(fā)生的關(guān)系還需進(jìn)一步研究。

由于冠狀竇血較難收集，芯片檢測miRNAs表達(dá)譜較為昂貴，本試驗(yàn)測定的病例數(shù)較少，結(jié)果有待于進(jìn)一步驗(yàn)證。此外，所發(fā)現(xiàn)的miRNAs功能研究正在進(jìn)行中。

房顫患者小分子RNA組學(xué)研究結(jié)果與分析 P995

圖1 房顫患者冠狀竇血與外周血中miRNAs表達(dá)real-time PCR結(jié)果

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長城會(huì)先心病介入論壇學(xué)術(shù)亮點(diǎn)

本屆長城會(huì)結(jié)構(gòu)性心臟病論壇歷時(shí)2天，共設(shè)先心病現(xiàn)狀與進(jìn)展、先心病外科手術(shù)治療、先心病心律失常與介入治療并發(fā)癥的管理、先心病相關(guān)介入治療、少見結(jié)構(gòu)性心臟病的介入治療、先心病與卒中、瓣膜病的介入治療、結(jié)構(gòu)性心臟病介入治療病例討論8個(gè)專題，包括35個(gè)專題講座和10個(gè)病例報(bào)告。共邀請了45名國內(nèi)外著名結(jié)構(gòu)性心臟病方面的專家，其中包括7名外籍專家。

本屆長城會(huì)結(jié)構(gòu)性心臟病論壇繼續(xù)秉承“引進(jìn)、創(chuàng)新、合作、發(fā)展”的會(huì)議宗旨和“學(xué)術(shù)、開放、引領(lǐng)、傳播”的會(huì)議方針，在往屆長城會(huì)結(jié)構(gòu)性心臟病論壇的基礎(chǔ)上，本次會(huì)議更加側(cè)重于目前結(jié)構(gòu)性心臟病領(lǐng)域的熱點(diǎn)、焦點(diǎn)和難點(diǎn)問題，如左心耳封堵術(shù)、經(jīng)皮主動(dòng)脈瓣置換術(shù)、卵圓孔未閉與卒中相關(guān)問題等。會(huì)議內(nèi)容豐富、涉及了內(nèi)科、外科、鑲嵌治療、兒科、心臟超聲、肺動(dòng)脈高壓、腦血管科等多個(gè)領(lǐng)域，講座題目新穎、內(nèi)涵豐富，特別是對同一問題的美國經(jīng)驗(yàn)與中國經(jīng)驗(yàn)對比型專題講座將成為本屆結(jié)構(gòu)性心臟病論壇的新亮點(diǎn)與看點(diǎn)，而病例報(bào)告則會(huì)為與會(huì)者增添更多的臨床經(jīng)驗(yàn)。

（朱鮮陽）

The study of miRNA in patients with atrial fibrillation

YUE Yu-nan，YANG Shui-xiang.The Department of Cardiology of Beijing Shijitan Hospital CMU，Beijing 100038，China

YANG Shui-xiang，E-mail：sxyang68@163.com

Objective To investigate the expression profiles of miRNAs in coronary sinus circulating，regulation mechanism and the value of earlier diagnosis of miRNAs in patients with atrial fibrillation（AF）of nonvalvular heart disease.Methods The total 15 patients were divided into 4 groups:paroxysmal，persistent and permanent atrial fibrillation patient’s groups，each group contained 5 patients，while the control group 5 normal volunteers.The peripheral blood（PB）and coronary sinus blood（CSB）were taken from patients before and during the operation of AF radiofrequency ablation，the total RNA was extracted and hybridized with the microRNA chips（microRNA v 18.0），the microarray analysis of expression profile，differential expression of miRNA and clustering analysis in whole genome were made with Volcano Plot and tMEV software respectively.The target gene analysis of miRNAs was research through the database of Mirbase，Miranda and Targetscan.Results There were 14 miRNAs different expression in CSB group compared with in PB group significantly，6 was upregulation:miR-1266，miR-4279，miR-4787-5p，miR-4666a-3p，kshv-miR-K12-6-3p and miR-3150a-5p，and 8 downregulation：miR-892a，miR-3149，miR-3171，miR-3664-5p，miR-3591-3p，miR-4423-5p，miR-4473 and miR-574-3p.Among them，the expression of miR-1266 was increased，but the miR-3171 decreased dramatically whatever in paroxysmal，persistent and permanent atrial fibrillation groups.Also，the different expression of miRNAs in CSB group of AF patients compared with in PB group of normal control persons was shown significantly.Conclusion Compared with PB，the expression of miRNAs in CSB in AF patients themselves group was equal different markedly，which may indicate the miRNAs in CSB can better reflect the real metabolism and regulation status of myocardium in AF condition.The miR-3171，miR-892a and miR-3149 in plasma may be used as biomarker in earlier diagnosis of AF because their expression was increased or decreased respectively from early to end stage of AF continuously；miR-1266,miR-4279，miR-4666a-3p may be served as potential intervening targets of AF in the future.

Atrial fibrillation； miRNA； Gene regulation； Earlier diagnosis

100038 北京市，首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京世紀(jì)壇醫(yī)院心內(nèi)科

楊水祥，E-mail：sxyang68@163.com

10．3969/j．issn．1672－5301．2014．11．010

R541.7

A

1672-5301（2014）11-0995－06

2014-08-13）