★ 張若良 鐘國慶 劉小玉

(贛州市食品藥品檢驗所 江西 贛州 341000)

穿黃清熱膠囊由穿心蓮、一枝黃花兩味藥組成,具有清熱解毒的功效，用于急性上呼吸道感染、急性扁桃體炎、咽喉炎等熱毒壅盛者。原標準只測定制劑中穿心蓮藥材的單一成分脫水穿心蓮內(nèi)酯，因穿心蓮制劑在生產(chǎn)和貯存過程中，其有效成分穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯會相互轉化，故原標準不利于產(chǎn)品的質(zhì)量控制，本文采用HPLC法對制劑中穿心蓮的有效成分穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯進行含量測定，所建立的方法準確、專屬性強，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

Waters e2695高效液相色譜儀(二極管陣列檢測器)；XS205DU型電子天平；穿心蓮內(nèi)酯對照品(批號110797-200307)、脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品(批號110854-200306)均購自中國藥品生物制品檢定所；穿黃清熱膠囊(江西保利制藥有限公司，批號081201，081202，081203，規(guī)格均為0.35g)；甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:Thermo syncronis C18(4.6mm×250mm，5μm)；流動相:甲醇-水(65∶35)；流量1.0mL/min；檢測波長:穿心蓮內(nèi)酯225nm，脫水穿心蓮內(nèi)酯254nm；柱溫：30℃；進樣量10μL。理論板數(shù)按穿心蓮內(nèi)酯峰計算應不低于5000，穿心蓮內(nèi)酯峰與脫水穿心蓮內(nèi)酯峰的分離度大于2.0。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液制備 精密稱取穿心蓮內(nèi)酯對照品10.01mg與脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品10.28mg，同置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液制備 取供試品20粒，精密稱定，取內(nèi)容物混勻，精密稱取約1g，置具塞錐形瓶中，精密加入40%甲醇25mL，稱定重量，浸泡1 h，超聲處理30min，取出，放冷，再稱定重量，用40%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10mL，至中性氧化鋁柱(200～300目，5g，內(nèi)徑1.5cm)上，用甲醇15mL洗脫，收集洗脫液，置25mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 陰性溶液制備 取不含穿心蓮的陰性制劑按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。

2.3 干擾試驗 取供試品溶液，對照品溶液和陰性溶液各10μL，注入液相色譜儀，供試品溶液主峰的保留時間與對照品主峰的保留時間一致，且陰性無干擾，見圖1。

A.對照品(225nm)；B.供試品(225nm)；C.陰性樣品(225nm)；D.對照品(254nm)；E.供試品(254nm)；F.陰性樣品(254nm)

圖1 HPLC色譜圖

(1.穿心蓮內(nèi)酯；2.脫水穿心蓮內(nèi)酯)

2.4 線性關系考察 精密稱取穿心蓮內(nèi)酯對照品12.53mg與脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品12.58mg，同置50mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取0.4，1，2，5，10mL分別置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，各進樣10μL測定。分別以穿心蓮內(nèi)酯及脫水穿心蓮內(nèi)酯進樣中的量(μg)為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線，計算回歸方程，結果穿心蓮內(nèi)酯回歸方程為Y=2.0933×106X+4.4575×103，r=0.9999，脫水穿心蓮內(nèi)酯回歸方程為Y=1.5797×106X+1.1981×104，r=0.9999，結果表明，穿心蓮內(nèi)酯在0.10024～2.5060μg及脫水穿心蓮內(nèi)酯在0.10064～2.5160μg范圍內(nèi)呈良好的線性關系。

2.5 精密度試驗 取對照品溶液重復進樣5次,測得峰面積，穿心蓮內(nèi)酯的RSD為0.30%，脫水穿心蓮內(nèi)酯的RSD為0.37%。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液(批號：081201)于配制后0，2，4，6，8，10 h分別進樣10μL，測得峰面積的RSD，穿心蓮內(nèi)酯為0.26%，脫水穿心蓮內(nèi)酯為0.67%，表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復性試驗 取供試品6份(批號：081201)，照供試品溶液制備方法制成供試品溶液，分別測定含量，穿心蓮內(nèi)酯平均含量為3.50mg/g，RSD為0.39%；脫水穿心蓮內(nèi)酯平均含量為7.06mg/g，RSD為0.45%。

2.8 回收率試驗 取已知含量的供試品(批號081201)約0.4，0.5，0.6g(各3份)，精密稱定，取樣0.4g的分別精密加入對照品的40%甲醇溶液(穿心蓮內(nèi)酯0.5012mg/mL，脫水穿心蓮內(nèi)酯0.5032mg/mL)5mL，甲醇20mL，取樣0.5g的分別精密加入對照品溶液上述對照品溶液6.25mL，甲醇18.75mL，取樣0.6g的分別精密加入上述對照品溶液7.5mL，甲醇17.5mL，分別混勻后按供試品溶液制備方法處理，測定含量，計算回收率，結果見表1～2。

表1 穿心蓮內(nèi)酯回收率測定結果

表2 脫水穿心蓮內(nèi)酯回收率測定結果

2.9 樣品測定 取3批樣品，依法制備供試品溶液，分別取對照品溶液、供試品溶液各10μL進樣，測定峰面積，按外標法計算含量，結果見表3。

表3 樣品含量測定結果 /mg·粒-1

3 討論

3.1 檢測波長的選擇 提取對照品溶液穿心蓮內(nèi)酯與脫水穿心蓮內(nèi)酯保留時間處在200～400nm的波長范圍內(nèi)的光譜圖，結果穿心蓮內(nèi)酯在225nm，脫水穿心蓮內(nèi)酯在254nm，有最大吸收，參照文獻，選用穿心蓮內(nèi)酯225nm，脫水穿心蓮內(nèi)酯254nm作為檢測波長。

3.2 浸泡時間的選擇 取同一批樣品約1g(4份)，試驗分別浸泡0，30，60，120min后同供試品測定方法測定含量，結果分別為3.51，3.68，3.76，3.77mg/粒，表明供試品浸泡60min即可提取完全。

3.3 超聲時間的選擇 取同一批樣品約1g(6份)，試驗浸泡60min后分別超聲0，10，20，30，40，50min后同供試品測定方法測定含量，結果分別為3.49，3.62，3.70，3.76，3.76，3.77mg/粒，表明供試品超聲30min即可提取完全。

3.4 洗脫體積的選擇 取同一批樣品約1g(3份)，試驗甲醇洗脫體積分別為10,15,20mL，其它同供試品測定方法分別測定含量，結果分別為3.67，3.76，3.76mg/粒，表明15mL即可洗脫完全。

[1]國家食品藥品監(jiān)督管理局標準.YBZ07862008[S].

[2]國家藥典委員會.中國藥典[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010.

[3]張建強,張玲,王歡,等.穿心蓮提取工藝研究[J].食品與藥品,2005,7(1):37-40.

[4]杜憬生,莫結麗.HPLC法測定喉康散中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量[J].中藥材,2012(4):656-657.

[5]姚潔,陳健文.HPLC法測定玉葉清火膠囊中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量[J].中國民族民間醫(yī)藥雜志,2012，(10):35-36,38.

[6]許寧,廖亞琴,李喜平.高效液相色譜法測定婦科千金分散片中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯含量[J].中國藥業(yè),2012，(22):59-60.

[7]任睿,張園園.反相高效液相色譜法測定喉舒寧片中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量[J].中南藥學,2011,9(4):271-273.