何勤徑

·論著·

血管生成素-2、血管內(nèi)皮生長因子與微血管密度在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達及臨床意義

何勤徑

目的研究血管生成素-2，血管內(nèi)皮生長因子與微血管密度指標檢測在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達及臨床意義。方法選擇確診的子宮內(nèi)膜異位患者30例，術(shù)中取子宮內(nèi)膜異位病灶和在位新鮮組織。同時選取同期正常子宮內(nèi)膜30例做為對照組。術(shù)前所有患者空腹取靜脈血采用ELISA法進行測定Ang-2、VEGF；術(shù)中取新鮮內(nèi)膜組織，采用免疫組化的方法對子宮內(nèi)膜異位的標本進行Ang-2、VEGF和MVD指標測定。結(jié)果血清和組織中Ang-2、VEGF均有不同程度的表達。與對照組比較，子宮內(nèi)膜異位組和子宮內(nèi)膜在位組的Ang-2、VEGF含量升高，3組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；與子宮內(nèi)膜在位組比較，血清和組織中子宮內(nèi)膜異位組的Ang-2、VEGF含量明顯升高，2組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。子宮內(nèi)膜異位組和子宮內(nèi)膜在位組中CD34標記的MVD表達與對照組比較均有不同成功的升高，其中以子宮內(nèi)膜異位組升高最明顯，3組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結(jié)論檢測子宮內(nèi)膜異位癥患者血清和病灶組織中Ang-2、VEGF和MVD的表達，有利于判斷子宮內(nèi)膜異位癥的病情發(fā)展，為其發(fā)生機制和臨床治療提供基礎(chǔ)。

血管生成素-2；血管內(nèi)皮生長因子；微血管密度；子宮內(nèi)膜異位癥

子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis，EMT)是影響廣大女性的身心健康的常見病，本病雖然是良性病變卻有浸潤、轉(zhuǎn)移和復發(fā)等類似惡性病變的性質(zhì)，可引起不孕不育、痛經(jīng)、性交痛及慢性盆腔痛等[1]，已成為威脅女性生命健康的難治之癥。臨床治療本病多采取藥物治療和手術(shù)治療，副作用大，效果不明顯，另外本病的發(fā)病機制尚未完全明確[2]，因此針對本病的基礎(chǔ)研究和臨床研究受到臨床廣大醫(yī)護工作者的不斷重視。本研究主要通過對血管生成素-2(angiopoietin-2，Ang-2)、血管內(nèi)皮生長因子(ascular endothelial growth factor，VEGF)和微血管密度(microvessel density，MVD)的觀察它們在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達及臨床意義，為臨床治療和診斷提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年8月至2012年8月于我院通過腹腔鏡手術(shù)或開腹手術(shù)后經(jīng)病理檢查確診的子宮內(nèi)膜異位患者30例，年齡30～46歲，平均(35.29±7.6)歲，術(shù)中取子宮內(nèi)膜異位病灶和在位新鮮組織。同時選取同期與我院進行子宮肌瘤切除術(shù)、不孕和卵巢囊腫行手術(shù)治療的患者的正常子宮內(nèi)膜30例做為對照組，年齡32～48歲，平均(38.34±7.3)歲。2組患者術(shù)前月經(jīng)規(guī)律，3個月內(nèi)無激素應(yīng)用史，6個月內(nèi)無妊娠及哺乳史，無生殖系統(tǒng)其他合并疾病，無心腦腎等嚴重內(nèi)科疾病合并癥，2組患者一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 術(shù)前所有患者空腹取靜脈血5 ml，靜置2 h后3 500 r/min離心10min，取上清液于-20℃冷藏用于Ang-2、VEGF的指標檢測。采用ELISA法進行測定，所有試劑均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行，所有標本均在同一條件下進行檢測。

1.2.2 術(shù)中取新鮮內(nèi)膜組織，用0.9%氯化鈉溶液沖洗雜志后，于10%甲醛溶液中進行固定，常規(guī)脫水、浸蠟和包埋，5連續(xù)切片，采用免疫組化的方法對子宮內(nèi)膜異位的標本進行Ang-2、VEGF和MVD指標測定。所有試劑均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行，所有標本均在同一條件下進行檢測。

1.2.3 Ang-2、VEGF指標檢測[3]：采用OLYMPUS-BX41光學顯微鏡隨機選擇5個視野，經(jīng)HMIAS-2000全自動彩色圖像分析系統(tǒng)采集圖像并進行存儲，計算每張切片中陽性目標的平均吸光度。

1.2.4 MVD指標檢測：CD34是管內(nèi)皮細胞的特異性標記物[5]，對新生毛細血管的生長情況有較明確的反映。根據(jù)文獻中Weidner報道的方法[4]進行操作和結(jié)果判定。采用OLYMPUS-BX41光學顯微鏡隨機選擇5個視野，經(jīng)HMIAS-2000全自動彩色圖像分析系統(tǒng)采集圖像并進行存儲，計數(shù)CD34標記的平均陽性微血管數(shù)目為MVD值。

2 結(jié)果

2.1 3組患者血清中Ang-2、VEGF含量的比較 研究發(fā)現(xiàn)，血清中Ang-2、VEGF均有不同程度的表達。與對照組比較，子宮內(nèi)膜異位組和子宮內(nèi)膜在位組的Ang-2、VEGF含量明顯升高，3組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；與子宮內(nèi)膜在位組比較，子宮內(nèi)膜異位組的Ang-2、VEGF含量明顯升高，2組比較差異有統(tǒng)計學院意義(P<0.05)。見表1。

表1 3組患者血清中Ang-2、VEGF含量的比較

表1 3組患者血清中Ang-2、VEGF含量的比較

組別Ang-2VEGF異位內(nèi)膜組76±12*#214±21*#在位內(nèi)膜組58±13*178±20*正常對照組35±12 126±19

注：與對照組比較，*P<0.05；與在位內(nèi)膜組比較，#P<0.05

2.2 3種組織標本中Ang-2、VEGF吸光度值和MVD表達的比較 Ang-2、VEGF和CD34在3種組織中均有不同程度的表達。與對照組比較，子宮內(nèi)膜異位組和子宮內(nèi)膜在位組的Ang-2、VEGF吸光度值升高，3組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；與子宮內(nèi)膜在位組比較，子宮內(nèi)膜異位組的Ang-2、VEGF吸光度值明顯升高，2組比較差異有統(tǒng)計學院意義(P<0.05)。另外，子宮內(nèi)膜異位組和子宮內(nèi)膜在位組中CD34標記的MVD表達與對照組比較均有不同成功的升高，其中以子宮內(nèi)膜異位組升高最明顯，3組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同子宮內(nèi)膜中Ang-2、VEGF的吸光度值及MVD表達的比較

表2 不同子宮內(nèi)膜中Ang-2、VEGF的吸光度值及MVD表達的比較

組別Ang-2VEGFMVD異位內(nèi)膜組0.29±0.18*#0.34±0.11*#42.68±13.85*#在位內(nèi)膜組0.17±0.13*0.48±0.09*31.47±18.46*正常對照組0.12±0.090.37±0.1622.03±17.07

注：與對照組比較，*P<0.05；與在位內(nèi)膜組比較，#P<0.05

3 討論

子宮內(nèi)膜異位癥是指子宮內(nèi)膜腺體及間質(zhì)細胞生長在子宮腔以外的部位，是婦科常見的良性腫瘤，但是這種良性病變的內(nèi)膜組織可像惡性腫瘤一樣侵襲血管產(chǎn)生增生、浸潤、擴散、種植與轉(zhuǎn)移，引起月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)、盆腔疼痛、不孕不育等[6]，嚴重威脅廣大女性的健康，為生活和工作帶來巨大的影響。雖然目前對于子宮內(nèi)膜異位的發(fā)生機制尚未完全闡明，但許多臨床文獻已經(jīng)表明，國內(nèi)外學者逐漸越來越重視這方面的相關(guān)研究[7]。

在大量醫(yī)學工作者的努力下，隨著醫(yī)學的不斷進步和對子宮內(nèi)膜異位癥的研究不斷深入，有文獻報道，新生血管是子宮內(nèi)膜異位病情發(fā)展的重要基礎(chǔ)，而且研究發(fā)現(xiàn)，多種細胞因子和生長因子參與了血管生成的調(diào)控，其中Ang-2、VEGF和MVD的表達在臨床研究范圍內(nèi)得到了廣泛的重視[8]。子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生時，血管內(nèi)皮細胞增生活躍，Ang-2和VEGF是強效和特異的血管生成因子，在某些病理環(huán)境下刺激毛細血管增生，提高血管通透性[9]，為異位生長的腺上皮細胞提供賴以生存的物質(zhì)基礎(chǔ)，因此病灶組織在大量新生血管的支持下不斷發(fā)展。Ang-2與腫瘤血管形成數(shù)目、臨床分期、預(yù)后關(guān)系密切[10]。在血管生成的調(diào)節(jié)過程中，Ang-2與血管內(nèi)皮細胞特異性酪氨酸激酶受體Tie-2結(jié)合，競爭性抑制Ang-1引起的Tie-2受體的磷酸化，使血管穩(wěn)定性遭到破壞，從而促進新生血管的重構(gòu)。VEGF是特異性作用于血管內(nèi)皮細胞的最重要的血管生成因子，尤其是在缺氧、貧血等誘導因素下，當其與受體結(jié)合后能夠刺激毛細血管增生，增強血管通透性，為異位生長的細胞提供生長環(huán)境和物質(zhì)基礎(chǔ)，從而誘發(fā)新生血管的生成。研究證明，Ang-2與VEGF兩者對促進血管生成具有相輔相成、互相促進的作用[11]。當VEGF存在時能夠促進Ang-2的表達，使血管不穩(wěn)定性增加，加劇誘發(fā)新生血管形成，反之，當VEGF不存在時，Ang-2的主要作用是使血管數(shù)目減少，血管退化。說明VEGF 與Ang-2關(guān)系密切，在促進血管生成的過程中有協(xié)同作用[12]，此觀點有助于為子宮內(nèi)膜異位的發(fā)病機制和臨床研究提供重要的理論基礎(chǔ)。另外，MVD是評價血管生成的指標，特異性高，可反映子宮內(nèi)膜毛細血管的生長情況，含量越高，新生血管越豐富，而CD34是血管內(nèi)皮細胞的特異性標記物，其表達可反映MVD的定量分析。

本研究發(fā)現(xiàn)，血清和組織中Ang-2、VEGF均有不同程度的表達。與對照組比較，子宮內(nèi)膜異位組和子宮內(nèi)膜在位組的Ang-2、VEGF含量升高，3組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；與子宮內(nèi)膜在位組比較，血清和組織中子宮內(nèi)膜異位組的Ang-2、VEGF含量明顯升高，2組比較差異有統(tǒng)計學院意義(P<0.05)。子宮內(nèi)膜異位組和子宮內(nèi)膜在位組中CD34標記的MVD表達與對照組比較均有不同成功的升高，其中以子宮內(nèi)膜異位組升高最明顯，3組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

子宮內(nèi)膜異位癥是在多種因素共同作用下形成的，是一個復雜的過程。血管生成對本病的發(fā)生發(fā)展有著重要的意義。Ang-2、VEGF和MVD是誘導血管生成的重要生物學因子，對其深入研究有助于為臨床治療提供廣闊思路。本研究通過對Ang-2、VEGF和MVD進行檢測，探討他們在血清和不同組織中的含量水平，為抗血管治療的方法提供更多的理論依據(jù)，使針對血管生成的術(shù)前輔助治療方法能夠成為術(shù)后預(yù)防復發(fā)子宮內(nèi)膜異位癥的重要方法[13-15]。

綜上所述，通過檢測子宮內(nèi)膜異位癥患者血清和在位及異位病灶組織中Ang-2、VEGF和MVD的表達，能夠?qū)ε袛嘧訉m內(nèi)膜異位癥的發(fā)生和發(fā)展起到指導作用，可為日后對其發(fā)生機制和臨床治療提供廣闊的思路和理論基礎(chǔ)。

1 段瑞麗.Ang-2、VEGF、ENS在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達及意義.鄭州：鄭州大學，2007.1.

2 王爽，張曉玲.Ang-2、VEGF在卵巢子宮內(nèi)膜異位癥中表達及相關(guān)性研究.實用婦產(chǎn)科雜志，2010，26：594-597.

3 趙潔，薛素萍，曲銀娥，等.HIF-1和VEGF在子宮內(nèi)膜異位癥增生期內(nèi)膜中的表達及意義.中國實驗診斷學，2012，16：429-431.

4 weidner N，F(xiàn)olkman J，Pozza F，et al.Tumor angiongenesis：a new significant and independen prognostic indicator in early-stage breast carcinoma.Natl Cancer Inst,1992,84：1875.

5 吳惠琰.TNF．n、VEGF和MVD在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達及意義.實用診斷與治療雜志，2006，20：244-245.

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8 張曉玲，程玉芬，黃歐平，等.血清血管內(nèi)皮生長因子對診治子宮內(nèi)膜異位癥的臨床價值.江西醫(yī)學院學報，2009，49：35-37.

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11 Holash J，Maisonpieire PC，Compton D，et al．Vesse cooption regression and growth in tumors mediated by angiopoietin and VEGF．Science，1999，284：1994-1998.

12 Macho A．Non-pungent Capsaicinoidsfrom Sweet Pepper Synthesis and Evaluation of the Chemopreventive and Anticaneer Potential．Eur J Nutr，2003，42：2-9．

13 王爽,張曉玲.Ang-2、VEGF在子宮內(nèi)膜異位癥中的研究進展.實用臨床醫(yī)學，2008，9：132-136.

14 劉淑艷.子宮內(nèi)膜異位癥患者外周血和腹腔液中血管生成素-2和血管內(nèi)皮細胞生長因子水平的檢測及臨床意義.海南醫(yī)學，2012,21:86-87.

15 范俊,董文韜．欒少紅.子宮內(nèi)膜異位癥患者血清、腹腔液中Ang-2和ENS的表達變化及意義.山東醫(yī)藥，2008，48：47-48.

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.07.026

518100 廣東省深圳市龍崗區(qū)婦幼保健院

R 711.71

A

1002-7386(2014)07-1025-03

2013-10-15)