郭軍英 陳東偉 焦建軍 趙云霞 陳石平

·論著·

高同型半胱氨酸、淀粉樣β蛋白和腫瘤壞死因子-α在阿爾茨海默病中的表達意義

郭軍英 陳東偉 焦建軍 趙云霞 陳石平

目的研究高同型半胱氨酸、淀粉樣β蛋白和腫瘤壞死因子-α在阿爾茨海默病中的表達意義。方法129例癡呆患者根據(jù)患者臨床表現(xiàn)和影像學診斷分為AD組(n=65)和VD組(n=64)，選取同期健康體檢者30例作為正常對照組。取患者入院時清晨空腹周靜脈血3管，每管5 ml，正常對照組為體檢時抽取的血液，另抽取腦脊液2 ml。采用熒光偏振法測定高同型半胱氨酸，采用放射免疫測定法測定淀粉樣β蛋白和腫瘤壞死因子-α。結(jié)果正常對照組高同型半胱氨酸、淀粉樣β蛋白水平與AD組、VD組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。正常對照組和VD組腦脊液中腫瘤壞死因子-α水平與AD組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。AD組淀粉樣β蛋白水平與VD組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。重度AD高同型半胱氨酸、淀粉樣β蛋白、腫瘤壞死因子-α水平與輕度比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，中度AD淀粉樣β蛋白水平與輕度、重度比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。中度AD腫瘤壞死因子-α水平與重度比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結(jié)論AD患者高同型半胱氨酸、淀粉樣β蛋白和腫瘤壞死因子-α存在高表達，且其表達水平隨著病情加重而遞增。

阿爾茨海默病；高同型半胱氨酸；淀粉樣β蛋白；腫瘤壞死因子-α

阿爾茨海默病(AD)是一種起病隱匿且不斷發(fā)展的的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，主要表現(xiàn)為認知障礙和精神行為異常。隨著我國步入老齡化社會，其發(fā)病人數(shù)逐漸增多，發(fā)病率也日益增加，其對病患、家屬社會帶來了一定影響[1]。目前AD的發(fā)病原因不明，其發(fā)病機制有多種學說，且臨床表現(xiàn)與血管性癡呆相近，對臨床確切診斷、治療和療效判定帶來了一定困難[2-4]。因此，特異性的實驗室檢測指標在診斷和鑒別診斷中有重要意義。我院通過對文獻匯總分析，篩選出高同型半胱氨酸、淀粉樣β蛋白和腫瘤壞死因子-α作為AD的特異性檢測指標，以期對臨床工作提供借鑒。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取河北省趙縣人民醫(yī)院2012年8月至2013年11月在我院就診的129例癡呆患者作為研究對象，入選患者臨床病歷資料完整，其中男83例，女46例；年齡47～91歲，平均年齡(68±10)歲；文化程度：小學及以下40例，初中33例，高中37例，大學及以上19例；病程4～62個月，平均病程(41±23)個月；合并心臟病病史19例，糖尿病病史21例，高血壓病史62例。根據(jù)患者臨床表現(xiàn)和影像學診斷分為AD組(n=65)和VD組(n=64)。AD組中，男42例，女23例；年齡47～89歲，平均年齡(67±11)歲；文化程度：小學及以下20例，初中16例，高中19例，大學及以上10例；病程4～62個月，平均病程(42±21)個月；合并心臟病病史10例，糖尿病病史10例，高血壓病史33例；根據(jù)臨床癡呆評定量表，輕度19例、中度24例、重度22例。VD組中，男41例，女23例；年齡48～91歲，平均年齡(68±9)歲；文化程度：小學及以下20例，初中17例，高中18例，大學及以上9例；病程4～61個月，平均病程(40±22)個月；合并心臟病病史9例，糖尿病病史11例，高血壓病史29例。選取同期健康體檢者30例作為對照組，其中男17例，女13例；年齡45～72歲，平均年齡(65±12)歲；文化程度：小學及以下15例，初中4例，高中6例，大學及以上5例；合并心臟病病史6例，糖尿病病史5例，高血壓病史11例。3組性別比、年齡、文化程度、合并癥發(fā)病率間比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

1.2 入選與排除標準

1.2.1 入選標準：①AD患者符合美國國立神經(jīng)病語言障礙卒中研究所AD及相關(guān)疾病協(xié)會(NINCDS-ADRDA)診斷標準；②VD患者符合《中國癡呆診療指南》相關(guān)診斷標準；③入選前一個月未服用促進智力發(fā)育或其他治療精神疾病藥物；④研究均得到患者家屬理解同意，并簽署知情同意書。

1.2.2 排除標準：①排除其他原因?qū)е碌陌V呆，如帕金森病癡呆、腦部腫瘤或癲癇導致的癡呆、酗酒或藥物導致的癡呆等；②有其他精神疾患、語言或聽力障礙或其他原因?qū)е陆Y(jié)果偏倚或無法配合試驗進行者。

1.3 方法 取患者入院時清晨空腹周靜脈血2管，每管5 ml，正常對照組為體檢時抽取的血液，血液放置于肝素抗凝管中，食管為一次性的無熱源，無內(nèi)毒素試管，室溫放置2 h后，采用離心機離心，1 000 r/min，取上清液進行測定。另抽取腦脊液2 ml測定腫瘤壞死因子-α。

1.3.1 高同型半胱氨酸：采用熒光偏振法測定，選用美國雅培公司生產(chǎn)的AXSYM全自動免疫化學發(fā)光分析儀，將已包被了抗體的塑料微珠和待測標本加入反應杯中，再加入堿性磷酸酶標記的抗體，經(jīng)溫育后，形成固相包被抗體-抗原-酶標記抗體復合物。然后將其轉(zhuǎn)移到玻璃纖維柱上，用緩沖液洗滌，沒有結(jié)合的抗原、酶標抗體被洗去，結(jié)合抗原抗體的塑料微珠則被保留在纖維柱濾膜上。這時再加入底物4-MUP，酶標抗體上的堿性磷酸酶將4-MUP分解，脫磷酸形成4-MU。它在365 nm激發(fā)光的照射下，發(fā)出448 nm的熒光。經(jīng)過熒光讀數(shù)儀的記錄、放大，最后由電腦計算出被測物質(zhì)的含量。

1.3.2 淀粉樣β蛋白：放射免疫分析法，采用上海研域生物科技有限公司生產(chǎn)的人β淀粉樣蛋白1-42 (Aβ1-42)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒。設(shè)定空白孔、標準孔和待測樣品孔分別進行加樣，后孵育90 min，棄液體甩干，每孔加入生物素化抗體工作液，棄液體，甩干、洗板3次，后加入酶結(jié)合物工作也，再次棄孔內(nèi)液體，甩干、洗板5次，然后每孔加入底物溶液，覆膜37℃孵育15 min，每孔加終止液，終止反應，立即采用酶標儀在450 nm波長測定各孔光密度值。

1.3.3 腫瘤壞死因子α：放射免疫分析法測定，采用上海撫生實業(yè)有限公司生產(chǎn)的腫瘤壞死因子αElisa試劑盒。實驗前試劑充分混勻，避免產(chǎn)生氣泡，加入稀釋好的標準品和待測樣品于反應孔，立即加入生物素標記的抗體，覆膜，震蕩混勻，37℃孵育1 h，棄孔內(nèi)液體，洗滌，重復3次。每孔加入親和鏈霉素-HRP，震蕩混勻，37℃孵育0.5 h，棄孔內(nèi)液體，洗滌。每孔加入第五A、B震蕩混勻，37℃孵育10 min，取出酶標板，加入終止液，立即在450 nm波長測定各孔光密度值。

2 結(jié)果

2.1 3組檢測指標比較 對照組高同型半胱氨酸、淀粉樣β蛋白水平與AD組、VD組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。對照組和VD組腦脊液中腫瘤壞死因子-α水平與AD組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。AD組淀粉樣β蛋白水平與VD組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見表1。

表1 3組檢測指標比較

表1 3組檢測指標比較

組別高同型半胱氨酸(μmol/L)淀粉樣β蛋白(ng/ml)腫瘤壞死因子-α(ng/ml)AD組(n=65)26±11652±121152±13VD組(n=64)24±10 530±101* 116±17*對照組(n=30) 15±6*# 355±90*# 111±21* F值13.27101.47102.28 P值<0.01<0.01<0.01

注：與AD組比較，*P<0.01；與VD組比較，#P<0.01

2.2 不同嚴重程度AD觀察指標比較 重度AD高同型半胱氨酸、淀粉樣β蛋白、腫瘤壞死因子-α水平與輕度比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，中度AD淀粉樣β蛋白水平與輕度、重度比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。中度AD腫瘤壞死因子-α水平與重度比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同嚴重程度AD觀察指標水平比較

表2 不同嚴重程度AD觀察指標水平比較

組別高同型半胱氨酸(μmol/L)淀粉樣β蛋白(ng/ml)腫瘤壞死因子-α(ng/ml)輕度(n=19)15±6664±139125±17中度(n=22)19±8 586±123*128±16重度(n=24) 23±11* 465±120#△ 139±17*△F值4.4312.794.35P值<0.05<0.01

注：與輕度比較，*P<0.05，#P<0.01；與中度比較，△P<0.05

3 討論

AD是世界范圍內(nèi)中老年人普遍發(fā)生的慢性神經(jīng)退行性疾病，隨著人口老齡化，AD的發(fā)病率日益增加。特異性指標聯(lián)合檢測，對AD的診斷和鑒別診斷有重要意義。研究發(fā)現(xiàn)，高同型半胱氨酸是AD發(fā)病的危險因素[2]。研究表明AD患者大腦存在明顯的炎癥反應，且可以表達出多種炎性因子[3]。淀粉樣β蛋白是近年，淀粉樣β蛋白成為AD研究的熱點，美國國立衛(wèi)生研究院研究表明，淀粉樣β蛋白的分子結(jié)構(gòu)決定了AD的不同的臨床表現(xiàn)和不同的腦損傷程度[5]。

3.1 高同型半胱氨酸 是一種含巰基的氨基酸，其與心腦血管疾病密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)高同型半胱氨酸可以通過毒性、應激等作用損害患者的認知功能[6]。高水平的高同型半胱氨酸可以增加患者氧自由基的含量，促進NO的生成，加重AD患者的病情。本研究發(fā)現(xiàn)AD患者高同型半胱氨酸水平與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，且重度AD高同型半胱氨酸水平與輕、中度AD比較明顯升高(P<0.05)。這與相關(guān)研究結(jié)果相近。

3.2 淀粉樣β蛋白 淀粉樣β蛋白由β淀粉樣前體蛋白水解生成，其在細胞基質(zhì)沉淀、聚積后具有很強的神經(jīng)毒性作用。其沉積不僅與神經(jīng)元的退行性病變有關(guān)，可以激活一系列病理事件，包括星型膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞的激活、血腦屏障的破環(huán)和微循環(huán)的變化等，是AD患者腦內(nèi)老年斑周邊神經(jīng)元變性和死亡的主要原因[5]。本研究發(fā)現(xiàn)AD患者淀粉樣β蛋白水平與VD患者和健康體檢者比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，且隨著AD病情的不斷加重，其表達水平不斷降低(P<0.05)。因此，淀粉樣β蛋白可以作為AD、VD的鑒別診斷標準之一。

3.3 腫瘤壞死因子-α 研究表明，AD發(fā)生發(fā)展過程中炎癥反應起到了重要作用[3]。其在病灶區(qū)的明顯表達，促進了相關(guān)急性期蛋白的產(chǎn)生，尤其增加了淀粉樣β蛋白的沉淀、聚積，造成線粒體能量代謝障礙，細胞結(jié)構(gòu)的破壞，甚至誘導細胞凋亡，導致病情不斷加重。本研究中AD組腦脊液中腫瘤壞死因子-α的表達明顯高于VD組和正常對照組(P<0.05)，且其表達水平隨AD病情的加重而增加(P<0.05)。

綜上所訴，AD患者高同型半胱氨酸、淀粉樣β蛋白和腫瘤壞死因子-α存在高表達，且其表達水平隨著病情加重而遞增。因此AD患者炎性因子的高水平表達和淀粉樣β蛋白的沉積，可加重神經(jīng)毒性，使患者病情進一步惡化，上述三項指標可反應出AD的疾病進程，能作為臨床指導診斷和療效判定的依據(jù)。

1 林英堂，邢孔鴦，李龍宣.阿爾茨海默病不同臨床階段腦脊液中炎前和抗炎細胞因子水平的變化.廣東醫(yī)學院學報，2006,24:349-350.

2 徐安平，李璐，李衛(wèi)寧，等.阿爾茨海默病患者血清同型半胱氨酸水平變化.微循環(huán)學雜志，2012,22:52-53,56.

3 曾赤佳，孟霞，胡河.阿爾茨海默病患者淀粉樣β蛋白和腫瘤壞死因子測定的臨床意義.中國基層醫(yī)藥，2004,11:1461-1462.

4 吳映曼，蔡毅.阿爾茨海默病患者血清和腦脊液中腫瘤壞死因子-α及IL-6和IL-8水平研究.中國全科醫(yī)學，2010,13:3738-3740.

5 李毅，張中興，呂路線，等.阿爾茨海默病與血管性癡呆患者腦脊液tau蛋白及β-淀粉樣蛋白1-42濃度的對照研究.中華精神科雜志，2004,37:220-222.

6 張媛媛，張本恕.同型半胱氨酸與阿爾茨海默病及血管性癡呆.中風與神經(jīng)疾病雜志，2007,24:573-575.

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.07.018

051530 河北省趙縣人民醫(yī)院(郭軍英、陳東偉、焦建軍)；河北省趙縣中醫(yī)院(趙云霞、陳石平)

R 742

A

1002-7386(2014)07-1008-03

2013-10-28)