楊 浩，姚鴻萍，董亞琳，馬 瑛*(.西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，西安 7006；2.陜西省腫瘤醫(yī)院藥劑科， 西安 7006)

紫冰霜是在自制制劑燒傷油的基礎(chǔ)上，經(jīng)過正交實驗優(yōu)選出最佳提取和制備工藝，將劑型改造為水包油(O/W)型中藥外用霜劑[1]。動物實驗表明，紫冰霜具有治療燙傷和促進(jìn)創(chuàng)傷創(chuàng)面愈合的作用[2]，臨床用于治療皮脂性濕疹、局限性硬皮病、剝落性唇炎、老年性皮膚干燥、手足皸裂、Ⅰ度和Ⅱ度燒傷、燙傷、傷口感染和褥瘡等，在保護(hù)創(chuàng)面、抗感染、止痛、抗?jié)B出、收斂、促進(jìn)組織修復(fù)等方面，臨床療效確切。為評價該藥的安全性，我們按照相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則[3-5]，研究于其動物皮膚急性毒性、刺激性和致敏性以及體外抑菌作用。

1 儀器與材料

1.1儀器 電子天平(CP313，上海奧豪斯儀器有限公司)；生化培養(yǎng)箱(LRH-150B，廣東省醫(yī)療器械廠)。

1.2試藥 紫冰霜(由紫草、大黃、地榆和冰片等中藥提取物制備成的霜劑)及霜劑基質(zhì)，由西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部提供，批號110702；磺胺嘧啶鋅軟膏，上海全宇生物科技內(nèi)鄉(xiāng)制藥有限公司，批號120303；2，4-二硝基氟苯，由中國醫(yī)藥公司北京分公司提供，臨用前用750 mL·L-1乙醇為溶劑，將其配制成10 g·L-1致敏質(zhì)量濃度和1 g·L-1激發(fā)質(zhì)量濃度。

1.3動物 白色健康家兔，體質(zhì)量1.8～2.1 kg；白色健康豚鼠，體質(zhì)量200～300 g；雌雄兼用，均由西安交通大學(xué)實驗動物中心提供，合格證號分別為09-018和09-017號。本研究實驗方案及實驗動物的飼養(yǎng)與使用處置，均通過西安交通大學(xué)實驗動物倫理委員會審批。

2 方法

2.1皮膚急性毒性實驗[3-7]取健康家兔24只，用100 g·L-1硫化鈉溶液脫去背部脊柱兩側(cè)毛，每側(cè)面積約為70 cm2，去毛24 h后，選12只去毛家兔進(jìn)行完整皮膚的急性毒性實驗，其余12只去毛家兔進(jìn)行破損皮膚的毒性實驗。制作破損皮膚時，去毛區(qū)用乙醇消毒，用刀片將皮膚劃破，均以表皮滲血為度。將以上24只家兔隨機(jī)分為6組，每組4只：完整皮膚基質(zhì)組、紫冰霜1 g組、紫冰霜2 g組；破損皮膚基質(zhì)組、紫冰霜1 g組、紫冰霜2 g組。將藥物分別輕輕涂抹在受試家兔脫毛皮膚區(qū)，使其與皮膚接觸24 h，給藥后連續(xù)觀察7 d，每天觀察記錄動物的體質(zhì)量、皮膚、毛發(fā)、眼和黏膜的變化及呼吸、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動等中毒表現(xiàn)。

2.2皮膚刺激性實驗[3-7]取健康家兔16只，用100 g·L-1硫化鈉溶液去背部脊椎兩側(cè)毛，每側(cè)面積約70 cm2，去毛后24 h，其中8只作完整皮膚實驗，取剩余8只去毛區(qū)用乙醇消毒，用刀片將脫毛部位皮膚劃破，均以表皮滲血為度。將以上16只家兔隨機(jī)分為4組，每組4只：完整皮膚基質(zhì)組、紫冰霜組；破損皮膚基質(zhì)組、紫冰霜組。實驗采用以基質(zhì)為對照的同體左右側(cè)自身對比法。分別將紫冰霜1 g涂于兔背部左側(cè)的完整皮膚和破損皮膚上；右側(cè)皮膚涂基質(zhì)，每日1次，連續(xù)1周。家兔于末次用藥后24 h，溫水洗除殘留藥物。去除殘留藥物后1，24，48和72 h觀察給藥部位的紅斑、水腫等情況，并進(jìn)行評分已評價刺激強(qiáng)度。

2.3皮膚致敏性實驗[3-7]選皮膚無受傷的白色豚鼠24只，用100 g·L-1硫化鈉溶液給豚鼠背部脊柱兩側(cè)去毛，去毛區(qū)范圍每側(cè)面積約9 cm2。去毛后24 h，按體質(zhì)量隨機(jī)分成3組，每組8只：基質(zhì)組、紫冰霜組和2，4-二硝基氟苯組。

致敏接觸：基質(zhì)組和紫冰霜組分別在豚鼠左側(cè)脫毛區(qū)每只涂抹相應(yīng)藥物0.2 g， 2，4-二硝基氟苯組在豚鼠左側(cè)脫毛區(qū)每只涂敷10 g·L-1的2，4-二硝基氟苯0.2 mL。第7 d和第14 d，以同樣方法重復(fù)1次，于每次藥物去除后觀察皮膚紅斑和水腫情況。

激發(fā)接觸：于末次給藥致敏后14 d，基質(zhì)組和紫冰霜組按原劑量涂抹于每只豚鼠右側(cè)脫毛區(qū)，2，4-二硝基氟苯組在每只豚鼠右側(cè)脫毛區(qū)涂敷1 g·L-1的2，4-二硝基氟苯。6 h后用溫水拭去藥物。即刻觀察，然后于24，48和72 h再次觀察皮膚致敏反應(yīng)情況，進(jìn)行評分、判斷與評價。

2.4體外抑菌實驗[8-9]將濾紙制成直徑6 mm圓形紙片，經(jīng)干熱滅菌后，放入無菌玻璃瓶內(nèi)備用。分別稱取相同量實驗藥紫冰霜和對照藥磺胺嘧啶鋅軟膏，置于已消毒的小瓷杯中，然后放在水浴鍋內(nèi)加熱。分別將紙片浸入融化液中。浸泡2～4 h后平鋪在無菌培養(yǎng)皿中，紫外燈下自然風(fēng)干，制備成含藥紙片。用鑷子分別鑷取含實驗藥和對照藥紙片，貼在已制備好的含有不同細(xì)菌的瓊脂平皿上，放進(jìn)37 ℃的培養(yǎng)箱中孵育20 h。平板孵育后取出，測量抑菌圈直徑。

藥膏紙片擴(kuò)散法的藥敏和抑菌圈大小判斷標(biāo)準(zhǔn)：耐藥≤8 mm；中敏9～11 mm；敏感≥12 mm。

3 結(jié)果

3.1皮膚急性毒性實驗結(jié)果 結(jié)果顯示，破損皮膚動物在開始觀察的2 d內(nèi)，刀痕處有紅斑和輕度水腫，2 d后，紅斑和水腫逐漸消退。其他指標(biāo)與完整皮膚動物相一致：體質(zhì)量無明顯變化；毛發(fā)光滑、有光澤；眼黏膜未見充血、水腫；呼吸平穩(wěn)；行為未見異常；四肢活動正常；動物無死亡。對照組和給藥組各種表現(xiàn)無差異，結(jié)果見表1。

表1 紫冰霜對家兔皮膚的急性毒性

3.2皮膚刺激性實驗結(jié)果 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，家兔首次給藥后1 和24 h，完整皮膚和破損皮膚的給藥側(cè)和對照側(cè)均未見紅斑和水腫。末次給藥24 h后去除殘留藥物，于去除殘留藥物后1，24，48和72 h觀察，結(jié)果完整皮膚和破損皮膚的給藥側(cè)和基質(zhì)對照側(cè)均未見紅斑和水腫，亦未見出血點、皮膚粗糙和菲薄等情況。給藥和觀察期間，動物毛發(fā)光滑、有澤；眼黏膜無充血、水腫；呼吸平穩(wěn)；行為未見異常；四肢活動正常。表明紫冰霜及基質(zhì)對家兔完整皮膚和破損皮膚均無刺激性。

3.3皮膚致敏性實驗結(jié)果 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，2，4-二硝基氟苯組8只豚鼠激發(fā)后6，24，48和72 h，皮膚致敏紅斑和水腫的記分值均顯著高于基質(zhì)對照組，致敏率為100%，為極度致敏性；而紫冰霜組與基質(zhì)對照組各8只豚鼠激發(fā)后6，24，48和72 h的記分值均為0，致敏率為0%，無致敏性，見表2。表明紫冰霜及基質(zhì)對豚鼠均無皮膚致敏性。

表2 紫冰霜對豚鼠皮膚致敏反應(yīng)的評分結(jié)果

3.4體外抑菌實驗結(jié)果 磺胺嘧啶鋅是一種臨床常用的燒傷創(chuàng)面外用藥，該藥具有較強(qiáng)的抗菌作用及良好的制痂和創(chuàng)面保護(hù)作用。本實驗以該藥為對照藥，分別觀察紫冰霜和磺胺嘧啶鋅軟膏對金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、銅綠假單胞菌、大腸桿菌、白色假絲酵母菌5種常見菌的抑菌效果，實驗結(jié)果見表3。

表3 紫冰霜體外抑菌實驗結(jié)果

4 討論

紫冰霜采用O/W型基質(zhì)，可吸收創(chuàng)面滲出物和分泌物，藥物釋放和穿透快，對皮膚正常功能影響小。組方中紫草主治瘡瘍、濕疹、水火燙傷；大黃用于癰腫疔瘡，火毒瘡瘍；地榆解毒斂瘡，癰腫瘡毒；冰片清熱止痛，具有抑菌防腐[10]、消腫抗炎、鎮(zhèn)痛等作用[11]，并且能促進(jìn)藥物的透皮吸收[12]。

本實驗結(jié)果表明，紫冰霜對家兔完整皮膚和破損皮膚無急性毒性和刺激性，對豚鼠完整皮膚無致敏作用。同時，體外實驗表明，紫冰霜對金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌、白色假絲酵母菌具有一定的抑菌作用。

紫冰霜在治療皮脂性濕疹、局限性硬皮病、剝落性唇炎、老年性皮膚干燥、手足皸裂、Ⅰ度和Ⅱ度燒傷、燙傷、傷口感染和褥瘡等多種外科疾病及皮膚病方面安全可靠。本制劑為霜劑，易于涂布，易洗除，不污染衣服，攜帶方便，是一種安全性較好的外用藥，值得臨床推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)：

[1] 馬瑛，姚鴻萍，龐成森，等.正交實驗優(yōu)選紫冰乳膏的提取工藝[J].中國藥房，2011，22(35): 3296-3297.

[2] 馬瑛，姚鴻萍，雷顥，等.紫冰霜治療動物燙傷及其促進(jìn)創(chuàng)傷愈合作用[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2012，32(21): 1713-1715.

[3] 國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心.中藥天然藥物刺激性和溶血性研究的技術(shù)指導(dǎo)原則[S].北京:2005: 3.

[4] 國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心.中藥天然藥物免疫毒性(過敏性、光過敏反應(yīng))研究的技術(shù)指導(dǎo)原則[S].北京:2005: 3.

[5] 中華人民共和國衛(wèi)生部藥政管理局.中藥新藥研究指南[S].1994: 209-212.

[6] 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2006: 159-161.

[7] 徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實驗方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2002: 234-238.

[8] 吳風(fēng)云，童能勝，朱佳芹，等.對11種燒傷外用軟膏的細(xì)菌藥敏實驗結(jié)果分析[J].西北藥學(xué)雜志，2012，27(3): 259-261.

[9] 黎月玲，黃作君，廖國輝， 等.磺胺嘧啶銀凝膠與磺胺嘧啶銀霜劑的體外抑菌比較[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2010，30(11): 965-966.

[10]牟家琬，楊勝華，孫玉梅.龍腦和異龍腦的體外抗菌作用的研究[J].華西藥學(xué)雜志，1989，4(1): 20-22.

[11]侯桂芝，廖仁德，孟如松.冰片對激光燒傷創(chuàng)面的鎮(zhèn)痛及抗炎作用[J].中國藥學(xué)雜志，1995，30 (9): 532-534.

[12]王暉，許衛(wèi)銘.薄荷醇與冰片的促透作用[J].中草藥，1997，28(2): 93-94.