張 峰，王 丹

(聊城市第二人民醫(yī)院，山東臨清252600)

研究［1］發(fā)現(xiàn)，幾乎在所有人類腫瘤中能發(fā)現(xiàn)非整倍體腫瘤細胞，它與大多數(shù)腫瘤的發(fā)生、進展有密切關(guān)系，這種非整倍體狀態(tài)稱為染色體不穩(wěn)定性。在正常染色體分裂中，有絲分裂阻滯缺陷蛋白2(MAD2)能確保紡錘體微管與染色體動粒準確連接，是有絲分裂檢查點調(diào)控的重要基因之一，能確保染色體正常分離，如果MAD2表達異常，會導致染色體異常分離，形成非整數(shù)倍體，導致腫瘤的發(fā)生或進展［2］。目前在多種腫瘤中研究發(fā)現(xiàn)MAD2表達異常下調(diào)［3～6］。本研究利用免疫組化SP法對頭頸部鱗狀細胞癌腫瘤組織中的MAD2進行了檢測，觀察其表達變化，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2009年1月～2011年1月聊城市第二人民醫(yī)院收治的頭頸部鱗狀細胞癌患者101例，男59例，女42例;年齡28～61歲。腫瘤位于頜下區(qū)8例、頸前區(qū)21例、頸動脈鞘區(qū)18例、鼻咽部43例、頸背部11例。病理檢查證實為鱗狀細胞癌;臨床分期為T1期62例、T2期29例、T3期6例、T4期4例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者58例。手術(shù)切除腫瘤組織、距離腫瘤邊界1 cm的正常肌肉組織作為腫瘤旁組織。選擇同期頭頸部組織活檢正常的患者49例(男28例、女21例，年齡26～63歲)，取其頭頸部肌肉組織作對照。

1.2 MAD2檢測方法 采用免疫組化SP法檢測MAD2，檢測試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司。上述各組織標本用10%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片，常規(guī)HE染色觀察(腫瘤組織切片選取實性組織部分制作組織芯片，保證用于免疫組化染色的切片腫瘤細胞數(shù)＞70%)，然后常規(guī)脫蠟、梯度酒精入水、免疫組化染色。染色完成后24 h內(nèi)在光鏡下閱片，光鏡下選取10個視野，MAD2定位于細胞核和(或)細胞質(zhì)，呈棕黃色均勻細顆粒。陽性細胞百分比＜5%為陰性、≥5%為陽性。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS14.0統(tǒng)計學軟件。計數(shù)資料比較用χ2檢驗。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

腫瘤組織、腫瘤旁肌肉組織、正常頭頸部肌肉組織中MAD2的陽性表達率分別為90.1%(91/101)、53.5%(54/101)、46.9%(23/49);前者與后兩者相比，P 均 ＜0.05;后兩者相比，P ＞0.05。有、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的頭頸部鱗狀細胞癌患者腫瘤組織中MAD2陽性表達率分別為 98.3%(57/58)、81.4%(35/43)，兩者相比，P ＜0.05。

3 討論

細胞分裂是活細胞繁殖的基本過程，其中染色體正常分離是其中最重要的一個環(huán)節(jié)，分離過程是在多個檢查點共同監(jiān)控下完成的，此監(jiān)控系統(tǒng)能有效識別紡錘體微管與染色體動粒的連接，從而確保整個過程正常有序［7］。MAD2是監(jiān)控系統(tǒng)中檢查點的重要成分，MAD2異常表達會導致酸化和去磷酸化調(diào)節(jié)機制失常，從而引起細胞有絲分裂的阻滯，最終使細胞形成多倍體，而多倍體細胞往往會導致腫瘤的發(fā)生［8］。目前已在卵巢癌、肝癌、鼻咽癌、前列腺癌等腫瘤中發(fā)現(xiàn)MAD2呈異常表達［9］。

有學者［10］認為MAD2的表達不同于其他癌癥基因或抑癌基因，其表達并非只會高或低，而是在不同腫瘤或腫瘤發(fā)展的不同階段表現(xiàn)為過高或過低，這兩種情況均會導致染色體分離異常。本研究結(jié)果顯示，頭頸部鱗狀細胞癌患者的腫瘤組織、腫瘤旁組織及正常頭頸部肌肉組織中MAD2的陽性表達率逐漸下降，腫瘤組織中MAD2呈異常高表達，未發(fā)現(xiàn)有低表達者。有研究［11］發(fā)現(xiàn)，MAD2與胃黏膜病變密切相關(guān)，隨著病情加重MAD2的表達水平增高，其中胃癌組織中MAD2的表達水平明顯高于胃不典型增生組織，這一結(jié)果與本研究結(jié)果類似。

此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的頭頸部鱗狀細胞癌患者的腫瘤組織中MAD2陽性表達率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，說明MAD2能在一定程度上反映腫瘤的侵襲情況，對頭頸部鱗狀細胞癌的進展評估有一定參考價值。有研究［12］發(fā)現(xiàn)，在胃癌、卵巢癌組織中MAD2的表達與腫瘤分化也有密切關(guān)系。這可能是MAD2異常導致檢查點缺損，其異常表達越明顯，產(chǎn)生的非整倍體細胞就會越多，周圍環(huán)境變化使非整倍體細胞逃避了凋亡，從而演變出更具侵襲性的惡性腫瘤細胞［13］，但目前尚無直接證據(jù)，需進一步研究證實。

本研究對所有患者隨訪3年發(fā)現(xiàn)，術(shù)后生存周期為1 a及2 a者其腫瘤組織中MAD2表達陽性率高于3 a者，說明MAD2與腫瘤治療預后可能有一定關(guān)聯(lián)，是否可作為預后評估參考指標還有待于進一步研究。

［1］彭樹松，王曉玫，劉小燕，等.胃癌組織中 p300/CBP、Smad2蛋白表達及其臨床意義［J］.中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志，2005，15(8):1200-1203.

［2］Wang L，Yin F，Du Y，et al.MAD2 as a key component of mitotic checkpoint:A probable prognostic factor for gastric cancer［J］.Am J Clin Pathol，2009，131(6):793-801.

［3］Sotillo R，Schvartzman JM，Socci ND，et al.MAD2-induced chromosome instability leads to lung tumour relapse after oncogene with drawal［J］.Nature，2010，464(7287):436-440.

［4］Hao X，Zhou Z，Ye S，et al.Effect of MAD2 on paclitaxel induced cell death in ovarian cancer cells［J］.J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci，2010，30(5):620-625.

［5］王瑋，陳應超，周潔，等.鼻咽癌組織中MAD2表達及臨床意義［J］.山東醫(yī)藥，2012，52(35):86-87.

［6］李愛香，程國梅.子宮內(nèi)膜癌組織中MAD2和Mtp53蛋白的表達變化及意義［J］.山東醫(yī)藥，2012，52(6):34-35.

［7］Sotillo R，Hemando E，Díaz-Rodríguez E，et al.MAD2 overexpression promotes aneuploidy and tumorigenesis in mice［J］.Cancer Cell，2007，11(1):9-23.

［8］Pérez de Castro I，de Cárcer G，Malumbres M.A census of mitotic cancer genes:new insights into tumor cell biology and cancer therapy［J］.Carcinogenesis，2007，28(5):899-912.

［9］馬景超，耿敬姝.TGFβR1和SMAD系列蛋白在胃腺癌中的表達［J］.腫瘤學雜志，2012，18(5):325-329.

［10］李擒龍，王文亮，張曉暉，等.hsMAD2基因及Nocodazole對人肝癌細胞生長和細胞周期的影響［J］.臨床與實驗病理學雜志，2006，22(5):590-594.

［11］程志芬，孫鳳丹，張金子.胃癌組織中 TGF-β1、TGF-βRⅡ、SMAD2/3和CDC25蛋白的表達及其臨床意義［J］.臨床與實驗病理學雜志，2011，27(10):1044-1047.

［12］陳浩，許浪.胃癌組織中 1，25-二羥維生素 D3、TGF-β1和SMAD2蛋白的表達［J］.鄭州大學學報(醫(yī)學版)，2013，48(3):370-373.

［13］Liu QD，Hirohashi Y，Du XL，et al.Nek2 targets the mitotic checkpoint proteins MAD2 and CDC20:a mechanism for aneuploidy in cancer［J］.Exp Mol Pathol，2010，88(2):225-233.