吳玲玲，陳國敏，許會(huì)彬，王化芬，田玉靜，楊豐梅，沈 雨

（1-3）-β-D葡聚糖是由D-葡聚糖合成的細(xì)胞壁多聚糖，占真菌細(xì)胞壁成分的50%以上[1]。研究表明，除結(jié)合菌外，所有真菌的細(xì)胞壁均含有（1-3）-β-D葡聚糖，而其他微生物、動(dòng)物及人的細(xì)胞成分和細(xì)胞外液均不含有這種成分，因此在機(jī)體的體液或血液中檢測(cè)（1-3）-β-D葡聚糖水平可以作為診斷深部真菌感染的依據(jù)[2]。本研究對(duì)98例疑似深部真菌感染患者血漿（1-3）-β-D葡聚糖含量進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)對(duì)患者痰標(biāo)本進(jìn)行培養(yǎng)，探討血漿（1-3）-β-D葡聚糖檢測(cè)對(duì)深部真菌感染的診斷價(jià)值，以期對(duì)臨床抗真菌感染提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源 2012年01月—2013年01月筆者所在醫(yī)院疑似深部真菌感染的患者98例，同時(shí)行血漿（1-3）-β-D葡聚糖檢測(cè)和痰培養(yǎng)。

1.2 儀器與試劑 MB-80微生物動(dòng)態(tài)快速檢測(cè)系統(tǒng)，GKT-1M Set動(dòng)態(tài)真菌檢測(cè)試劑盒，T02智能恒溫儀以及冰浴槽均購自北京金山川科技發(fā)展公司，血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板及麥康凱瓊脂平板均購自鄭州安圖綠科生物工程有限公司。

1.3 方法

1.3.1 血漿（1-3）-β-D葡聚糖檢測(cè) ①血漿制備：無菌操作，用專用無熱源真空采血管取靜脈血4 ml輕輕混勻，3000 r/min離心1 min獲得富含血小板血漿；②樣品處理：取上述富含血小板血漿0.1 ml，加入樣品處理液中，搖勻后插入恒溫加熱區(qū)中進(jìn)行70℃干熱10 min，取出后立刻放入冰浴槽中3 min冷卻至30℃ 以下，即為待測(cè)血漿樣品；③樣品測(cè)定：取待測(cè)血漿樣品0.2 ml加入反應(yīng)主劑中，輕輕混勻，待完全溶解后，全部移液至平底試管中，立刻插入MB-80微生物快速動(dòng)態(tài)檢測(cè)系統(tǒng)中進(jìn)行檢測(cè)，反應(yīng)結(jié)束后儀器自動(dòng)計(jì)算結(jié)果。

1.3.2 真菌培養(yǎng) 采用傳統(tǒng)固體平板培養(yǎng)法。

1.3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 12.0進(jìn)行分析。檢測(cè)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，計(jì)量資料組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩種方法陽性檢出率比較 對(duì)98例疑似真菌感染的患者檢測(cè)血漿（1-3）-β-D葡聚糖，51例標(biāo)本檢測(cè)陽性，陽性率為52.04%。同時(shí)對(duì)患者行痰培養(yǎng)，培養(yǎng)出真菌標(biāo)本32例，陽性率為32.65%。其中，28例標(biāo)本的血漿（1-3）-β-D葡聚糖陽性，另有4例標(biāo)本血漿（1-3）-β-D葡聚糖檢測(cè)陰性而真菌培養(yǎng)陽性。血漿（1-3）-β-D葡聚糖檢測(cè)陽性檢出率明顯高于痰培養(yǎng)法（P<0.05）。

2.2 痰培養(yǎng)陽性組與痰培養(yǎng)陰性組血漿（1-3）-β-D葡聚糖檢測(cè)結(jié)果 28例痰培養(yǎng)陽性組血漿（1-3）-β-D葡聚糖含量為（249.44±30.22） pg/ml，70 例痰培養(yǎng)陰性組含量為（119.55±15.11）pg/ml，兩組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3 討 論

近年來，隨著廣譜抗生素和免疫抑制劑的應(yīng)用，深部真菌感染的發(fā)病率逐年上升。目前最常用的真菌檢測(cè)方法是真菌涂片鏡檢和真菌培養(yǎng)鑒定。但真菌涂片鏡檢人工操作誤差大，易漏檢；而真菌培養(yǎng)鑒定雖可靠性強(qiáng)，可作為臨床真菌感染的診斷依據(jù)，但所需時(shí)間長，延誤了最佳診療時(shí)機(jī)。因此急需一種診斷患者深部真菌感染的快速敏感的方法，以便及早用藥及時(shí)治療。

（1-3）-β-D葡聚糖廣泛存在于真菌細(xì)胞壁中，當(dāng)人體發(fā)生深部真菌感染時(shí)，真菌經(jīng)吞噬細(xì)胞的吞噬處理后，（1-3）-β-D葡聚糖可從胞壁中釋放出來，使其在血液及其他體液中含量升高。有文獻(xiàn)報(bào)道通過檢測(cè)血漿（1-3）-β-D葡聚糖，發(fā)現(xiàn)其對(duì)早期診斷深部真菌感染具有指導(dǎo)作用[3]。李波等[4]發(fā)現(xiàn)血漿（1-3）-β-D葡聚糖檢測(cè)法對(duì)兒童深部真菌感染的診斷陽性率明顯高于傳統(tǒng)真菌培養(yǎng)法。

本文結(jié)果表明98例疑似深部真菌感染患者血漿（1-3）-β-D葡聚糖檢測(cè)法的陽性檢出率為52.04%，明顯高于痰培養(yǎng)陽性率（32.65%）。痰培養(yǎng)陽性患者的血漿（1-3）-β-D葡聚糖濃度為（249.44±30.22）pg/ml明顯高于痰培養(yǎng)陰性組的（119.55±15.11）pg/ml。本文中尚有4例標(biāo)本痰真菌培養(yǎng)陽性而血漿（1-3）-β-D葡聚糖檢測(cè)陰性，原因可能為只是上呼吸道感染，即淺部真菌感染。

血漿（1-3）-β-D葡聚糖檢測(cè)法取材方便，獲得結(jié)果時(shí)間短，因此大大提高了診斷效率，能迅速提示有無深部真菌感染。但是有些干擾因素如抗腫瘤藥物及磺胺類藥物等的使用，手術(shù)中使用的紗布和血液透析中的某些類型纖維素膜等均可導(dǎo)致該檢測(cè)出現(xiàn)假陽性。因此，對(duì)于血漿（1-3）-β-D葡聚糖陽性的患者也要結(jié)合影像學(xué)及臨床癥狀綜合診斷。

總之，通過血漿（1-3）-β-D葡聚糖檢測(cè)輔助診斷深部真菌感染簡便快捷，可作為檢測(cè)深部真菌感染的早期診斷方法。

[1]Miyazaki T，Kohno S， Mitsutake K， et al.Plasma（1-3）-β-D glucan and fungal antigenemia in patients with candidemia，aspergillosis， and cryptococcosis[J].J Clin Microbiol， 1995，33（12）：3115-3118.

[2]Karageorgopoulos DE， Vouloumanou EK， Ntziora F， et al.Beta－D－glucan assay for the diagnosis of invasive fungal infections：a meta-analysis[J].Clin Infect Dis， 2011，52（6）：750-770.

[3]Einsele H，Loeffler J.Contribution of new diagnostic approaches to antifungal treatment plans in high-risk haematology patients[J].Clin Microbiol Infect， 2008，14（Suppl 4）：37-45.

[4]李 波.血漿（1-3）-β-D-葡聚糖檢測(cè)兒童深部真菌感染診斷的臨床研究[J]. 四川醫(yī)學(xué)， 2011，32（4）：475-476.