王 征，翟曉建，葉新平，李 琰，郭 滿，李偉漢，張 浩

（1.河南省南陽市中心醫(yī)院乳腺外科 473000；2.廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院普外科，南寧 530000；3.南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校普外科，河南南陽 473061）

三陰性乳腺癌（triple－negative breast cancer，TNBC）發(fā)病較低，占乳腺癌患者總數(shù)的12%～17%［1］。但其有惡性程度高、預(yù)后差等特點(diǎn)［2－4］，治療以細(xì)胞毒性藥物化療為輔助治療，但效果不佳。由于受體缺乏，內(nèi)分泌治療及針對人類表皮生長因子受體2（HER－2）過表達(dá)的靶向治療也無效［5］。所以大家都在嘗試新的治療方法。細(xì)胞因子激活殺菌細(xì)胞（CIK）細(xì)胞療法成為抗腫瘤過繼性細(xì)胞免疫治療的首選方案。本研究嘗試應(yīng)用CIK聯(lián)合化療治療TNBC，評估以CIK為基礎(chǔ)免疫治療TNBC的有效性和安全性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究選取2007年1月至2013年1月就診于南陽市中心醫(yī)院乳腺外科、廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院普外科、南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校普外科住院的TNBC患者420例，分成兩組，分別為CIK免疫細(xì)胞治療加TA方案化療的CIK聯(lián)合化療組和單純TA方案化療的對照組，詳細(xì)了解入組患者病史，進(jìn)行全面的體格檢查并行卡氏功能狀態(tài)評分（KPs），KPs評分標(biāo)準(zhǔn)：KPs≥60分；預(yù)計(jì)生存期大于6個(gè)月。排除心、肝、腎功能不全；并發(fā)其他惡性腫瘤；有精神或心理疾病不能配合治療及療效評估者。入組患者治療前簽署知情同意書。兩組患者年齡、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況之間無明顯差異。

1.2 方法 CIK細(xì)胞制備及回輸，先用Ficoll－泛影酸鈉（Ficoll－Hypaque）密度梯離心將患者外周血的單核細(xì)胞分離，重懸于10%胎牛血清（FBS）的RPMI 1640培養(yǎng)液中，以2×106mL－1鋪滿培養(yǎng)瓶后，按1000U／mL濃度加入γ－干擾素，在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中孵育；第2天加CD3單抗和IL－2繼續(xù)培養(yǎng)；培養(yǎng)10～14d后收集CIK細(xì)胞。經(jīng)檢驗(yàn)合格后，制成100 mL CIK細(xì)胞懸液，靜脈回輸患者。CIK細(xì)胞回輸前2d進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢測，回輸前1h進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢測；對輸入的CIK細(xì)胞用流式細(xì)胞儀（美國BD公司的FACS CaIiur）對CD3、CD4、CD8、NKT等標(biāo)記細(xì)胞進(jìn)行測定和分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，兩兩比較采用t檢驗(yàn)，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，生存時(shí)間比較應(yīng)用Log－rank檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 安全性評價(jià)結(jié)果 按照WHO標(biāo)準(zhǔn)評估每次治療周期中對兩組患者化療的不良反應(yīng)強(qiáng)度，回輸后臨床觀測到無明顯的不良反應(yīng)。兩組均有白細(xì)胞、血小板減少，肝功能損害，胃腸道反應(yīng)、發(fā)熱等常見不良反應(yīng)，在治療過程中未完成CIK治療2例，化療后不能耐受反應(yīng)退出4例，但均無死亡事件發(fā)生，在輸注CIK細(xì)胞過程中有2例出現(xiàn)發(fā)熱反應(yīng)，但未超過38.5℃，觀察后退熱。兩組的不良反應(yīng)接近，見表1。

2.2 細(xì)胞免疫功能 分析兩組治療前后T細(xì)胞免疫功能檢測結(jié)果，CIK治療后CD3＋、CD8＋、NKT細(xì)胞比例升高，與對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 化療聯(lián)合CIK組和單純化療組患者外周血T細(xì)胞亞群的變化（）

表2 化療聯(lián)合CIK組和單純化療組患者外周血T細(xì)胞亞群的變化（）

＊：P＜0.05，與同組治療前比較；Δ：P＜0.05，與對照組治療后比較。

NKT CIK組別 CD3＋ CD4＋ CD8＋聯(lián)合治療組治療前 62.25±12.28 35.38±9.13 28.21±7.45 5.51±4.18治療后 81.14±13.38＊ 34.21±10.18 36.44±12.53Δ＊ 17.14±3.44Δ＊對照組治療前 71.43±13.42 35.71±11.62 30.82±6.51 4.63±5.27治療后 68.19±11.17 31.81±10.25 28.13±10.63 2.17±3.23

2.3 生存質(zhì)量評價(jià) 兩組患者應(yīng)用歐洲癌癥研究與治療組織生存質(zhì)量核心量表（TORTC）評估治療后的生存質(zhì)量。兩組患者軀體功能、角色功能、認(rèn)知功能、情緒功能、社會功能、整體生活質(zhì)量比較，研究組比對照組評分高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3 兩組患者EORTC QLQ－C30各項(xiàng)評分比較（）

表3 兩組患者EORTC QLQ－C30各項(xiàng)評分比較（）

項(xiàng)目 研究組 對照組P軀體功能 80.0±6.7 65.0±7.2 ＜0.05角色功能 67.0±8.2 50.6±7.0 ＜0.05認(rèn)知功能 81.5±4.5 67.1±10.1 ＜0.01情緒功能 63.4±8.7 54.1±6.2 ＜0.05社會功能 65.4±9.4 50.3±8.7 ＜0.05整體生活質(zhì)量 60.2±8.1 46.7±7.2 ＜0.01

圖1 兩組間生存曲線的比較

2.4 化療加CIK組與單純化療組患者治療后的生存時(shí)間評價(jià) 通過電話隨訪、門診復(fù)診及書信隨訪等形式，隨訪6～48個(gè)月，其中，失訪13例，在治療過程中未完成CIK治療2例，化療后不能耐受反應(yīng)退出4例。應(yīng)用Log－rank檢驗(yàn)比較兩組生存時(shí)間，得出χ2＝5.982，P＝0.021，提示化療聯(lián)合CIK治療提高患者的生存時(shí)間，見圖1。

3 討 論

乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中存在免疫逃避、免疫抑制的機(jī)制。CIK是過繼性免疫治療中的一種常見的、有效的手段。安全性高，在心包內(nèi)灌注也有較高的安全性［6］。在本研究中發(fā)現(xiàn)CIK聯(lián)合化療與單純化療的不良反應(yīng)相近，僅在單純輸注CIK免疫細(xì)胞過程中出現(xiàn)中度發(fā)熱，但無惡性不良反應(yīng)發(fā)生。CIK細(xì)胞在外周血中的含量極少（約為1%～5%），只有擴(kuò)增后才能應(yīng)用于臨床腫瘤的治療。臨床中使用的CIK細(xì)胞是通過將采集的患者外周血單個(gè)核細(xì)胞在體外與抗CD3微粒體抗體（McAb）、IL－2及干擾素－γ（IFN－γ）等細(xì)胞因子共同培養(yǎng)，然后獲得一種異質(zhì)細(xì)胞群。該細(xì)胞群兼具T淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗瘤活性及NK細(xì)胞的非主要組織相容性復(fù)合體限制性殺傷腫瘤細(xì)胞的特點(diǎn)［7］。CIK細(xì)胞對不同腫瘤細(xì)胞株有很強(qiáng)的殺傷作用［8］。CIK細(xì)胞與淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞（lymphokine activated killer cells，LAK）［9］、腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞（tumor infiltration lymphocyte，TIL）和 CD3單抗激活的殺傷細(xì)胞（anti－CD3 antibody induced activated killer，CD3AK）等過繼性免疫治療手段相比，具有細(xì)胞擴(kuò)增快、殺瘤活性強(qiáng)、殺瘤譜廣泛、對多重耐藥腫瘤細(xì)胞療效佳、不良反應(yīng)小等優(yōu)勢，已成為過繼性細(xì)胞免疫抗腫瘤治療的首選方案。CIK細(xì)胞治療能夠降低腫瘤患者外周血TRAG比例，提高CD3＋、CD4＋細(xì)胞比例及CD4＋／CD8＋細(xì)胞比值，從而減輕或消除腫瘤患者的免疫抑制狀態(tài)［10］。本研究中檢測T治療后細(xì)胞亞群相對計(jì)數(shù)發(fā)現(xiàn)，CIK聯(lián)合化療治療后患者CD3＋、CD8＋、NKT細(xì)胞百分比較治療前明顯提高，與單純化療組相比，CD3＋、CD8＋、NKT細(xì)胞百分比也升高，單純化療組患者T細(xì)胞亞群比例降低，說明患者接受CIK治療后免疫細(xì)胞增加，免疫功能增強(qiáng)，減輕了化療引起的免疫抑制作用，說明CIK治療有助患者T細(xì)胞功能的恢復(fù)，達(dá)到抗腫瘤目的。在生存質(zhì)量評價(jià)中，EORTC QLQ－C30各項(xiàng)評分均有提高，提示腫瘤患者整體生活質(zhì)量改善。生存時(shí)間上，本研究中患者的生存時(shí)間與對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，生存時(shí)間高于對照組，說明在預(yù)后方面有較好的效果?？傊?，CIK細(xì)胞免疫治療作為輔助治療有較好的有效性及安全性，為TNBC的治療提供了一種新的選擇。

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