郝 潔，邱智東，朱 凱，翁麗麗

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)春 130117)

哈蟆油發(fā)酵乳系實(shí)驗(yàn)室自主研發(fā)，采用益生菌發(fā)酵而成的液體口服制劑。具有較易口服吸收，無刺激氣味的優(yōu)點(diǎn)。解決了哈蟆油固有的口感問題，并通過益生菌的作用將哈蟆油中諸多大分子物質(zhì)分解成小分子物質(zhì)，更易被人體快速和多途徑吸收。本實(shí)驗(yàn)采用原子吸收光譜法對(duì)哈蟆油發(fā)酵乳中鈣、鐵、鋅進(jìn)行測(cè)定，旨在拓展哈蟆油的應(yīng)用領(lǐng)域。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器 島津AA-6800F型原子吸收分光光度計(jì)(日本東京島津制造所)、WX-4000微波消解儀(南京貝帝實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)、Water Purifier 實(shí)驗(yàn)室專用超純水機(jī)(四川沃特爾科技發(fā)展有限公司)、EL204電子天平(梅特勒-托利多上海儀器有限公司)。

1.2 試劑與標(biāo)準(zhǔn)液 鹽酸、硝酸、過氧化氫等，所用試劑均為優(yōu)級(jí)純。20 g/L氧化鑭溶液：稱取23.45 g氧化鑭(純度大于99.99%)，現(xiàn)用少量水濕潤(rùn)再加75 mL鹽酸于1 000 mL容量瓶中，加去離子水稀釋至刻度。鈣標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液[1]:準(zhǔn)確稱取1.248 6 g碳酸鈣(純度大于99.99%)，加50 mL去離子水,加鹽酸溶解，移入1 000 mL容量瓶中,加20 g/L氧化鑭溶液稀釋至刻度，得到鈣的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。濃度為500.0 μg/mL。鐵標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液[2]：稱取高純金屬鐵粉1.000 0 g，用40 mL 50%硝酸溶液溶解，用去離子水定容于1 000 mL容量瓶中。準(zhǔn)確吸取10.0 mL,用2%鹽酸溶液定容到100 mL容量瓶中，得到鐵的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，濃度為100.0 μg/mL。得到鋅標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(亦參照文獻(xiàn)[5])，濃度為100.0 μg/mL。

1.3 實(shí)驗(yàn)樣品 哈蟆油發(fā)酵乳口服液，由長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)研發(fā)中心提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 樣品處理 取3 mL哈蟆油發(fā)酵乳口服液，加硝酸5 mL，放置過夜，再加入過氧化氫1 mL，蓋好消解罐蓋，按表1進(jìn)行微波消解[3]，待消解完成后從微波消解儀中取出消解罐，置于通風(fēng)櫥中140 ℃電熱套上加熱揮發(fā)，蒸至近干，轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，用氧化鑭溶液定容至刻度線，再取10 mL定容至25 mL，搖勻，以測(cè)鈣用。另取樣品2 mL做同樣處理，轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，用去離子水定容至刻度線，搖勻，以測(cè)鐵、鋅用。

表1 微波消解程序

2.2 測(cè)定條件 采用原子吸收光譜法測(cè)定樣品中鈣、鐵、鋅。具體條件見表2[4]。

表2 原子吸收分光光度計(jì)工作條件

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線 用氧化鑭溶液逐級(jí)稀釋鈣標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用去離子水逐級(jí)稀釋鐵、鋅標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，分別配置不同濃度的鈣、鐵、鋅標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，采用原子吸收光譜法按照各元素測(cè)定工作條件，分別對(duì)各元素標(biāo)準(zhǔn)系列溶液進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果見表3。

表3 各元素線性關(guān)系考察結(jié)果

3.2 精密度試驗(yàn) 分別取一定濃度的鈣、鐵、鋅標(biāo)準(zhǔn)工作溶液連續(xù)測(cè)定6次，計(jì)算RSD值，結(jié)果見表4。試驗(yàn)結(jié)果表明儀器精密度良好。

表4 各元素精密度試驗(yàn)結(jié)果

3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按照各元素測(cè)定工作條件進(jìn)行測(cè)定，分別記錄時(shí)間為0，10，20，30，40，50 min時(shí)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液及樣品溶液的吸光度值，并計(jì)算RSD值。鈣、鐵、鋅標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的測(cè)定RSD值分別為2.08%、2.79%、1.13%；樣品溶液鈣、鐵、鋅測(cè)定的RSD值分別為1.15%、1.70%、1.28%。表明測(cè)定結(jié)果在50 min穩(wěn)定，實(shí)驗(yàn)方法穩(wěn)定可行。

3.4 重復(fù)性試驗(yàn) 按樣品處理方法平行處理同一批次的樣品6分,按照各元素測(cè)定工作條件進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得含量平均值分別為288.692 3、1.736、2.361 1 μg/mL,RSD值分別為0.42%、2.99%、2.50%，結(jié)果表明，方法重復(fù)性良好。

3.5 加樣回收率試驗(yàn) 取樣品適量，按各元素含量1∶1的比例加入標(biāo)準(zhǔn)溶液，以樣品處理方法處理，按照各元素測(cè)定工作條件進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果見表5。表明用該法測(cè)定哈蟆油發(fā)酵乳中鈣、鐵、鋅含量，準(zhǔn)確度良好，測(cè)定結(jié)果可靠。

3.6 樣品測(cè)定 取3批哈蟆油發(fā)酵乳口服液，以樣品處理方法處理，每批平行處理2分。按照各元素測(cè)定工作條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表6。

表5 各元素回收試驗(yàn)結(jié)果

表6 哈蟆油發(fā)酵乳含量測(cè)定結(jié)果

4 討論

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，所建立的哈蟆油發(fā)酵乳中鈣、鐵、鋅含量的測(cè)定方法穩(wěn)定可行，準(zhǔn)確度高，測(cè)得其鈣、鐵、鋅含量分別為286.611 1、2.342 6、1.787 0 μg/mL。微量元素是人體維護(hù)正常生理功能必不可少的重要物質(zhì)[5]。鈣除作為骨質(zhì)主要構(gòu)成外，還能增加大腦皮層的抑制過程,調(diào)節(jié)興奮的平衡失調(diào)，增加毛細(xì)血管壁致密度，降低其通透性，減少滲出，具有抗炎消腫、抗過敏作用。鐵是生物體內(nèi)含量最豐富的微量元素之一，是血紅蛋白的重要組成部分和血液中輸送氧氣和交換氧氣的重要元素。鋅參與許多酶的構(gòu)成，這些酶與糖、脂類、核酸、蛋白質(zhì)代謝有關(guān)，能影響激素的合成、分泌及與靶器官結(jié)合功能等[6]。哈蟆油發(fā)酵乳中含有大量的鈣及微量的鋅和鐵，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，市場(chǎng)前景廣闊。

[1]國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.GB-T5009.92-2003食品中鈣的測(cè)定[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2003.

[2]國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.GB541321-2010嬰幼兒食品和乳品中鈣、鐵、鋅、鈉、鉀、鎂、銅和錳的測(cè)定[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2010.

[3]張修景.微波消解樣品-火焰原子吸收光譜法測(cè)定人發(fā)中10種微量元素[J].理化檢驗(yàn)(化學(xué)分冊(cè)),2012,48(6):653.

[4]焦立響,夏艷,黃梅,等.馬蹄香中8種微量元素的初級(jí)形態(tài)分析[J].食品科技,2012,37(2):48-51.

[5]陳福北,陳少東,張利敏,等.原子吸收光譜法測(cè)定山柰中金屬元素[J].食品科技,2010,35(5):316-318.

[6]梁?jiǎn)⒊?沈廣志,魏韜,等.原子吸收光譜法測(cè)定哈蟆油中微量元素[J].微量元素與健康研究,2011,28(3):31-32.