黃 高，劉 霞，王 昆，徐 照，付 強(qiáng)

(貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院，貴陽(yáng) 550002)

《難經(jīng)·四十二難》第二段除了記述五臟的生理活動(dòng)外，首次對(duì)五臟的重量、形態(tài)及容量作了解剖測(cè)量。“肝重四斤四兩，左三葉，右四葉，凡七葉”“脾重二斤三兩，扁廣三寸，長(zhǎng)五寸，有散膏半斤?！盵1]指明了脾臟的寬度是“三寸”，長(zhǎng)度是“五寸”，則知脾臟寬與長(zhǎng)的比例是3∶5，這與今日解剖所見(jiàn)也基本符合；“腎有兩枚，重一斤一兩?！薄峨y經(jīng)》人體解剖學(xué)，是東方醫(yī)學(xué)對(duì)世界醫(yī)學(xué)作出的杰出貢獻(xiàn)。《素問(wèn)·太陰陽(yáng)明論》“脾與胃以膜相連”的描述，藏象學(xué)說(shuō)在此解剖學(xué)的基礎(chǔ)上同功能相結(jié)合最終形成[2]。故中醫(yī)的“肝、脾、腎”應(yīng)有形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)，中醫(yī)的“肝、脾、腎”在形態(tài)上應(yīng)包含解剖學(xué)的“肝、脾、腎”，兩者既相區(qū)別，又相聯(lián)系。本項(xiàng)研究主要通過(guò)觀察四氯化碳致小鼠肝纖維化形成過(guò)程中脾、腎形態(tài)結(jié)構(gòu)的動(dòng)態(tài)變化，從形態(tài)結(jié)構(gòu)上說(shuō)明四氯化碳致小鼠肝纖維化過(guò)程中對(duì)脾、腎所產(chǎn)生的影響。

1 材料與方法

昆明種小鼠，雌雄各半，80只，體質(zhì)量20～25 g，由貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，隨機(jī)分為5組。四氯化碳為上海山浦化工有限公司產(chǎn)品，批號(hào)20040227；顯微鏡攝像CCD照相系統(tǒng)(日本DP73+standard 1.6)；圖像分析儀(日本尼康)。

小鼠常規(guī)飼養(yǎng)1周后，模型1、2、3、4組：每周皮下注射40% CCl4花生油2次0.3 mL/100 g體質(zhì)量[3]，正常對(duì)照組給予相應(yīng)花生油注射，常規(guī)飼養(yǎng)。分別于造模后3、6、9、12周剖殺，取出肝臟、脾臟、腎臟觀察其體積、重量、顏色及表面形態(tài)，并取肝組織、脾組織、腎組織于10%中性甲醛中充分固定后，脫水、包埋、切片，用HE染色。

光鏡下觀察肝組織、脾組織、腎組織的改變。計(jì)算脾指數(shù)：脾指數(shù)=脾重(mg)/體質(zhì)量(g)。在40倍鏡下，觀察8個(gè)視野，計(jì)算白髓占總面積百分比。

2 結(jié)果

2.1 大體觀察 正常對(duì)照組的肝臟、脾臟、腎臟體積、重量、顏色、質(zhì)地正常，模型組小鼠第3周肝臟、脾臟、腎臟體積及重量無(wú)明顯變化，肝臟表面顏色較正常組深、易碎,質(zhì)地仍然柔軟；脾臟、腎臟顏色、質(zhì)地變化不明顯。第6周可見(jiàn)部分肝臟重量有少許減輕,表面有較少淺色花紋，不易碎，質(zhì)地軟;脾臟和腎臟重量有少許增加,表面顏色較第3周模型組深。第9周所取肝組織都有重量減輕，表面也都有不同程度的淺色花紋，質(zhì)地變硬；脾臟重量增加，脾臟增大，顏色較前加深；腎臟重量輕微增加，顏色質(zhì)地改變不明顯。第12周肝組織重量減輕及體積縮小，且表面都有淺色花紋出現(xiàn)，肝臟顏色總體變淺，質(zhì)地較第9周硬;脾臟重量有明顯增加，體積增大，顏色深紫；腎臟重量較前增加，顏色加深。

2.2 光鏡下觀察 正常對(duì)照組小鼠肝小葉結(jié)構(gòu)完整；腎小球及腎小管形態(tài)結(jié)構(gòu)無(wú)異常。模型組小鼠在第3周可見(jiàn)肝細(xì)胞胞漿疏松化，炎細(xì)胞浸潤(rùn)，肝血竇及中央靜脈瘀血;脾組織白髓面積和脾血竇正常，脾細(xì)胞改變不明顯；腎組織結(jié)構(gòu)變化不明顯，能發(fā)現(xiàn)少量上皮細(xì)胞微絨毛脫失。第6周見(jiàn)肝組織有紅色纖維條索形成，肝細(xì)胞出現(xiàn)氣球樣變、脂肪變性及壞死,炎細(xì)胞浸潤(rùn)較多，而瘀血現(xiàn)象不如前；脾組織白髓面積增加，脾細(xì)胞壞死現(xiàn)象增多，白髓和紅髓中可發(fā)現(xiàn)明顯多核巨細(xì)胞，脾血竇有瘀血現(xiàn)象；腎小球結(jié)構(gòu)變化不明顯，但發(fā)現(xiàn)大量腎小管管腔變窄，管壁上皮細(xì)胞濁腫,小部分細(xì)胞出現(xiàn)變性壞死。第9周均可見(jiàn)不同程度纖維條索出現(xiàn)，肝細(xì)胞氣球樣變、脂肪變性及壞死較前加重，較多炎細(xì)胞浸潤(rùn)；脾索結(jié)構(gòu)排列改變，脾細(xì)胞壞死和多核巨細(xì)胞增多較前加重，脾血竇瘀血較前加重；腎小球結(jié)構(gòu)不完整，發(fā)現(xiàn)大量腎小管管壁破壞，管腔變窄，部分細(xì)胞出現(xiàn)變性壞死。細(xì)胞核出現(xiàn)濃縮現(xiàn)象。第12周見(jiàn)肝細(xì)胞索排列紊亂，纖維組織增生明顯，部分肝小葉被纖維組織重新分割形成假小葉，大量炎細(xì)胞滲出。脾索結(jié)構(gòu)排列不規(guī)則，脾細(xì)胞壞死和多核巨細(xì)胞增多明顯，脾血竇瘀血明顯；腎小囊空隙變窄，大量腎小管管腔變窄，管壁不完整，部分細(xì)胞出現(xiàn)變性壞死。細(xì)胞核濃縮現(xiàn)象，部分細(xì)胞與基底膜脫離。

2.3 各組大鼠脾指數(shù)及脾臟白髓面積占總面積百分比的比較結(jié)果 見(jiàn)表1。

組 別白髓占總面積百分比/%脾指數(shù)(mg/g)正常對(duì)照組24.67±2.32 4.21±0.25 模型1組 23.51±3.49 4.52±0.17 模型2組 21.73±2.67#5.63±0.19#模型3組 19.58±2.24#6.41±0.23#模型4組 17.64±3.53#7.22±0.14#

注：與正常對(duì)照組比較，#P<0.05。

正常對(duì)照組脾臟中白髓占總面積百分比明顯高于其他各組(P<0.05)。模型1、2、3和4組中白髓占總面積百分比依次降低(P<0.05),模型4組最低。說(shuō)明隨著四氯化碳腹腔注射周期的延長(zhǎng)，白髓中淋巴組織減少。與之相反，正常對(duì)照組脾指數(shù)明顯低于其他各組(P<0.05)。模型1、2、3和4組中脾指數(shù)依次升高(P<0.05),模型4組最高。說(shuō)明隨著四氯化碳腹腔注射周期的延長(zhǎng)，脾臟重量增加。

3 討論

從中醫(yī)五行角度來(lái)說(shuō)，肝與脾的關(guān)系：肝臟五行屬木，脾臟五行屬土；若肝病犯脾，木強(qiáng)乘土，如仲景曰“見(jiàn)肝之病，知肝傳脾”。肝與腎的關(guān)系：肝臟五行屬木，腎臟五行屬水，兩者的關(guān)系是水生木；若肝行亢盛，損傷腎行，以致子病及母。肝纖維化是現(xiàn)代病理學(xué)概念，中醫(yī)根據(jù)其臨床表現(xiàn)特征，常將其歸入“積聚”“臌脹”“黃疸”“脅痛”等病范疇。對(duì)肝纖維化病因

A為正常小鼠脾臟結(jié)構(gòu)；B為模型組小鼠造模第3周脾臟結(jié)構(gòu)；C為模型組小鼠造模第6周脾臟結(jié)構(gòu)；D為模型組小鼠造模第9周脾臟結(jié)構(gòu)；E為模型組小鼠造模第12周脾臟結(jié)構(gòu)(40×10倍)圖1 小鼠脾臟結(jié)構(gòu)

A為正常小鼠腎臟結(jié)構(gòu)；B為模型組小鼠造模第3周腎臟結(jié)構(gòu)；C為模型組小鼠造模第6周腎臟結(jié)構(gòu)；D為模型組小鼠造模第9周腎臟結(jié)構(gòu)；E為模型組小鼠造模第12周腎臟結(jié)構(gòu)(40×10倍)圖2 小鼠腎臟結(jié)構(gòu)

病機(jī)的認(rèn)識(shí)，現(xiàn)代中醫(yī)在繼承基礎(chǔ)之上各有所側(cè)重，但現(xiàn)代醫(yī)家卻有一點(diǎn)認(rèn)識(shí)是共同的：本病初期多濕熱蘊(yùn)結(jié)，早中期多氣滯血瘀，中后期多肝脾腎虛，晚期多陽(yáng)虛水聚。中西醫(yī)結(jié)合消化委員會(huì)為使辨證分型規(guī)范化，于1993年制定了肝硬化的臨床診斷、中醫(yī)辨證和療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)(試行)[4]，將中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn)分為肝氣郁結(jié)證(含肝胃不和，肝脾不調(diào))、脾虛濕盛證、濕熱內(nèi)蘊(yùn)證、肝腎陰虛證、脾腎陽(yáng)虛證及血瘀證6型，并各證可以相兼。

祖國(guó)醫(yī)學(xué)認(rèn)為，“腎”與機(jī)體抵抗力有密切的關(guān)系，同時(shí)臨床所見(jiàn)的慢性乙型肝炎患者可形成“腎虛”證候。70年代初王靈臺(tái)教授在國(guó)內(nèi)首先提出應(yīng)用補(bǔ)腎為主，清化為輔的方法治療慢性乙型肝炎,取得了比較滿意的效果[5]。目前通過(guò)實(shí)脾補(bǔ)腎治療肝纖維化的研究很多[6-8]，顯示實(shí)脾補(bǔ)腎柔肝方對(duì)肝纖維化具有良好的治療作用。四氯化碳作為肝臟毒物曾有大量研究，對(duì)肝臟的毒性作用是通過(guò)其代謝產(chǎn)生的，在線粒體混合功能氧化酶的作用下，四氯化碳可產(chǎn)生游離基，從而啟動(dòng)脂質(zhì)過(guò)氧化作用，破壞肝細(xì)胞器，最終導(dǎo)致肝細(xì)胞壞死[9]。四氯化碳中毒在不同屬動(dòng)物中可有不同結(jié)果,主要引起肝臟結(jié)構(gòu)和功能的改變。用于醫(yī)學(xué)方面有關(guān)四氯化碳致小鼠肝纖維化中脾、腎形態(tài)學(xué)改變的研究未曾發(fā)現(xiàn)。

本項(xiàng)研究主要通過(guò)觀察四氯化碳致小鼠肝纖維化形成過(guò)程中脾、腎形態(tài)結(jié)構(gòu)的動(dòng)態(tài)變化，從形態(tài)結(jié)構(gòu)上說(shuō)明四氯化碳致小鼠肝纖維化過(guò)程中對(duì)脾、腎所產(chǎn)生的影響。

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