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        脾虛證模型大鼠血清中血管活性腸肽和膽囊收縮素的變化及四君子湯的干預(yù)作用

        2014-08-08 13:20:16張海燕陳君千黃紹剛黃穗平
        吉林中醫(yī)藥 2014年6期
        關(guān)鍵詞:四君子湯莫沙造模

        張海燕,陳君千,張 望,黃紹剛,黃穗平

        (1.廣東省中醫(yī)院,廣州 510120;2.廣州中醫(yī)藥大學(xué),廣州 510405)

        中醫(yī)學(xué)認(rèn)為脾胃是人的后天之本,是臟腑學(xué)說的中心,脾虛證的實(shí)驗(yàn)研究涉及脾與神經(jīng)內(nèi)分泌功能、微量元素吸收、免疫功能、消化吸收功能、酶學(xué)變化等諸方面[1]。本研究探討脾虛證大模型鼠血清中神經(jīng)內(nèi)分泌激素血管活性腸肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)和膽囊收縮素(cholecystokinin,CCK)的變化以及四君子湯對血管活性腸肽和膽囊收縮素的影響,進(jìn)一步闡明四君子湯調(diào)節(jié)胃腸動(dòng)力的機(jī)制。

        1 實(shí)驗(yàn)材料

        SPF級健康成年雄性SD大鼠60只,體質(zhì)量200~250 g,購自廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,動(dòng)物合格證:44007200000275。小承氣湯:以《傷寒論》為依據(jù),其組方為:大黃12 g,枳實(shí)6 g,厚樸9 g;四君子湯:以2000年版中國藥典為依據(jù),其組方為:黨參20 g,白術(shù)(炒)20 g,茯苓20 g,甘草(蜜炙)10 g。藥材均為顆粒劑,由江陰天江藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。加蒸餾水溶解后配制為含生藥1 g/mL溶液。莫沙必利:江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)(批號:130402),規(guī)格:每片5 mg,將藥片研為細(xì)粉,加蒸餾水溶解后配制成1 mg/mL的混懸液。Elisa試劑盒:USCN試劑盒(武漢優(yōu)爾生科技股份有限公司生產(chǎn),VIP產(chǎn)品編號:CEA380Ra,Lot:L130823515;CCK產(chǎn)品編號:CEA802Ra,Lot:L130822500)。水合氯醛:國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,批號:20130314。LX-100手掌型離心機(jī)(江蘇海門市其林門爾儀器有限公司);DG5033A型酶聯(lián)免疫檢測儀(南京華東電子集團(tuán)醫(yī)療裝備有限責(zé)任公司);Ultra Pure UF型和泰凱弗隆實(shí)驗(yàn)室純水系統(tǒng)(上海和泰儀器有限公司);CU-420型電熱恒溫水浴箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)。

        2 實(shí)驗(yàn)方法

        SPF級健康成年雄性SD大鼠60只,采用架式籠養(yǎng)喂養(yǎng),隨機(jī)分為正常組、模型組、四君子湯組、莫沙必利組,每組15只。參照參考文獻(xiàn)[2-3],采用饑飽失常、勞倦、耗氣破氣法復(fù)制脾虛證大鼠模型,正常組不予造模。模型組、四君子湯組、莫沙必利組大鼠每日灌服小承氣湯溶液(小承氣湯每日灌胃量為0.5 g/200 g體質(zhì)量,具體計(jì)算方法見“給藥方法”),隔日半量進(jìn)食,每日下午將大鼠放入水深50 cm、水溫20 ℃的水槽中游泳,以力竭為度(大鼠鼻尖沒入水面10 s),造模2周。

        根據(jù)陳奇主編的《中藥藥理研究方法學(xué)》,按照動(dòng)物體表面積比率換算等效劑量法計(jì)算大鼠給藥量,公式為:大鼠用量(g/kg)=人原生藥用量(g)×0.018×5。四君子湯組大鼠每日灌胃量為1.26 g/200 g體質(zhì)量,莫沙必利組大鼠每日灌胃量為0.27 mg/200 g體質(zhì)量,正常組和模型組大鼠每日灌服生理鹽水量為1 mL/200 g體質(zhì)量。連續(xù)用藥15 d。

        大鼠禁食不禁水24 h后,用7%水合氯醛腹腔麻醉(0.5 mL/100 g體質(zhì)量)后,迅速剖腹,腹主動(dòng)脈取血2 mL,離心后置-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

        VIP、CCK酶聯(lián)免疫分析:參照試劑盒說明書執(zhí)行。

        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

        3.1 各組大鼠一般情況及體質(zhì)量變化 正常組大鼠在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中一直精神良好,活動(dòng)自如,反應(yīng)靈活,毛色光潤,攝食正常,大便呈顆粒狀。造模后各組大鼠于第2天開始泄瀉,大便水分明顯增多,第7天泄瀉明顯,大便溏稀、色黑,肛門周圍有污物,游泳耐力明顯下降;第10天出現(xiàn)瞇眼,成群蜷縮明顯,扎堆,拱背,精神倦怠,嗜臥,進(jìn)食減少,反應(yīng)遲鈍,拉尾排便次數(shù)增多,肛門穢濁;到第14天,大鼠明顯消瘦,毛色晦暗無光澤,提示造模成功。觀察造模后各組大鼠體質(zhì)量明顯下降,亦提示造模成功。

        經(jīng)藥物治療后,四君子湯組與莫沙必利組大鼠于第2天大便水分已減少,漸成形,第3天開始進(jìn)食量恢復(fù)正常,第5天活動(dòng)較前增加,反應(yīng)較前靈敏,第7天精神良好,活動(dòng)正常,反應(yīng)靈活,毛色正常。模型組大鼠恢復(fù)較四君子湯組和莫沙必利組慢3~4 d。

        表1 各組大鼠體質(zhì)量變化比較

        注:與正常組比較,#P<0.01;與模型組比較,△P<0.05。

        3.2 各組大鼠血清血管活性腸肽和膽囊收縮素含量測定結(jié)果 模型組大鼠血清中血管活性腸肽含量明顯減少,與正常組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);經(jīng)治療后,四君子湯組和莫沙必利組大鼠血清中血管活性腸肽含量較模型組顯著升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。模型組大鼠血清膽囊收縮素含量明顯升高,與正常組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);經(jīng)治療后,四君子湯組大鼠血清膽囊收縮素含量較模型組顯著降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),莫沙必利組大鼠血清膽囊收縮素含量較模型組降低,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

        表2 各組大鼠血清血管活性腸肽和膽囊收縮素含量比較 pg/mL

        注:與模型組比較,#P<0.05。

        4 討論

        從最早的單因素造模法逐漸到復(fù)合法,再到病證結(jié)合的造模法無一不顯示著脾虛動(dòng)物模型復(fù)制方法的日趨成熟。本實(shí)驗(yàn)采用大黃、厚樸、枳實(shí)苦寒瀉下之品,游泳力竭及限量飲食法復(fù)合因素,復(fù)制脾虛證大鼠模型,是在中醫(yī)理論的指導(dǎo)下從本質(zhì)上對證候進(jìn)行復(fù)制,并充分體現(xiàn)了中醫(yī)致病因素的多重性。參照大鼠脾氣虛證模型評定標(biāo)準(zhǔn)[2],結(jié)合本實(shí)驗(yàn)各組大鼠一般情況及體質(zhì)量變化,提示成功建立脾虛證模型。

        血管活性腸肽是腸神經(jīng)系統(tǒng)中具有代表性、研究最深入的神經(jīng)肽,是重要的肽類神經(jīng)遞質(zhì)之一。血管活性腸肽神經(jīng)元按功能不同分為運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元與分泌神經(jīng)元,運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元使胃腸及其括約肌舒張,分泌神經(jīng)元可刺激胰液和腸液分泌,保護(hù)腸黏膜,調(diào)節(jié)胃腸吸收[4]。血管活性腸肽的降低可使大鼠胃腸平滑肌收縮、運(yùn)動(dòng)增強(qiáng),造成食物在胃腸內(nèi)停留時(shí)間縮短,吸收障礙,電解質(zhì)平衡出現(xiàn)紊亂,從而表現(xiàn)便溏、腹瀉癥狀。本實(shí)驗(yàn)采用饑飽失常、勞倦、耗氣破氣復(fù)制脾虛證大鼠模型,模型組大鼠血清中血管活性腸肽含量較正常組明顯降低。大鼠血清中血管活性腸肽含量減少可能是該模型出現(xiàn)便溏、腹瀉等癥狀的原因之一。膽囊收縮素分泌細(xì)胞主要位于十二指腸近段和空腸黏膜,在體內(nèi)的生理作用有抑制胃排空,抑制近端十二指腸蠕動(dòng),促進(jìn)遠(yuǎn)端十二指腸和空腸蠕動(dòng),促進(jìn)膽囊收縮等[5]。膽囊收縮素的升高,抑制胃排空和加速空腸蠕動(dòng)的作用加強(qiáng),與模型組大鼠出現(xiàn)納差、腹瀉的癥狀相符合。

        四君子湯是健脾益氣中藥的代表方,是治療脾虛證的經(jīng)典方。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,四君子湯顆粒劑可提高脾虛證大鼠血清中的血管活性腸肽含量,療效與西藥莫沙必利相當(dāng),同時(shí)可提高脾虛證大鼠血清中膽囊收縮素含量,且療效優(yōu)于西藥莫沙必利。從而推測,對于胃腸動(dòng)力的改善,血清中血管活性腸肽含量和膽囊收縮素含量起協(xié)同作用,使胃腸平滑肌的蠕動(dòng)保持正常的張力和節(jié)律,改善大鼠納差、腹瀉癥狀,從而使體質(zhì)量增加,活動(dòng)恢復(fù)正常。

        本研究結(jié)果顯示,采用饑飽失常、勞倦、耗氣破氣造模法復(fù)制脾虛證大鼠模型在一定程度上出現(xiàn)了胃腸功能的紊亂癥狀,這些癥狀的出現(xiàn)可能與大鼠胃腸激素的改變有關(guān),表明脾虛證存在著內(nèi)分泌調(diào)節(jié)的異常,胃腸激素的改變對脾虛證的發(fā)生可能起著重要的直接或間接作用。脾虛證大鼠通過四君子湯治療后,血管活性腸肽和膽囊收縮素都接近正常水平,提示四君子湯能調(diào)節(jié)脾虛證大鼠的胃腸激素,從而糾正其胃腸功能紊亂,這是該方治療脾虛證的作用機(jī)制之一。

        [1]聶建華,孫世發(fā).中醫(yī)脾虛證的近10年相關(guān)研究[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào),2011,39(1):128-130.

        [2]施旭光,翟理祥,鄧淙友,等.脾氣虛證4種造模方法的比較研究[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2013,30(2):196-199.

        [3]劉華生,陳銘佳,王艷明,等.4種脾虛證造模方法的差異性研究[J].中醫(yī)藥信息,2005,22(4)79-80.

        [4]Nussdeofer G G,Malendowicz L K.Role of VIP,PACAP and related peptides in the regulation of the hypothalamo pituitary adrenal axis[J].Peptides,1998,19(8):1443-1467.

        [5]朱金照,陳東風(fēng),冷恩仁.胃腸肽在胃腸運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)中的作用[J].世界華人消化雜志,1997,7(8):687.

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