肖建波，李海麗，王軼楠，王學(xué)靜，張順禮

論著·臨床

NF-κB p65在非霍奇金淋巴瘤中的表達(dá)及臨床意義

肖建波，李海麗，王軼楠，王學(xué)靜，張順禮

目的探討非霍奇金淋巴瘤患者血清和組織 NF-κB p65的表達(dá)是否一致，其表達(dá)與非霍奇金淋巴瘤臨床特征的關(guān)系。方法免疫組化法檢測(cè)58例非霍奇金淋巴瘤患者組織NF-κB p65的表達(dá)，ELISA 法檢測(cè)患者血清NF-κB p65水平。分析血清與組織 NF-κB p65 表達(dá)及與臨床特征的關(guān)系。結(jié)果58例非霍奇金淋巴瘤患者血清、組織的 NF-κB p65表達(dá)率分別為51.7%、55.2%，表達(dá)一致率為75.8%。血清及組織NF-κB p65 的陽(yáng)性表達(dá)與非霍奇金淋巴瘤患者的臨床分期及國(guó)際預(yù)后指數(shù)(IPI)評(píng)分有關(guān)(P<0.05)，而在不同性別、年齡及T、B細(xì)胞亞型之間陽(yáng)性表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹥0.05)。結(jié)論非霍奇金淋巴瘤患者血清NF-κB p65表達(dá)升高，可能部分反映淋巴瘤組織NF-κB p65的表達(dá)水平，同時(shí)與非霍奇金淋巴瘤的臨床分期及IPI相關(guān)。

非霍奇金淋巴瘤；核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB；國(guó)際預(yù)后指數(shù)

核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)是廣泛存在于真核生物細(xì)胞內(nèi)的一種可誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄因子家族蛋白，1986年作為B細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子首先被發(fā)現(xiàn)，與免疫球蛋白κ輕鏈基因增強(qiáng)子結(jié)合，促進(jìn)其表達(dá)，在淋巴瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起著重要作用[1，2]。目前文獻(xiàn)報(bào)道NF-κB p65在淋巴瘤組織中高表達(dá)，且與預(yù)后相關(guān)，但NF-κB p65血清蛋白表達(dá)是否與組織表達(dá)一致，其與臨床特征有何關(guān)系，結(jié)果尚不清楚?，F(xiàn)用ELISA 法和免疫組化方法檢測(cè)NF-κB p65在非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者血清及組織中的表達(dá)情況，探討兩者在淋巴瘤中表達(dá)是否一致及與臨床特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2011年12月—2013年2月我院收治NHL患者58例(病理診斷明確，未做過(guò)放化療)，取患者淋巴結(jié)組織蠟塊，全部重新復(fù)查均經(jīng)HE及免疫組織化學(xué)方法確診。58例患者中，男27例，女31例；年齡15～74歲，中位年齡45.5歲；其中B細(xì)胞NHL 34例(彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤24例、伯基特淋巴瘤2例、黏膜相關(guān)淋巴瘤4例、濾泡淋巴瘤4例)，T細(xì)胞NHL 24例(T淋巴母細(xì)胞淋巴瘤2例、NK/T細(xì)胞淋巴瘤5例、非特殊型外周T細(xì)胞淋巴瘤12例、間變大細(xì)胞淋巴瘤3例、血管免疫母細(xì)胞淋巴瘤2例)；臨床分期I～I(xiàn)I期27例，III～I(xiàn)V期31例。國(guó)際預(yù)后指數(shù)(IPI)評(píng)分：低危組(0～1分)25例，高危組(≥2分)33例；首程治療前采集患者血清，另收集同期40例正常人血清作為健康對(duì)照組，血清經(jīng)標(biāo)本經(jīng)分裝后，保存于-80℃冰箱。

1.2 血清NF-κB p65的ELISA檢測(cè)及陽(yáng)性結(jié)果判定 NF-κB p65 ELISA試劑盒購(gòu)自美國(guó)RD公司，按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。濃度< 40ng/ml為陰性，≥40ng/ml為陽(yáng)性。

1.3 免疫組化方法及陽(yáng)性結(jié)果判定 患者淋巴結(jié)組織蠟塊標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林溶液固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，4μm 厚切片，切片常規(guī)脫蠟水化；0.3% H2O2阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，10%小牛血清封閉切片，滴加一抗，4℃過(guò)夜。PBS洗后滴加廣譜生物素化二抗(1∶200)，SP復(fù)合物(1∶200)，DAB顯色，蘇木精復(fù)染胞核，脫水，透明，封片。NF-κB p65陽(yáng)性為棕黃色細(xì)小顆粒，均位于胞核，在高倍鏡下(×400)對(duì)每個(gè)病變組織隨機(jī)選10個(gè)視野進(jìn)行陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)，根據(jù)染色強(qiáng)度及范圍進(jìn)行判斷，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<25%為陰性，≥25%為陽(yáng)性。以乳腺癌組織NF-κB p65陽(yáng)性片為陽(yáng)性對(duì)照，所有病理標(biāo)本切片用PBS液代替一抗作陰性對(duì)照。免疫組織化學(xué)檢測(cè)采用SP法，SP試劑盒購(gòu)于美國(guó)RD公司。

2 結(jié) 果

2.1 NF-κB p65在血清中的表達(dá) NHL組患者外周血NF-κB p65的表達(dá)明顯高于健康對(duì)照組[(48.2±17.0)ng/ml vs.(22.7±8.3)ng/ml]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。58例NHL患者血清NF-κB p65陽(yáng)性表達(dá)率為51.7%(30/58)。

2.2 NF-κB p65在淋巴瘤組織中的表達(dá) 淋巴瘤組織細(xì)胞核中有NF-κB p65表達(dá)，內(nèi)可見(jiàn)棕黃色顆粒。表達(dá)陽(yáng)性率為55.2%(32/58)。

2.3 血清與組織NF-κB p65表達(dá)的關(guān)系 NHL患者中血清與組織同為陰性20例，同為陽(yáng)性 24例，采用Kappa 一致性檢驗(yàn)，Kappa值=0.516(P﹤0.05) ，可以認(rèn)為具有一致性。采用Spearman秩相關(guān)系數(shù)，rs=0.517，P﹤0. 05，表達(dá)一致率為75.8%。見(jiàn)表1。

表1 NHL患者血清及組織NF-κB p65表達(dá)情況

2.4 NF-κB p65表達(dá)與臨床特征的關(guān)系 58例淋巴瘤患者中，血清及組織NF-κB p65表達(dá)情況與臨床特征關(guān)系，見(jiàn)表2。血清及組織NF-κB p65表達(dá)陽(yáng)性與臨床分期及國(guó)際預(yù)后指數(shù)(IPI)有相關(guān)性(P<0.05)，與其他臨床特征無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3 血清、組織NF-κB p65和臨床特征因素相關(guān)分析

3 討 論

目前研究表明，NF-κB能抑制凋亡與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)[3]。許多血液和實(shí)體腫瘤中都有NF-κB的異常激活。異常激活的NF-κB在腫瘤增生、凋亡、血管生成、侵襲和轉(zhuǎn)移起著重要作用[4]。目前在多種類型的NHL中(例如ABC-DLBCL、MALT淋巴瘤和成人T細(xì)胞淋巴瘤等)均已被證實(shí)存在NF-κB信號(hào)通路的異常活化[5～7]。

NF-κB通路的異常激活可以上調(diào)一系列抗凋亡基因的表達(dá)(Bcl-2、TRAFs和IAPs等)，是誘導(dǎo)細(xì)胞持續(xù)惡性增殖及癌癥發(fā)生的重要原因。它的表達(dá)與部分淋巴瘤的臨床特征及預(yù)后相關(guān)。近年研究發(fā)現(xiàn)，NF-κB的表達(dá)與淋巴母細(xì)胞淋巴瘤的臨床分期相關(guān)，在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤中與IPI同時(shí)作為獨(dú)立不良預(yù)后因素[8]，在胃黏膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤中表達(dá)提示預(yù)后不良[9]。本研究分析非霍奇金淋巴瘤患者血清及組織NF-κB p65表達(dá)與臨床特征關(guān)系時(shí)發(fā)現(xiàn)，NF-κB表達(dá)與臨床分期及IPI有相關(guān)性，與文獻(xiàn)報(bào)道相符[10]。臨床分期及IPI可大致反映非霍奇金淋巴瘤的預(yù)后，NF-κB p65表達(dá)與其相關(guān)，因此NF-κB p65檢測(cè)有可能成為非霍奇金淋巴瘤的預(yù)后指標(biāo)之一，但尚需大樣本及生存分析統(tǒng)計(jì)，需要進(jìn)一步病理亞型分析。

表2 NHL患者血清及組織NF-κB p65表達(dá)與臨床特征的關(guān)系

由于外周血循環(huán)中存在腫瘤細(xì)胞及相關(guān)產(chǎn)物，同時(shí)取材容易、創(chuàng)傷小，操作簡(jiǎn)便，容易動(dòng)態(tài)檢測(cè)，成為目前研究熱點(diǎn)。本組通過(guò)檢測(cè)血清NF-κB表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)NHL患者血清NF-κB p65 表達(dá)明顯高于健康對(duì)照組，提示NF-κB陽(yáng)性表達(dá)與非霍奇金淋巴瘤發(fā)生有關(guān)。血清NF-κB p65表達(dá)與臨床分期及IPI相關(guān)，考慮可能與多數(shù)晚期及高IPI評(píng)分患者，腫瘤負(fù)荷相對(duì)較大，組織及外周血中循環(huán)的腫瘤細(xì)胞較多，異常的NF-κB活化促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)有關(guān)。同時(shí)，NHL患者血清及組織NF-κB p65表達(dá)具有一致性，提示血清NF-κB p65可能部分反映組織NF-κB p65的表達(dá)情況，一般情況下Kappa值>0.7才表明吻合度好，本組Kappa值為0.516，需要大樣本進(jìn)一步證實(shí)和優(yōu)化、標(biāo)化檢驗(yàn)方法，因此目前外周血檢測(cè)尚不能完全替代組織檢測(cè)，但為探尋一個(gè)簡(jiǎn)易的指標(biāo)提供了一定依據(jù)。

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TheexpressionandclinicalsignificanceofNF-κBp65innon-Hodgkin'slymphoma

XIAOJianbo,LIHaili,WANGYinan,WANGXuejing,ZHANGShunli.

ThirdDepartmentofRadiochemicalTherapy,TangshanCityPeople'sHospital，Tangshan063000,China

ObjectiveTo investigate whether the non-Hodgkin's lymphoma patients andorganizations NF-κB p65 expression are consistent with the expression of non-Hodgkin's lymphoma clinical features.MethodsImmunohistochemistry is appliedto detect 58 cases of non-Hodgkin's lymphoma patient organizations NF-κB p65 expression, ELISA assay of serum NF-κB p65 levels. Analysis of serum andtissue NF-κB p65 expression andclinical features.ResultsIn 58 patients serum, the tissue NF-κB p65 expression rates were 51.7%, 55.2%, 75.8% concordance rate expression. Serum andtissue NF-κB p65 positive expression in patients with non-Hodgkin's lymphoma clinical stage andIPI score (P<0.05), but between different gender, age andT, B cell subtype expression the difference was not statistically significant (P>0.05).ConclusionPatients with non-Hodgkin's lymphoma increasedexpression of NF-κB p65, may partly reflect lymphoma NF-κB p65 expression levels, but also associatedwith non-Hodgkin's lymphoma clinical stage andIPI.

Non-Hodgkin's lymphoma; Nuclear transcription factor-κB; International prognostic index

063000 唐山市人民醫(yī)院放化三科

10.3969 / j.issn.1671-6450.2014.01.020

2013-09-05)