趙樂+楊國棟

[摘要] 目的 檢測卵巢癌組織中microRNA-21基因的表達，并探討其與臨床病理因素間的關系。 方法 采用實時定量PCR方法檢測64例卵巢癌組織和30例正常卵巢組織中microRNA-21的相對表達量，并分析microRNA-21的表達量在不同臨床病理因素間的差異。 結果 在正常卵巢組織、卵巢癌組織中microRNA-21的相對表達量分別為4.23±1.02、7.64±0.87，其差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；無淋巴結轉移組與有淋巴轉移組的相對表達量分別為4.99±1.02，7.24±0.91，其差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；臨床分期為0～Ⅱ期及Ⅲ～Ⅳ期的卵巢癌組織中microRNA-21的相對表達量分別為4.42±0.82、7.75±1.13，其差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），但microRNA-21在卵巢癌組織中的表達與患者年齡、臨床病理分型無關，其差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。 結論 microRNA-21的表達量在卵巢癌組織中較正常卵巢組織顯著增加，其異常高表達可能與卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展有關。

[關鍵詞] MicroRNA-21；卵巢癌；qRT-PCR

[中圖分類號] R737.31[文獻標識碼] A[文章編號] 1674-4721（2014）05（b）-0050-03

Expression of MicroRNA-21 in ovarian cancer and its relationship with clinical pathological factors

ZHAO Le1 YANG Guo-dong2

1.Department of Clinical Laboratory,the First Hospital Affiliated to Henan University of Science and Technology,Luoyang 471003,China;2.Department of Vascular Surgery,the First Hospital Affiliated to Henan University of Science and Technology,Luoyang 471003,China

[Abstract] Objective To detect the expression of microRNA-21 gene in ovarian cancer issue,and to explore its relationship with clinical pathological factors. Methods The relative expression amount of microRNA-21 of ovarian cancer tissue in 64 cases and normal ovarian tissue in 30 cases was detected by quantitative real-time PCR,and the difference of the expression amount of microRNA-21 in different clinical pathological factors. Results The relative expression amount of MicroR-21 in normal ovarian tissue and ovarian cancer tissue was 4.23±1.02 and 7.64±0.87 respectively,and there was a statistical difference between the two (P＜0.05);the relative expression amount of the ymph node metastasis group and the lymph node metastasis group was 7.24±0.91 and 4.99±1.02 respectively,and there was a statistical difference between the two groups (P＜0.05);the relative expression amount of microRNA-21 of ovarian cancer tissue 0-Ⅱstage and Ⅲ-Ⅳ stage of clinical stage was4.42±0.82, 7.75±1.13 respectively,and there was a statistical difference between the two(P<0.05).However,microRNA-21 expression was not significantly correlated with the patients′ age and pathological types (P>0.05). Conclusion The expression of microRNA-21 is higher in ovarian cancer tissue compared to normal ovarian tissue,the abnomal high expression of microRNA-21 may be associated with carcinogenesis and development of ovarian cancer.

[Key words] MicroRNA-21;Ovarian cancer;Quantitative real-time PCR

卵巢癌是嚴重威脅我國婦女健康的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢。微小RNA（microRNAs）是一類內源性的小分子RNA，在高等生物的生長發(fā)育過程中起重要的調節(jié)作用。microRNA-21是miRNAs中的一員，現(xiàn)階段研究顯示，microRNA-21在人類多種腫瘤中呈高表達，并參與了細胞的增殖、分化及凋亡過程，且與腫瘤的生長、侵襲、轉移等密切相關，但是，microRNA-21在卵巢癌中的表達情況報道很少，本實驗擬通過檢測microRNA-21在卵巢正常組織及卵巢癌組織中的表達情況，探討microRNA-21在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用，以期有助于卵巢癌發(fā)生機制的研究。

1 資料與方法

1.1一般資料

收集河南科技大學第一附屬醫(yī)院2012年10月~2013年11月手術切除的卵巢癌新鮮組織標本64例，年齡45～62歲，中位年齡52.3歲。臨床分期0～Ⅱ期45例，Ⅲ～Ⅳ期19例；有淋巴轉移者39例，無淋巴轉移者25例。同時收集同一患者遠端正常卵巢組織30例，均經病理證實，且患者術前未接受過放化療。所有標本在離體0.5 h內迅速保存于液氮中備用。

1.2 主要試劑及儀器

DNA marker、RNA提取試劑盒、PCR擴增試劑盒（日本TaKaRa公司），GS-15R臺式低溫高速離心機（美國Beckman公司），PCR擴增儀（德國Biometra公司），Light cycler1.5熒光定量PCR儀（瑞士羅氏公司）。

1.3 引物設計

microRNA-21引物序列，上游：5′-GCCCGCTAGCTTATCAGACTGATG-3′；下游，5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′。內參為U6引物序列，上游： 5′-GCTTCGGCAGCACATATACT-AAAAT-3′；下游：5′-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3′。以上引物均由上海生工公司合成。

1.4 卵巢組織microRNA-21的提取及qRT-PCR

嚴格按照RNA提取試劑盒的操作說明提取總RNA，用紫外分光光度計測量RNA A值，選取A 260 nm/280 nm比值在1.8~2.0的樣本進行進行逆轉錄反應，合成cDNA。以cDNA為模板，嚴格按照qRT-PCR試劑盒說明書進行操作，反應參數(shù)為94℃ 4 min；94℃ 30 s，62℃ 30 s，40個循環(huán)。

1.5 統(tǒng)計學處理

數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0進行統(tǒng)計分析，計量資料用均數(shù)±標準差（x±s）表示，采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 microRNA-21在正常卵巢組織及卵巢癌中相對表達量的比較

正常卵巢組織中microRNA-21的相對表達量為4.23±1.02，明顯低于卵巢癌組織的7.64±0.87（t=2.306，P<0.05）。

2.2 microRNA-21的表達與臨床病理因素間的關系

臨床分期0～Ⅱ期及Ⅲ～Ⅳ期的卵巢癌組織中microRNA-21的相對表達量分別為4.42±0.82、7.75±1.13，其差異有統(tǒng)計學意義（t=1.962，P<0.05）；無淋巴結轉移組與有淋巴轉移組的相對表達量分別為4.99±1.02、7.24±0.91，其差異有統(tǒng)計學意義（t=1.648，P<0.05）；但microRNA-21在卵巢癌組織中的表達與患者的年齡、臨床病理分型無關，其差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）（表1）。

表1 卵巢癌組織中microRNA-21的表達與臨床病理因素間的關系

3 討論

miRNA是由19～22個核苷酸組成的一類單鏈非編碼RNA，通過與mRNA的3′端結合，降解或抑制mRNA的翻譯，可調控人體大約30%的mRNA[1]。近年來的重多研究發(fā)現(xiàn)，miRNA可通過與mRNA的作用，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，參與腫瘤細胞的增殖、分化、凋亡、轉移等過程[2-3]。Lagos-Quintana等[4]于2001年證實，在脊椎動物和非脊椎動物中存在類似于Lin-4和Let-7的miRNA，其中一種即為microRNA-21，microRNA-21位于染色體17q23.2 FRA17B的脆性區(qū)域，其含有22個核苷酸。大量的文獻報道證實，microRNA-21是一種癌基因，通過調控NFIB、PDCD4、PTEN、SPRY2等抑癌基因，在多種腫瘤組織中呈異常高表達[5-7]。本實驗通過qRT-PCR的方法檢測了microRNA-21在正常卵巢組織及卵巢癌組織中的相對表達量，研究發(fā)現(xiàn)，在正常卵巢組織中的microRNA-21的相對表達量為0.237±0.021，明顯低于卵巢癌組織中的0.646±0.027（P<0.05），由此可以推測microRNA-21可能在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起推動作用，microRNA-21的激活可能導致卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展，這與microRNA-21在其他腫瘤組織中的研究結果相似。Schetter等[8-10]研究發(fā)現(xiàn) microRNA-21在結直腸癌中的表達明顯高于其鄰近正常組織。Matsushima等[11]在食管癌中的研究發(fā)現(xiàn)，食管癌組織中的microRNA-21的表達均較正常組織顯著上調，且鱗癌組織中microRNA-21的表達量升高與預后不良有明顯關系。進一步研究發(fā)現(xiàn)，microRNA-21的表達量與患者的年齡、病理學分型無關（P＞0.05），但隨著腫瘤分化程度的降低及淋巴結的轉移，microRNA-21的表達量明顯升高，提示microRNA-21可能在卵巢癌腫瘤細胞的浸潤及轉移過程中發(fā)揮一定的作用，并在一定程度上調控卵巢癌細胞的行為。

綜上所述，本實驗證實了microRNA-21在卵巢癌組織中呈異常高表達，這一發(fā)現(xiàn)可能對卵巢癌的治療和預后具有重要意義，但目前對microRNA-21轉錄調控的作用機制尚不明確，尚需進行后續(xù)研究。

[參考文獻]

[1]Wu Y，F(xiàn)u X，Zhu X，et al.Prognostic role of systemic inflammatory response in renal cell carcinoma:a systematic review and meta-analysis[J].J Cancer Res Clin Oncol，2011， 137（5）：887-896.

[2]Wang B，Zhang Q.The expression and clinical significance of circulating microRNA-21 in serum of five solid tumors[J].J Cancer Res Clin Oncol，2012，138（10）：1659-1666．

[3]Liu M， Tang Q， Qiu M， et al.MiR-21 targets the tumor suppressor RhoB and regulates proliferation,invasion and apoptosis in colorectal cancer cells[J].FEBS Lett，2011，585（19）：2998-3005.

[4]Lagos-Quintana M，Rauhut R，Lendeckel W，et al.Identification of novel genes coding for small expressed RNAs[J]. Science，2001，294（5543）：853-858.

[5]Iliopoulos D，Jaeger SA，Hirsch HA，et al.STAT3 activation of miR-21 and miR-181b-1 via PTEN and CYLD are part of the epigenetic switch linking inflammation to cancer[J].Mol Cell，2010，39（4）：493-506.

[6]Yang CH，Yue J，F(xiàn)an M，et al.IFN induces miR-21 through a signal transducer and activator of transcription 3-dependent pathway as a suppressive negative feedback on IFN-induced apoptosis[J].Cancer Res，2010，70（20）：8108-8116.

[7]Braun J，Hoang-Vu C，Dralle H，et al.Downregulation of microRNAs directs the EMT and invasive potential of anaplastic thyroid carcinomas[J].Oncogene，2010，29（29）：4237-4244.

[8]Schetter AJ，Leung SY，Sohn JJ，et al.MicroRNA expression profiles associated with prognosis and therapeutic outcome in colon adenocarcinoma[J].JAMA，2008，299（4）：425-436.

[9]Chang KH，Miller N，Kheirelseid EA，et al.MicroRNA-21 and PDCD4 expression in colorectal cancer[J].Eur J Surg Oncol，2011，37（7）：597-603.

[10]Ma Y，Zhang P，Yang J，et al.Candidate microRNA biomarkers in human colorectal cancer:systematic review profiling studies and experimental validation[J].Int J Cancer，2012，130（9）：2077-2087.

[11]Matsushima L，Isomoto H，Kohno S，et al.MicroRNAs and esophageal squamous cell carcinoma[J].Digestion，2010， 82（3）：138-144.

（收稿日期：2014-04-01本文編輯：許俊琴）

1.3 引物設計

microRNA-21引物序列，上游：5′-GCCCGCTAGCTTATCAGACTGATG-3′；下游，5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′。內參為U6引物序列，上游： 5′-GCTTCGGCAGCACATATACT-AAAAT-3′；下游：5′-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3′。以上引物均由上海生工公司合成。

1.4 卵巢組織microRNA-21的提取及qRT-PCR

嚴格按照RNA提取試劑盒的操作說明提取總RNA，用紫外分光光度計測量RNA A值，選取A 260 nm/280 nm比值在1.8~2.0的樣本進行進行逆轉錄反應，合成cDNA。以cDNA為模板，嚴格按照qRT-PCR試劑盒說明書進行操作，反應參數(shù)為94℃ 4 min；94℃ 30 s，62℃ 30 s，40個循環(huán)。

1.5 統(tǒng)計學處理

數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0進行統(tǒng)計分析，計量資料用均數(shù)±標準差（x±s）表示，采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 microRNA-21在正常卵巢組織及卵巢癌中相對表達量的比較

正常卵巢組織中microRNA-21的相對表達量為4.23±1.02，明顯低于卵巢癌組織的7.64±0.87（t=2.306，P<0.05）。

2.2 microRNA-21的表達與臨床病理因素間的關系

臨床分期0～Ⅱ期及Ⅲ～Ⅳ期的卵巢癌組織中microRNA-21的相對表達量分別為4.42±0.82、7.75±1.13，其差異有統(tǒng)計學意義（t=1.962，P<0.05）；無淋巴結轉移組與有淋巴轉移組的相對表達量分別為4.99±1.02、7.24±0.91，其差異有統(tǒng)計學意義（t=1.648，P<0.05）；但microRNA-21在卵巢癌組織中的表達與患者的年齡、臨床病理分型無關，其差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）（表1）。

表1 卵巢癌組織中microRNA-21的表達與臨床病理因素間的關系

3 討論

miRNA是由19～22個核苷酸組成的一類單鏈非編碼RNA，通過與mRNA的3′端結合，降解或抑制mRNA的翻譯，可調控人體大約30%的mRNA[1]。近年來的重多研究發(fā)現(xiàn)，miRNA可通過與mRNA的作用，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，參與腫瘤細胞的增殖、分化、凋亡、轉移等過程[2-3]。Lagos-Quintana等[4]于2001年證實，在脊椎動物和非脊椎動物中存在類似于Lin-4和Let-7的miRNA，其中一種即為microRNA-21，microRNA-21位于染色體17q23.2 FRA17B的脆性區(qū)域，其含有22個核苷酸。大量的文獻報道證實，microRNA-21是一種癌基因，通過調控NFIB、PDCD4、PTEN、SPRY2等抑癌基因，在多種腫瘤組織中呈異常高表達[5-7]。本實驗通過qRT-PCR的方法檢測了microRNA-21在正常卵巢組織及卵巢癌組織中的相對表達量，研究發(fā)現(xiàn)，在正常卵巢組織中的microRNA-21的相對表達量為0.237±0.021，明顯低于卵巢癌組織中的0.646±0.027（P<0.05），由此可以推測microRNA-21可能在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起推動作用，microRNA-21的激活可能導致卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展，這與microRNA-21在其他腫瘤組織中的研究結果相似。Schetter等[8-10]研究發(fā)現(xiàn) microRNA-21在結直腸癌中的表達明顯高于其鄰近正常組織。Matsushima等[11]在食管癌中的研究發(fā)現(xiàn)，食管癌組織中的microRNA-21的表達均較正常組織顯著上調，且鱗癌組織中microRNA-21的表達量升高與預后不良有明顯關系。進一步研究發(fā)現(xiàn)，microRNA-21的表達量與患者的年齡、病理學分型無關（P＞0.05），但隨著腫瘤分化程度的降低及淋巴結的轉移，microRNA-21的表達量明顯升高，提示microRNA-21可能在卵巢癌腫瘤細胞的浸潤及轉移過程中發(fā)揮一定的作用，并在一定程度上調控卵巢癌細胞的行為。

綜上所述，本實驗證實了microRNA-21在卵巢癌組織中呈異常高表達，這一發(fā)現(xiàn)可能對卵巢癌的治療和預后具有重要意義，但目前對microRNA-21轉錄調控的作用機制尚不明確，尚需進行后續(xù)研究。

[參考文獻]

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[4]Lagos-Quintana M，Rauhut R，Lendeckel W，et al.Identification of novel genes coding for small expressed RNAs[J]. Science，2001，294（5543）：853-858.

[5]Iliopoulos D，Jaeger SA，Hirsch HA，et al.STAT3 activation of miR-21 and miR-181b-1 via PTEN and CYLD are part of the epigenetic switch linking inflammation to cancer[J].Mol Cell，2010，39（4）：493-506.

[6]Yang CH，Yue J，F(xiàn)an M，et al.IFN induces miR-21 through a signal transducer and activator of transcription 3-dependent pathway as a suppressive negative feedback on IFN-induced apoptosis[J].Cancer Res，2010，70（20）：8108-8116.

[7]Braun J，Hoang-Vu C，Dralle H，et al.Downregulation of microRNAs directs the EMT and invasive potential of anaplastic thyroid carcinomas[J].Oncogene，2010，29（29）：4237-4244.

[8]Schetter AJ，Leung SY，Sohn JJ，et al.MicroRNA expression profiles associated with prognosis and therapeutic outcome in colon adenocarcinoma[J].JAMA，2008，299（4）：425-436.

[9]Chang KH，Miller N，Kheirelseid EA，et al.MicroRNA-21 and PDCD4 expression in colorectal cancer[J].Eur J Surg Oncol，2011，37（7）：597-603.

[10]Ma Y，Zhang P，Yang J，et al.Candidate microRNA biomarkers in human colorectal cancer:systematic review profiling studies and experimental validation[J].Int J Cancer，2012，130（9）：2077-2087.

[11]Matsushima L，Isomoto H，Kohno S，et al.MicroRNAs and esophageal squamous cell carcinoma[J].Digestion，2010， 82（3）：138-144.

（收稿日期：2014-04-01本文編輯：許俊琴）

1.3 引物設計

microRNA-21引物序列，上游：5′-GCCCGCTAGCTTATCAGACTGATG-3′；下游，5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′。內參為U6引物序列，上游： 5′-GCTTCGGCAGCACATATACT-AAAAT-3′；下游：5′-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3′。以上引物均由上海生工公司合成。

1.4 卵巢組織microRNA-21的提取及qRT-PCR

嚴格按照RNA提取試劑盒的操作說明提取總RNA，用紫外分光光度計測量RNA A值，選取A 260 nm/280 nm比值在1.8~2.0的樣本進行進行逆轉錄反應，合成cDNA。以cDNA為模板，嚴格按照qRT-PCR試劑盒說明書進行操作，反應參數(shù)為94℃ 4 min；94℃ 30 s，62℃ 30 s，40個循環(huán)。

1.5 統(tǒng)計學處理

數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0進行統(tǒng)計分析，計量資料用均數(shù)±標準差（x±s）表示，采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 microRNA-21在正常卵巢組織及卵巢癌中相對表達量的比較

正常卵巢組織中microRNA-21的相對表達量為4.23±1.02，明顯低于卵巢癌組織的7.64±0.87（t=2.306，P<0.05）。

2.2 microRNA-21的表達與臨床病理因素間的關系

臨床分期0～Ⅱ期及Ⅲ～Ⅳ期的卵巢癌組織中microRNA-21的相對表達量分別為4.42±0.82、7.75±1.13，其差異有統(tǒng)計學意義（t=1.962，P<0.05）；無淋巴結轉移組與有淋巴轉移組的相對表達量分別為4.99±1.02、7.24±0.91，其差異有統(tǒng)計學意義（t=1.648，P<0.05）；但microRNA-21在卵巢癌組織中的表達與患者的年齡、臨床病理分型無關，其差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）（表1）。

表1 卵巢癌組織中microRNA-21的表達與臨床病理因素間的關系

3 討論

miRNA是由19～22個核苷酸組成的一類單鏈非編碼RNA，通過與mRNA的3′端結合，降解或抑制mRNA的翻譯，可調控人體大約30%的mRNA[1]。近年來的重多研究發(fā)現(xiàn)，miRNA可通過與mRNA的作用，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，參與腫瘤細胞的增殖、分化、凋亡、轉移等過程[2-3]。Lagos-Quintana等[4]于2001年證實，在脊椎動物和非脊椎動物中存在類似于Lin-4和Let-7的miRNA，其中一種即為microRNA-21，microRNA-21位于染色體17q23.2 FRA17B的脆性區(qū)域，其含有22個核苷酸。大量的文獻報道證實，microRNA-21是一種癌基因，通過調控NFIB、PDCD4、PTEN、SPRY2等抑癌基因，在多種腫瘤組織中呈異常高表達[5-7]。本實驗通過qRT-PCR的方法檢測了microRNA-21在正常卵巢組織及卵巢癌組織中的相對表達量，研究發(fā)現(xiàn)，在正常卵巢組織中的microRNA-21的相對表達量為0.237±0.021，明顯低于卵巢癌組織中的0.646±0.027（P<0.05），由此可以推測microRNA-21可能在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起推動作用，microRNA-21的激活可能導致卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展，這與microRNA-21在其他腫瘤組織中的研究結果相似。Schetter等[8-10]研究發(fā)現(xiàn) microRNA-21在結直腸癌中的表達明顯高于其鄰近正常組織。Matsushima等[11]在食管癌中的研究發(fā)現(xiàn)，食管癌組織中的microRNA-21的表達均較正常組織顯著上調，且鱗癌組織中microRNA-21的表達量升高與預后不良有明顯關系。進一步研究發(fā)現(xiàn)，microRNA-21的表達量與患者的年齡、病理學分型無關（P＞0.05），但隨著腫瘤分化程度的降低及淋巴結的轉移，microRNA-21的表達量明顯升高，提示microRNA-21可能在卵巢癌腫瘤細胞的浸潤及轉移過程中發(fā)揮一定的作用，并在一定程度上調控卵巢癌細胞的行為。

綜上所述，本實驗證實了microRNA-21在卵巢癌組織中呈異常高表達，這一發(fā)現(xiàn)可能對卵巢癌的治療和預后具有重要意義，但目前對microRNA-21轉錄調控的作用機制尚不明確，尚需進行后續(xù)研究。

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[2]Wang B，Zhang Q.The expression and clinical significance of circulating microRNA-21 in serum of five solid tumors[J].J Cancer Res Clin Oncol，2012，138（10）：1659-1666．

[3]Liu M， Tang Q， Qiu M， et al.MiR-21 targets the tumor suppressor RhoB and regulates proliferation,invasion and apoptosis in colorectal cancer cells[J].FEBS Lett，2011，585（19）：2998-3005.

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[5]Iliopoulos D，Jaeger SA，Hirsch HA，et al.STAT3 activation of miR-21 and miR-181b-1 via PTEN and CYLD are part of the epigenetic switch linking inflammation to cancer[J].Mol Cell，2010，39（4）：493-506.

[6]Yang CH，Yue J，F(xiàn)an M，et al.IFN induces miR-21 through a signal transducer and activator of transcription 3-dependent pathway as a suppressive negative feedback on IFN-induced apoptosis[J].Cancer Res，2010，70（20）：8108-8116.

[7]Braun J，Hoang-Vu C，Dralle H，et al.Downregulation of microRNAs directs the EMT and invasive potential of anaplastic thyroid carcinomas[J].Oncogene，2010，29（29）：4237-4244.

[8]Schetter AJ，Leung SY，Sohn JJ，et al.MicroRNA expression profiles associated with prognosis and therapeutic outcome in colon adenocarcinoma[J].JAMA，2008，299（4）：425-436.

[9]Chang KH，Miller N，Kheirelseid EA，et al.MicroRNA-21 and PDCD4 expression in colorectal cancer[J].Eur J Surg Oncol，2011，37（7）：597-603.

[10]Ma Y，Zhang P，Yang J，et al.Candidate microRNA biomarkers in human colorectal cancer:systematic review profiling studies and experimental validation[J].Int J Cancer，2012，130（9）：2077-2087.

[11]Matsushima L，Isomoto H，Kohno S，et al.MicroRNAs and esophageal squamous cell carcinoma[J].Digestion，2010， 82（3）：138-144.

（收稿日期：2014-04-01本文編輯：許俊琴）