葉虹婷 榮勝忠 靳 革

三種大鼠脂肪肝模型的比較研究

葉虹婷 榮勝忠 靳 革

目的 采用大鼠進(jìn)行不同建模，并比較研究全面，尋找最佳的脂肪肝造模方法。方法 Wistar大鼠隨機(jī)分四組：陰性對照組飼以普通飼料；模型A、B、C組飼以高脂飼料，A、B組分別每日以50%、40%乙醇灌胃；C組后肢皮下注射四氯化碳。實(shí)驗(yàn)7周，以斷髓法處死大鼠，觀察三種脂肪肝模型的肝臟病理學(xué)改變并進(jìn)行比較分析。結(jié)果 A、B、C三組大鼠肝指數(shù)無明顯差異，A組大鼠肝臟出現(xiàn)彌漫性中度脂肪變性，匯管區(qū)可見炎性細(xì)胞浸潤；B組大鼠肝臟出現(xiàn)輕度脂肪變性，胞漿中可見大小不等的脂肪空泡； C組大鼠肝臟出現(xiàn)輕度脂肪變性，肝小葉可見點(diǎn)灶狀肝細(xì)胞壞死，淋巴細(xì)胞浸潤。結(jié)論 C組的造模方法簡便易行，模型復(fù)制率高，為制備動物脂肪肝模型的首選。

脂肪肝；動物模型；大鼠

深入研究脂肪性肝疾病的發(fā)生機(jī)制、篩選防治脂肪肝的有效藥物，首先必須選擇一種理想的動物模型，其應(yīng)與人類脂肪肝病特征相似，模型形成率高、病死率低、造模方法簡便易行。本實(shí)驗(yàn)使用三種不同方法建立脂肪肝動物模型，旨在尋找最佳的脂肪肝造模方法，為今后的研究提供適宜的動物模型。

1 材料與方法

1.1 動物 選取健康Wistar大鼠40只，雄性25只，雌性15只，體重188～370 g。由牡丹江醫(yī)學(xué)院動物室提供。

1.2 試劑 50%乙醇、40%的乙醇（沈陽新興試劑廠生產(chǎn)的分析純乙醇溶液，加蒸餾水稀釋而成）；40%的四氯化碳（CC14）溶液（天津化學(xué)試劑廠生產(chǎn)的四氯化碳溶液，加菜籽油稀釋而成CC14）。

1.3 飼料 90%基礎(chǔ)飼料（牡丹江醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心提供）加10%豬油（自制）。

1.4 方法 將40只Wistar大鼠隨機(jī)分成四組，其中模型A、B、C組分別為11只，陰性對照組為7只，按體重相近原則每2只一籠飼養(yǎng)。模型A、B、C組飼以高脂飼料，其中A、B組分別每日以50%、40%乙醇灌胃，C組后肢皮下注射CCl4。對照組使用基礎(chǔ)飼料，每日按1 ml/100g體重以0.9%氯化鈉注射液灌胃；動物建模7周，若在此期間死亡計(jì)入死亡率，實(shí)驗(yàn)結(jié)束前1 d晚上禁食，稱重，斷髓法處死，取肝臟稱重。于肝中葉剪下8 mm×8 mm×4 mm大小的組織塊，用80%乙醇固定，送病理室制成病理切片。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，病死率比較采用χ2檢驗(yàn)，肝指數(shù)比較采用F分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 成模率比較 模型A、B、C組大鼠病死率分別為27.3%、27.3%、18.2%，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時總病死率為20.0%。死亡原因主要有初期注酒速度太快、超量，致吸入性肺炎和急性酒精中毒死亡。A、B、C三組模型組大鼠病死率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.04，P＞0.05），見表1。

表1 四組大鼠的死亡率(n,%)

2.2 肝重與體重比例 肝指數(shù)以肝組織濕重/體重×100%計(jì)算，見表2。陰性對照組及模型A、B、C組大鼠肝指數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=0.71，P＞0.05）。

表2 四組大鼠的肝指數(shù)(±s)

表2 四組大鼠的肝指數(shù)(±s)

組別 動物只數(shù) 肝指數(shù)(%) F值 P值模型A組模型B組模型C組陰性對照組7687 3.7±0.7 3.4±0.4 3.7±0.4 3.7±0.40.71＞0.06

2.3 手術(shù)所見 模型組肝臟表面包膜緊繃，陰性對照組光滑質(zhì)地柔軟。模型組有可觸及小顆粒，壓迫時可出現(xiàn)凹陷，表面色澤較蒼白或帶灰黃色，有油膩感。對照組切面未見黃色脂滴，組織結(jié)構(gòu)較緊密，刀切時，硬度正常，刀面無沾染。

2.4 病理學(xué)顯示 陰性對照組：肝細(xì)胞為多角形，胞漿嗜酸性著色，細(xì)胞核呈圓形，位于細(xì)胞的中央。肝細(xì)胞以中央靜脈為中心呈放射狀整齊排列。模型A組：肝臟彌漫性中度脂肪變性，在肝細(xì)胞胞漿中可見大小不等的脂肪空泡，細(xì)小空泡位于細(xì)胞核周圍，較大空泡位于胞漿一側(cè)，肝小葉結(jié)構(gòu)未見明顯異常。在匯管區(qū)可見炎性細(xì)胞浸潤，見圖1。模型B組：肝臟部分肝小葉輕度脂肪變性，在肝細(xì)胞胞漿中可見大小不等的脂肪空泡,細(xì)小空泡位于細(xì)胞核周圍，較大空泡位于胞漿一側(cè)。模型C組：肝臟彌漫性輕度脂肪變性，在肝細(xì)胞胞漿中可見大小不等的脂肪空泡，肝小葉結(jié)構(gòu)未見明顯異常。此外在肝小葉可見點(diǎn)灶狀肝細(xì)胞壞死，淋巴細(xì)胞浸潤，匯管區(qū)也可見淋巴細(xì)胞浸潤，見圖2。

圖1 模型A組大鼠的肝臟組織學(xué)結(jié)構(gòu)（HE染色×40）

圖2 模型C組大鼠的肝臟組織學(xué)結(jié)構(gòu)（HE染色×40）

3 討論

脂肪肝從病因?qū)W上大體可分為酒精性和非酒精性脂肪肝[1]。要更好的對脂肪肝進(jìn)行研究，就必須有較理想的動物模型。在脂肪肝的實(shí)驗(yàn)研究中，常利用乙醇灌胃、高脂飲食、注射藥物或毒物等復(fù)制脂肪肝的動物模型。國內(nèi)多采用趙靜波等[2]的方法，給健康成熟雄性Wistar大鼠，用白酒灌胃，每次7 ml/kg體重，每日2次。1～2周后大鼠出現(xiàn)急性酒精性肝損傷表現(xiàn)。造模時間一般不超過10 d。但病死亡率較高。后肢皮下注射CCl4加喂食高脂飲食建立脂肪肝模型原理為CCl4進(jìn)入體內(nèi)后，影響代謝及能量的生成，使肝細(xì)胞發(fā)生變性、壞死，以及迅速出現(xiàn)脂肪變性、肝壞死等形態(tài)學(xué)改變[3]。三種造模方法都能成功建立脂肪肝模型，但是模型A、B組應(yīng)用乙醇灌胃，實(shí)驗(yàn)動物易死亡；后肢皮下注射CCl4加高脂膳食建立大鼠脂肪肝模型的方法[4]，與人體慢性肝損傷過程在某些方面相似，且造模方法簡便易行，模型復(fù)制率高，為急性中毒性脂肪肝模型的首選，是一種較好的造模方法。

[1] 孫璇.脂肪肝動物模型述評[J].中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志,1998(1): 251-253.

[2] 李東良,王玉枚.大鼠酒精性肝損傷模型的建立及病理學(xué)觀察[J].實(shí)用肝臟病雜志,1998,3(4):207-208.

[3] 周玉娟,劉福林,張永健.脂肪肝的發(fā)病機(jī)制和治療研究進(jìn)展[J].臨床薈萃,2005,20(6):350-352.

[4] 鐘嵐,范建高.非酒精性脂肪肝動物模型[J].國外醫(yī)學(xué)消化分冊,1996,31(1):27-27.

R-332

A

1673-5846(2014)07-0266-02

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