蔡智慧 王興紅

氟伐他汀與促紅細(xì)胞生成素聯(lián)合預(yù)處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用

蔡智慧 王興紅

目的 觀察氟伐他汀與促紅細(xì)胞生成素（EPO）聯(lián)合預(yù)處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷（I/R）的保護(hù)作用。方法 建立大鼠心肌I/R模型。將50只SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組（SHAM）、缺血再灌注組（I/R）、EPO預(yù)處理組（I/R+E）、氟伐他汀預(yù)處理組（I/R+F）和氟伐他汀聯(lián)合EPO預(yù)處理組（I/R+E+F），每組10只。實(shí)驗結(jié)束后，測定各組血清中心肌酸激酶同工酶（CK-MB）、心肌肌鈣蛋白（cTnI）、腫瘤壞死因子（TNF-α）水平以及血清中一氧化氮（NO）含量和內(nèi)皮型NO合酶（eNOS）活性。結(jié)果 氟伐他汀和EPO聯(lián)合預(yù)處理可進(jìn)一步明顯降低血清中CK-MB、cTnI和TNF-α的含量，提高NO和eNOS的水平。結(jié)論 氟伐他汀和EPO聯(lián)合預(yù)處理對大鼠心肌I/R有協(xié)同保護(hù)作用。

氟伐他汀；促紅細(xì)胞生成素；心肌缺血再灌注損傷；預(yù)處理

單一藥物預(yù)處理對心肌I/R保護(hù)作用的報道較多，但促紅細(xì)胞生成素（EPO）與他汀類藥物聯(lián)合治療，對心肌是否能起到協(xié)同保護(hù)作用，關(guān)于此方面的研究比較少見。本實(shí)驗通過建立大鼠心肌I/R模型，旨在觀察氟伐他汀與EPO聯(lián)合預(yù)處理對I/R心肌是否具有協(xié)同保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗動物分組 將50只SD大鼠（河南省實(shí)驗動物中心提供）隨機(jī)分為5組：假手術(shù)組（SHAM）、缺血再灌注模型組（I/R）、EPO預(yù)處理組（I/R+E）、氟伐他汀預(yù)處理組（I/R+F）、氟伐他汀聯(lián)合EPO預(yù)處理組（I/R+E+F），每組10只。氟伐他汀預(yù)處理組與氟伐他汀聯(lián)合EPO預(yù)處理組均以氟伐他汀粉劑溶于0.9%氯化鈉注射液連續(xù)灌胃10 mg/（kg·d）2周，EPO預(yù)處理組與氟伐他汀聯(lián)合EPO預(yù)處理組均在術(shù)前24 h腹腔注射EPO 1 500 U/kg。假手術(shù)組和I/R模型組予以注射0.9%氯化鈉注射液對照。

1.2 動物模型制備 采用SD大鼠穿線結(jié)扎左冠狀動脈前降支30 min，再灌注2 h的方法制備心肌I/R模型。假手術(shù)組僅穿線不結(jié)扎，以心電圖和心肌顏色改變作為I/R造模成功的標(biāo)志。

1.3 血清中CK-MB、cTnI、TNF-α和NO、eNOS的測定 各組大鼠再灌注2 h后從頸總動脈取血2～3 ml，以3 000 r/min離心10 min（離心半徑r＝2 000 mm），分離出血清-20℃保存?zhèn)溆?。采用ELASA法測定血清CK-MB、cTnI、TNF-α和NO、eNOS的含量，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行分析，計量資料用±s表示，組間比較用方差分析， P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清中CK-MB、cTnI和TNF-α含量 I/R組血清CK-MB、cTnI和TNF-α水平明顯高于SHAM組（P＜0.01）；與I/R組比較，I/R+E組、I/R+F組或I/R+E+F組血清CK-MB、cTnI和TNF-α水平較I/R組降低（P＜0.05），與I/R+E或I/R+F組比較，I/R+E +F組血清CK-MB、cTnI和TNF-α水平進(jìn)一步降低（P＜0.05），見表1。

表1 各組血清CK-MB、cTnI、和TNF-α比較(±s)

表1 各組血清CK-MB、cTnI、和TNF-α比較(±s)

注：與SHAM組比較＃P＜0.01；與I/R組比較▲P＜0.05；與I/R+E或I/R+F組比較☆P＜0.05

組別 n CK-MB(IU/L) cTnI(μg/L) TNF-α(μg/L) SHAM 10 501±31 0.35±0.04 34±3 I/R 10 2 010±76＃2.3±0.8＃114.±22＃I/R+E 10 1 511±53＃▲1.5±0.4?！?3±11?！鳬/R+F 10 1 350±43?！?.7±0.3?！?4±12＃▲I/R+F+E 10 1 159±30?！?.09±0.11＃▲☆65±9?！?/p>

2.2 血清中NO含量和eNOS活性 I/R組的血清NO和eNOS含量明顯低于SHAM組（P＜0.01）；與I/R組比較，I/R+E組或I/R+F組的NO和eNOS含量增加（P＜0.05）；與I/R+E或I/R+F組比較，I/R+E+F組的NO和eNOS含量進(jìn)一步增加（P＜0.05），見表2。

表2 各組血清NO含量和eNOS活性比較(±s)

表2 各組血清NO含量和eNOS活性比較(±s)

注：與SHAM組比較＃P＜0.01；與I/R組比較▲P＜0.05，※P＜0.01；與I/R+E或I/R+F組比較☆P＜0.05

組別 n NO含量(μmol/L) eNOS活性(ng/L) SHAM 10 29±4 23±4 I/R 10 14±4＃ 8±1＃ I/R+E 10 17±3?！?14±2＃▲ I/R+F 10 20±4?！?15±3?！?I/R+F+E 10 23±4*▲☆ 20±2*※☆

3 討論

心臟缺血再灌注損傷在臨床上較為常見，心臟發(fā)生I/R的過程中，細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生大量的自由基從而導(dǎo)致細(xì)胞損傷，細(xì)胞膜的完整性被破壞[1]，細(xì)胞內(nèi)的CK-MB、cTnI從細(xì)胞內(nèi)釋放出來，尤其是cTnI在心肌損傷后出現(xiàn)早、持續(xù)時間長、特異性強(qiáng)、靈敏度高，可作為目前診斷心肌損傷較好的標(biāo)志物。有研究證明，EPO可抑制氧自由基生成從而減輕細(xì)胞膜的氧化損傷，維持細(xì)胞膜穩(wěn)定[2]。另外，他汀類藥物是三羥基三甲基戊二酰輔酶A（HMG-CoA）還原酶抑制劑，是臨床上經(jīng)常使用的有效調(diào)脂藥物[3]。近年來，他汀類藥物的非降脂作用日益受到人們關(guān)注，臨床研究也發(fā)現(xiàn)早期應(yīng)用他汀類藥物可以改善心肌I/R損傷，但其作用機(jī)制尚未完全闡明。本實(shí)驗結(jié)果顯示，EPO和氟伐他汀都能減少損傷標(biāo)志物的漏出，聯(lián)合使用使漏出物進(jìn)一步減少。此外，心臟發(fā)生I/R時還會引起強(qiáng)烈的炎性反應(yīng)，其中TNF-α是一種重要的炎性介質(zhì)。在缺血和再灌注期間，心肌細(xì)胞內(nèi)的TNF-α表達(dá)明顯上調(diào)，本研究表明，氟伐他汀和EPO聯(lián)合預(yù)處理組比單一藥物組更能減少I/R后TNF-α的生成，從而減輕心肌損傷，保護(hù)心臟功能。

近年來，很多研究證實(shí)NO在心肌I/R時發(fā)揮了關(guān)鍵的作用。NO不僅可以使冠脈舒張、提高缺血心肌的收縮能力，而且還具有消除自由基、保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞等功能[4]。血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的NO需要內(nèi)皮型NO合酶（eNOS）的參與，實(shí)驗結(jié)果顯示，EPO和氟伐他汀預(yù)處理均能上調(diào)eNOS的活性，使內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生NO增多從而改善內(nèi)皮功能，聯(lián)合使用效果更為明顯，但其聯(lián)合作用的靶點(diǎn)還有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，氟伐他汀與EPO聯(lián)合預(yù)處理對大鼠心肌I/R有協(xié)同保護(hù)作用，其機(jī)制可能與穩(wěn)定細(xì)胞膜、抑制炎性反應(yīng)及增加內(nèi)源性NO等有關(guān)，有待于進(jìn)一步的實(shí)驗研究。

[1] 蔡智慧,鄭亞萍.冠心蘇合丸對乳鼠心肌細(xì)胞缺血再灌注損傷的作用[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2013,30(5):722-724.

[2] Bullard AJ,Govewalla P,Yellon DM.Erythropoietin protects the myocardium against reperfusion injury in vitro and in vivo[J].Basic Res Cardiol,2005,100(5):397-403.

[3] 王興紅,蔡智慧,李海霞.氟伐他汀對大鼠缺血再灌注損傷心肌eNOS和SERCA活性的影響[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué),2012,18(19):6-8.

[4] 沈繼龍,朱克軍,周情太,等.不同劑量磷酸肌酸鈉預(yù)處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2013, 23(15):23-27.

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A

1673-5846(2014)07-0037-02

漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南漯河 462002