鄭琰+劉淑華

[摘要] 目的 建立高效液相色譜法測定清熱化毒丸中連翹苷含量的方法。 方法 采用Hypersil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱；以乙腈-水（26∶74）為流動相，檢測波長為277 nm，流速為1.0 ml/min。 結(jié)果 連翹苷進(jìn)樣量在0.2124～5.3100 μg （r=0.9994）線性范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，平均回收率為98.46%，RSD=0.86%（n=6）。 結(jié)論 該方法準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于清熱化毒丸的質(zhì)量控制。

[關(guān)鍵詞] 清熱化毒丸；連翹苷；高效液相色譜法

[中圖分類號] R286.0[文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A[文章編號] 1674-4721（2014）04（c）-0061-02

The content of phillyrin of Qingre huadu wan determined by high performance liquid chromatography

ZHENG Yan LIU Shu-hua

Institute for Food and Drug Control of Chaoyang City in Liaoning Province,Chaoyang 122000,China

[Abstract] Objective To establish the method of high performance liquid chromatography (HPLC) determining the content of phillyrin of Qingre huadu wan. Methods Hypersil C18（4.6 mm×250 mm,5 μm） chromatographic column was used.The mobile phase cinsisted of acetonitrile-water (26∶74),the detection wavelength was 277 nm and the flow rate of 1.0 ml/min. Results Phillyrin sample volume showed good linear relationship in the range of 0.2124-5.3100 μg (r=0.9994);the average recovery rate was 98.46%,RSD=0.86% (n=6). Conclusion The method is accurate with a good reproducibility,and suitable for quality control of Qingre huadu wan.

[Key words] Qingre huadu wan;Phillyrin;High performance liquid chromatography

清熱化毒丸是由連翹、青黛、黃芩、黃連、菊花、犀角粉等16味藥煉制而成，收載于原衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑第二冊，具有清火化毒，消腫止痛的作用，主要用于小兒身熱煩躁，咽喉腫痛，口舌生瘡，皮膚瘡癤，口臭，便秘等。原標(biāo)準(zhǔn)中只有薄層色譜法進(jìn)行定性分析，而文獻(xiàn)資料只有對黃連、黃芩之類的質(zhì)量分析，沒有針對連翹苷的定量分析，藥理實(shí)驗(yàn)表明，連翹苷具有較強(qiáng)的抗病毒、強(qiáng)心、抗肝損傷性等活性，為了有效地控制藥品的內(nèi)在質(zhì)量，筆者故建立對連翹苷的高效液相色譜測定法（HPLC）[1-4]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters e2695型高效液相色譜儀；Waters2489紫外檢測器；Waters Empower色譜工作站。BP 211D電子分析天平（德國賽多利斯公司），9860 A型超聲儀（費(fèi)納米科技發(fā)展有限公司）。

1.2 試藥

連翹苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110821-201112）；清熱化毒丸（遼寧仙草堂藥業(yè)股份有限公司，批號：130901，130301，130501）；乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱 Hypersil C18（4.6 mm×250 mm；5μm）；流動相：乙腈-水（26∶74）；流速：1.0 ml/min；柱溫：28℃；波長：277 nm；理論板數(shù)：按連翹苷計(jì)算≥3000[5-9]。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備精密稱取連翹苷對照品適量，加甲醇制成每1 ml含0.2 mg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備取清熱化毒丸，剪碎，精稱15.0 g，置錐形瓶中，精密加入甲醇50 ml，稱定重量，密塞，冷浸過夜，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量 搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備取除連翹外的其他藥材，按所確定的工藝生產(chǎn)陰性樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備陰性對照溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性實(shí)驗(yàn)取陰性供試品溶液、對照品溶液、供試品溶液各10 μl，依法分別注入液相色譜儀，在連翹苷對照品色譜相應(yīng)的位置上，供試品溶液具有相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性對照品溶液在此處無干擾，表明其他組分對測定無干擾（圖1）。

a.對照品溶液；b.供試品溶液；c.陰性對照溶液；1.連翹苷

圖1 HPLC色譜圖

2.3.2 線性關(guān)系考察分別精密吸取對照品溶液1、5、 10、15、20、25 μl注入液相色譜儀，依法測定連翹苷的峰面積。以對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=39029X+14747，r=0.9994，結(jié)果表明，連翹苷對照品進(jìn)樣量在0.2124～5.3100 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.3 精密度試驗(yàn)取供試品（批號130901），精密稱取15.0 g，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液。精密吸取10 μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定色譜峰面積的RSD為0.38%，結(jié)果表明，儀器的精密度良好。

2.5.4 重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號（130901）樣品6份，分別精密稱取15.0 g，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，精密吸取10 μl，分別進(jìn)樣分析，測定連翹苷的含量，結(jié)果平均含量為0.1024 mg/g，RSD為1.3%，結(jié)果表明，該方法重復(fù)性良好。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，分別于0、2、4、 8、12 h時(shí)分別進(jìn)樣10 μl，分別進(jìn)樣分析，結(jié)果連翹苷峰面積的RSD為0.28%，結(jié)果表明，供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.6 加樣回收率試驗(yàn)取已知含量的同批樣品（批號130901，連翹苷含量為0.1024 mg/g）6份，每份7.5 g，精密稱定，分別精密加入連翹苷對照品溶液（0.2124 mg/ml）3.5 ml，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，精密吸取10 μl，注入液相色譜儀，測定色譜峰面積，計(jì)算平均回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)測定結(jié)果

2.3.7 樣品測定取3批樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，進(jìn)樣10 μl，采用外標(biāo)法計(jì)算樣品中連翹苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品中連翹苷的測定結(jié)果（n=2）

3 討論

3.1 流動相選擇

流動相選擇時(shí)曾采用乙腈-0.1%磷酸溶液（25∶75）與乙腈-水（26∶74）進(jìn)行比較實(shí)驗(yàn)，結(jié)果還是采用乙腈-水（26∶74）作為流動相，連翹苷能與其他雜質(zhì)有較好的分離。

3.2 提取方法的考察

《中國藥典》2010年版中采用的提到方法為上柱法，這種方法操作復(fù)雜，耗時(shí)長，而筆者采用的超聲法操作比較簡單，消耗的時(shí)間相對比較少，而這種方法重現(xiàn)好，樣品與雜質(zhì)也能夠得到好的分離。

3.2 超聲時(shí)間的選擇

在20、30、40 min進(jìn)行測定，結(jié)果提示，30 min時(shí)連翹苷已基本提取完全，故確定時(shí)間為30 min。

綜上所述，本文建立了一種專屬性強(qiáng)、簡單快捷的定量方法，對連翹苷的質(zhì)量控制有一定的參考作用。

[參考文獻(xiàn)]

[1]國家藥典委員會.中國藥典[M]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：284.

[2]衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑（第二冊）[Z].274.

[3]南京中醫(yī)藥大學(xué).中藥大辭典[M].上海：上?？萍汲霭嫔?，2006：1552-1555.

[4]肖培根.新編中藥志（第五卷）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2007：797-802.

[5]史大軍，邱海蘊(yùn)，康紅英.HPLC法測定清喉咽顆粒中連翹苷的含量[J].中國藥事，2012，26（1）：57-58.

[6]孟和，朱艷紅，吳學(xué)軍.HPLC法測定保和丸中連翹苷的含量[J].中國藥事，2013，27（3）：312-314.

[7]黃螺嘉，楊文紅，鄭劍紅.HPLC法測定小兒感冒退熱糖漿中連翹苷的含量[J].中草藥，2004，35（7）：768.

[8]陸紅柳，譚喜瑩，趙陸華，等.連翹中連翹苷HPLC測定方法的改進(jìn)[J].中草藥，2007，38（6）：936-937.

[9]韓桂茹，龐國勛.連翹苷檢測波長的研究[J].中國藥品，2005，6（3）：71-73.

（收稿日期：2014-03-19本文編輯：許俊琴）

[摘要] 目的 建立高效液相色譜法測定清熱化毒丸中連翹苷含量的方法。 方法 采用Hypersil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱；以乙腈-水（26∶74）為流動相，檢測波長為277 nm，流速為1.0 ml/min。 結(jié)果 連翹苷進(jìn)樣量在0.2124～5.3100 μg （r=0.9994）線性范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，平均回收率為98.46%，RSD=0.86%（n=6）。 結(jié)論 該方法準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于清熱化毒丸的質(zhì)量控制。

[關(guān)鍵詞] 清熱化毒丸；連翹苷；高效液相色譜法

[中圖分類號] R286.0[文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A[文章編號] 1674-4721（2014）04（c）-0061-02

The content of phillyrin of Qingre huadu wan determined by high performance liquid chromatography

ZHENG Yan LIU Shu-hua

Institute for Food and Drug Control of Chaoyang City in Liaoning Province,Chaoyang 122000,China

[Abstract] Objective To establish the method of high performance liquid chromatography (HPLC) determining the content of phillyrin of Qingre huadu wan. Methods Hypersil C18（4.6 mm×250 mm,5 μm） chromatographic column was used.The mobile phase cinsisted of acetonitrile-water (26∶74),the detection wavelength was 277 nm and the flow rate of 1.0 ml/min. Results Phillyrin sample volume showed good linear relationship in the range of 0.2124-5.3100 μg (r=0.9994);the average recovery rate was 98.46%,RSD=0.86% (n=6). Conclusion The method is accurate with a good reproducibility,and suitable for quality control of Qingre huadu wan.

[Key words] Qingre huadu wan;Phillyrin;High performance liquid chromatography

清熱化毒丸是由連翹、青黛、黃芩、黃連、菊花、犀角粉等16味藥煉制而成，收載于原衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑第二冊，具有清火化毒，消腫止痛的作用，主要用于小兒身熱煩躁，咽喉腫痛，口舌生瘡，皮膚瘡癤，口臭，便秘等。原標(biāo)準(zhǔn)中只有薄層色譜法進(jìn)行定性分析，而文獻(xiàn)資料只有對黃連、黃芩之類的質(zhì)量分析，沒有針對連翹苷的定量分析，藥理實(shí)驗(yàn)表明，連翹苷具有較強(qiáng)的抗病毒、強(qiáng)心、抗肝損傷性等活性，為了有效地控制藥品的內(nèi)在質(zhì)量，筆者故建立對連翹苷的高效液相色譜測定法（HPLC）[1-4]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters e2695型高效液相色譜儀；Waters2489紫外檢測器；Waters Empower色譜工作站。BP 211D電子分析天平（德國賽多利斯公司），9860 A型超聲儀（費(fèi)納米科技發(fā)展有限公司）。

1.2 試藥

連翹苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110821-201112）；清熱化毒丸（遼寧仙草堂藥業(yè)股份有限公司，批號：130901，130301，130501）；乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱 Hypersil C18（4.6 mm×250 mm；5μm）；流動相：乙腈-水（26∶74）；流速：1.0 ml/min；柱溫：28℃；波長：277 nm；理論板數(shù)：按連翹苷計(jì)算≥3000[5-9]。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備精密稱取連翹苷對照品適量，加甲醇制成每1 ml含0.2 mg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備取清熱化毒丸，剪碎，精稱15.0 g，置錐形瓶中，精密加入甲醇50 ml，稱定重量，密塞，冷浸過夜，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量 搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備取除連翹外的其他藥材，按所確定的工藝生產(chǎn)陰性樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備陰性對照溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性實(shí)驗(yàn)取陰性供試品溶液、對照品溶液、供試品溶液各10 μl，依法分別注入液相色譜儀，在連翹苷對照品色譜相應(yīng)的位置上，供試品溶液具有相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性對照品溶液在此處無干擾，表明其他組分對測定無干擾（圖1）。

a.對照品溶液；b.供試品溶液；c.陰性對照溶液；1.連翹苷

圖1 HPLC色譜圖

2.3.2 線性關(guān)系考察分別精密吸取對照品溶液1、5、 10、15、20、25 μl注入液相色譜儀，依法測定連翹苷的峰面積。以對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=39029X+14747，r=0.9994，結(jié)果表明，連翹苷對照品進(jìn)樣量在0.2124～5.3100 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.3 精密度試驗(yàn)取供試品（批號130901），精密稱取15.0 g，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液。精密吸取10 μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定色譜峰面積的RSD為0.38%，結(jié)果表明，儀器的精密度良好。

2.5.4 重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號（130901）樣品6份，分別精密稱取15.0 g，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，精密吸取10 μl，分別進(jìn)樣分析，測定連翹苷的含量，結(jié)果平均含量為0.1024 mg/g，RSD為1.3%，結(jié)果表明，該方法重復(fù)性良好。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，分別于0、2、4、 8、12 h時(shí)分別進(jìn)樣10 μl，分別進(jìn)樣分析，結(jié)果連翹苷峰面積的RSD為0.28%，結(jié)果表明，供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.6 加樣回收率試驗(yàn)取已知含量的同批樣品（批號130901，連翹苷含量為0.1024 mg/g）6份，每份7.5 g，精密稱定，分別精密加入連翹苷對照品溶液（0.2124 mg/ml）3.5 ml，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，精密吸取10 μl，注入液相色譜儀，測定色譜峰面積，計(jì)算平均回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)測定結(jié)果

2.3.7 樣品測定取3批樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，進(jìn)樣10 μl，采用外標(biāo)法計(jì)算樣品中連翹苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品中連翹苷的測定結(jié)果（n=2）

3 討論

3.1 流動相選擇

流動相選擇時(shí)曾采用乙腈-0.1%磷酸溶液（25∶75）與乙腈-水（26∶74）進(jìn)行比較實(shí)驗(yàn)，結(jié)果還是采用乙腈-水（26∶74）作為流動相，連翹苷能與其他雜質(zhì)有較好的分離。

3.2 提取方法的考察

《中國藥典》2010年版中采用的提到方法為上柱法，這種方法操作復(fù)雜，耗時(shí)長，而筆者采用的超聲法操作比較簡單，消耗的時(shí)間相對比較少，而這種方法重現(xiàn)好，樣品與雜質(zhì)也能夠得到好的分離。

3.2 超聲時(shí)間的選擇

在20、30、40 min進(jìn)行測定，結(jié)果提示，30 min時(shí)連翹苷已基本提取完全，故確定時(shí)間為30 min。

綜上所述，本文建立了一種專屬性強(qiáng)、簡單快捷的定量方法，對連翹苷的質(zhì)量控制有一定的參考作用。

[參考文獻(xiàn)]

[1]國家藥典委員會.中國藥典[M]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：284.

[2]衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑（第二冊）[Z].274.

[3]南京中醫(yī)藥大學(xué).中藥大辭典[M].上海：上?？萍汲霭嫔?，2006：1552-1555.

[4]肖培根.新編中藥志（第五卷）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2007：797-802.

[5]史大軍，邱海蘊(yùn)，康紅英.HPLC法測定清喉咽顆粒中連翹苷的含量[J].中國藥事，2012，26（1）：57-58.

[6]孟和，朱艷紅，吳學(xué)軍.HPLC法測定保和丸中連翹苷的含量[J].中國藥事，2013，27（3）：312-314.

[7]黃螺嘉，楊文紅，鄭劍紅.HPLC法測定小兒感冒退熱糖漿中連翹苷的含量[J].中草藥，2004，35（7）：768.

[8]陸紅柳，譚喜瑩，趙陸華，等.連翹中連翹苷HPLC測定方法的改進(jìn)[J].中草藥，2007，38（6）：936-937.

[9]韓桂茹，龐國勛.連翹苷檢測波長的研究[J].中國藥品，2005，6（3）：71-73.

（收稿日期：2014-03-19本文編輯：許俊琴）

[摘要] 目的 建立高效液相色譜法測定清熱化毒丸中連翹苷含量的方法。 方法 采用Hypersil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱；以乙腈-水（26∶74）為流動相，檢測波長為277 nm，流速為1.0 ml/min。 結(jié)果 連翹苷進(jìn)樣量在0.2124～5.3100 μg （r=0.9994）線性范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，平均回收率為98.46%，RSD=0.86%（n=6）。 結(jié)論 該方法準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于清熱化毒丸的質(zhì)量控制。

[關(guān)鍵詞] 清熱化毒丸；連翹苷；高效液相色譜法

[中圖分類號] R286.0[文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A[文章編號] 1674-4721（2014）04（c）-0061-02

The content of phillyrin of Qingre huadu wan determined by high performance liquid chromatography

ZHENG Yan LIU Shu-hua

Institute for Food and Drug Control of Chaoyang City in Liaoning Province,Chaoyang 122000,China

[Abstract] Objective To establish the method of high performance liquid chromatography (HPLC) determining the content of phillyrin of Qingre huadu wan. Methods Hypersil C18（4.6 mm×250 mm,5 μm） chromatographic column was used.The mobile phase cinsisted of acetonitrile-water (26∶74),the detection wavelength was 277 nm and the flow rate of 1.0 ml/min. Results Phillyrin sample volume showed good linear relationship in the range of 0.2124-5.3100 μg (r=0.9994);the average recovery rate was 98.46%,RSD=0.86% (n=6). Conclusion The method is accurate with a good reproducibility,and suitable for quality control of Qingre huadu wan.

[Key words] Qingre huadu wan;Phillyrin;High performance liquid chromatography

清熱化毒丸是由連翹、青黛、黃芩、黃連、菊花、犀角粉等16味藥煉制而成，收載于原衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑第二冊，具有清火化毒，消腫止痛的作用，主要用于小兒身熱煩躁，咽喉腫痛，口舌生瘡，皮膚瘡癤，口臭，便秘等。原標(biāo)準(zhǔn)中只有薄層色譜法進(jìn)行定性分析，而文獻(xiàn)資料只有對黃連、黃芩之類的質(zhì)量分析，沒有針對連翹苷的定量分析，藥理實(shí)驗(yàn)表明，連翹苷具有較強(qiáng)的抗病毒、強(qiáng)心、抗肝損傷性等活性，為了有效地控制藥品的內(nèi)在質(zhì)量，筆者故建立對連翹苷的高效液相色譜測定法（HPLC）[1-4]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters e2695型高效液相色譜儀；Waters2489紫外檢測器；Waters Empower色譜工作站。BP 211D電子分析天平（德國賽多利斯公司），9860 A型超聲儀（費(fèi)納米科技發(fā)展有限公司）。

1.2 試藥

連翹苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110821-201112）；清熱化毒丸（遼寧仙草堂藥業(yè)股份有限公司，批號：130901，130301，130501）；乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱 Hypersil C18（4.6 mm×250 mm；5μm）；流動相：乙腈-水（26∶74）；流速：1.0 ml/min；柱溫：28℃；波長：277 nm；理論板數(shù)：按連翹苷計(jì)算≥3000[5-9]。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備精密稱取連翹苷對照品適量，加甲醇制成每1 ml含0.2 mg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備取清熱化毒丸，剪碎，精稱15.0 g，置錐形瓶中，精密加入甲醇50 ml，稱定重量，密塞，冷浸過夜，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量 搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備取除連翹外的其他藥材，按所確定的工藝生產(chǎn)陰性樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備陰性對照溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性實(shí)驗(yàn)取陰性供試品溶液、對照品溶液、供試品溶液各10 μl，依法分別注入液相色譜儀，在連翹苷對照品色譜相應(yīng)的位置上，供試品溶液具有相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性對照品溶液在此處無干擾，表明其他組分對測定無干擾（圖1）。

a.對照品溶液；b.供試品溶液；c.陰性對照溶液；1.連翹苷

圖1 HPLC色譜圖

2.3.2 線性關(guān)系考察分別精密吸取對照品溶液1、5、 10、15、20、25 μl注入液相色譜儀，依法測定連翹苷的峰面積。以對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=39029X+14747，r=0.9994，結(jié)果表明，連翹苷對照品進(jìn)樣量在0.2124～5.3100 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.3 精密度試驗(yàn)取供試品（批號130901），精密稱取15.0 g，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液。精密吸取10 μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定色譜峰面積的RSD為0.38%，結(jié)果表明，儀器的精密度良好。

2.5.4 重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號（130901）樣品6份，分別精密稱取15.0 g，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，精密吸取10 μl，分別進(jìn)樣分析，測定連翹苷的含量，結(jié)果平均含量為0.1024 mg/g，RSD為1.3%，結(jié)果表明，該方法重復(fù)性良好。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，分別于0、2、4、 8、12 h時(shí)分別進(jìn)樣10 μl，分別進(jìn)樣分析，結(jié)果連翹苷峰面積的RSD為0.28%，結(jié)果表明，供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.6 加樣回收率試驗(yàn)取已知含量的同批樣品（批號130901，連翹苷含量為0.1024 mg/g）6份，每份7.5 g，精密稱定，分別精密加入連翹苷對照品溶液（0.2124 mg/ml）3.5 ml，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，精密吸取10 μl，注入液相色譜儀，測定色譜峰面積，計(jì)算平均回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)測定結(jié)果

2.3.7 樣品測定取3批樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，進(jìn)樣10 μl，采用外標(biāo)法計(jì)算樣品中連翹苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品中連翹苷的測定結(jié)果（n=2）

3 討論

3.1 流動相選擇

流動相選擇時(shí)曾采用乙腈-0.1%磷酸溶液（25∶75）與乙腈-水（26∶74）進(jìn)行比較實(shí)驗(yàn)，結(jié)果還是采用乙腈-水（26∶74）作為流動相，連翹苷能與其他雜質(zhì)有較好的分離。

3.2 提取方法的考察

《中國藥典》2010年版中采用的提到方法為上柱法，這種方法操作復(fù)雜，耗時(shí)長，而筆者采用的超聲法操作比較簡單，消耗的時(shí)間相對比較少，而這種方法重現(xiàn)好，樣品與雜質(zhì)也能夠得到好的分離。

3.2 超聲時(shí)間的選擇

在20、30、40 min進(jìn)行測定，結(jié)果提示，30 min時(shí)連翹苷已基本提取完全，故確定時(shí)間為30 min。

綜上所述，本文建立了一種專屬性強(qiáng)、簡單快捷的定量方法，對連翹苷的質(zhì)量控制有一定的參考作用。

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（收稿日期：2014-03-19本文編輯：許俊琴）