金偉華，于波濤，陳 華，張 明，蒲志強(qiáng)，廖文益

(1.成都軍區(qū)總醫(yī)院藥劑科，成都610083；2.成都醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，成都610083)

美他多辛(吡多醇L-2-吡咯烷酮-5-羧酸鹽)是一種保肝藥,可促進(jìn)乙醇代謝,對急、慢性酒精中毒有較好療效。美他多辛以維生素B6和焦谷氨酸為原料合成制得,為離子對化合物[1]。據(jù)文獻(xiàn)和相關(guān)資料報(bào)道，美他多辛的制劑有片劑、口服液、膠囊和注射劑，但是對美他多辛栓劑的研究還很少。本研究將美他多辛制成栓劑，并建立了HPLC法進(jìn)行含量測定，可同時(shí)檢測到美他多辛的兩個(gè)離子組分峰。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 1200型HPLC儀(美國安捷倫公司)；AL204型電子天平[梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司]；HH-S24S數(shù)顯恒溫水浴鍋(上海君竺儀器制造有限公司)。

1.2 試藥 美他多辛對照品(含量>99.5%，批號(hào)040527,浙江省食品藥品檢驗(yàn)所)；美他多辛原料藥(含量99.5%,批號(hào)YN20121121TQW，宜昌永諾藥業(yè)有限公司)；羥值分別為6.9(批號(hào)100701)和48.3(批號(hào)101102)的36型混合脂肪酸甘油酯(成都瀘天化科森責(zé)任有限公司)；甘油(含C3H8O3不少于95.0%，批號(hào)20811201，廈門星鯊制藥有限公司)；乙腈為色譜純，水為三重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 置換價(jià)的測定

2.1.1 純基質(zhì)栓的制備 處方：羥值為6.8和48.3的36型混合脂肪酸甘油酯分別為933.33和466.67 g，共制成純基質(zhì)栓1000粒。按照處方量稱取兩種不同羥值的混合脂肪酸甘油酯，加入蒸發(fā)皿中，混勻，70 ℃水浴加熱，待2/3基質(zhì)熔化時(shí)停止加熱，攪拌使全熔，待基質(zhì)呈黏稠狀態(tài)時(shí)，灌入涂好甘油的栓模內(nèi)，冷卻成形，脫模即得純基質(zhì)栓。

2.1.2 含藥栓的制備 處方：羥值為6.8和48.3的36型混合脂肪酸甘油酯分別為819.10和409.55 g；美他多辛原料藥271.35 g，共制成含藥栓1000粒。按處方稱取兩種混合脂肪酸甘油酯置蒸發(fā)皿中，混勻，70 ℃水浴加熱，待基質(zhì)開始熔化時(shí)，加入美他多辛原料藥，邊加邊攪拌，使藥物均勻分散在熔化的基質(zhì)中，趁熱灌入涂好甘油的栓模內(nèi)，冷卻成形，脫模即得。

2.1.3 置換價(jià)的計(jì)算 選取純基質(zhì)栓6粒，求出平均栓重為1.383 1 g，記為G；選取含藥栓6粒，求出平均栓重為1.461 8 g，記為M，含藥量W=M×18.09%(18.09%為每1 g含藥栓中的含藥量)，為0.264 4 g；將數(shù)據(jù)代入公式，置換價(jià)(f)=W/[G-(M-W)][2]，即可求出置換價(jià)為1.424。

2.2 美他多辛栓劑的制備

2.2.1 基質(zhì)用量的計(jì)算 根據(jù)美他多辛片劑及膠囊劑規(guī)格，將每粒栓劑中美他多辛劑量擬定為0.5 g，用測定的置換價(jià)可以計(jì)算出美他多辛栓劑所需基質(zhì)的重量(X)。X=(G-W/f)×n(W為栓劑中美他多辛的劑量，n為擬制備栓劑的枚數(shù))。

2.2.2 制備 按2.1.2項(xiàng)下方法制得6個(gè)批次的美他多辛栓劑(批號(hào)20130301、20130302、20130303、20130306、20130307、20130308)，為米黃色圓錐形固體。

2.3 含量測定

2.3.1 色譜條件 Gemini 5U-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱溫：35 ℃；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液(1∶99)；流速：1 ml/min；檢測波長：205 nm；進(jìn)樣量：20 μl。

2.3.2 溶液的制備 (1)美他多辛對照品儲(chǔ)備液 精密稱取美他多辛對照品0.010 1 g于100 ml容量瓶中，加0.1%磷酸溶液定容，得濃度為101 μg/ml的美他多辛對照品儲(chǔ)備液。(2)美他多辛對照品溶液 精密量取美他多辛對照品儲(chǔ)備液5、10、15、20 ml，分別置25 ml容量瓶中，用0.1%磷酸溶液定容至刻度，作為對照品溶液，其濃度分別為20.2、40.4、60.6、80.8 μg/ml。(3)供試品溶液 取同一批次栓劑3粒，稱重，計(jì)算出平均栓重；將栓劑剪碎，混勻，按照平均栓重精密稱取，放入燒杯中，在70 ℃水浴上加熱使之完全熔化，將融化液移入100 ml容量瓶中，用適量0.1%磷酸溶液反復(fù)蕩洗燒杯3次并定容至刻度，過濾，精密量取濾液1 ml于100 ml容量瓶中，再用0.1%磷酸溶液定容至刻度，作為供試品溶液。(4)空白溶液 按(3)項(xiàng)下方法稱取剪碎的空白栓劑，同法操作得空白溶液。

2.3.3 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 取上述對照品溶液、供試品溶液和空白溶液各20 μl，按2.3.1項(xiàng)下色譜條件注入HPLC儀，記錄色譜圖，見圖1。從圖1可見，基質(zhì)和溶劑對檢測無干擾，待測峰分離度良好，理論塔板數(shù)按美他多辛峰1計(jì)算均不<5000，分離度>1.5。

圖1 美他多辛的HPLC譜圖

2.3.4 線性關(guān)系考察 取2.3.2項(xiàng)下4個(gè)不同濃度(20.2、40.4、60.6、80.8 μg/ml)美他多辛對照品溶液和對照品儲(chǔ)備液(101 μg/ml)，按2.3.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，以對照品濃度(c)為橫坐標(biāo)，峰面積(A)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程按峰1計(jì)算為A=56.83c+47.88(r=0.999 9)。結(jié)果表明，美他多辛在20.2～101 μg/ml濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.3.5 精密度實(shí)驗(yàn) 取濃度為60.6 μg/ml的對照品溶液，按2.3.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，按峰1計(jì)算RSD為0.147%(n=6)。

2.3.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 分別稱取同一批號(hào)(批號(hào) 20130301)樣品6份，按2.3.2項(xiàng)(3)下方法制備成供試品溶液，按2.3.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，進(jìn)樣量20 μl。結(jié)果供試品含量按峰1計(jì)算RSD為0.362%(n=6)。

2.3.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取美他多辛栓劑(批號(hào) 20130301)1份，按2.3.2項(xiàng)下方法制備成供試品溶液，分別于0、1、2、4、6、24 h進(jìn)樣測定，進(jìn)樣量20 μl。結(jié)果供試品含量按峰1計(jì)算RSD為0.977%(n=6)。

2.3.8 回收率實(shí)驗(yàn) 取美他多辛栓劑(批號(hào) 20130301)3份,按2.3.2項(xiàng)下方法制成供試品溶液(已知含量按峰1計(jì)算為51.896 8 μg/ml),精密加入美他多辛對照品適量，制備成低、中、高3種濃度(40.4、60.6、80.8 μg/ml)的供試品溶液，按2.3.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，按峰1計(jì)算含量及回收率，結(jié)果3種濃度溶液中美他多辛的加樣回收率分別為(99.97±0.032)%、(99.91±0.076)%和(99.86±0.046)%(n=3)。

2.3.9 樣品測定 取3個(gè)批次(批號(hào)20130301、20130302、20130303)的美他多辛栓劑，按2.3.2項(xiàng)下方法制備成供試品溶液，進(jìn)樣分析，按美他多辛峰1計(jì)算含量。結(jié)果3個(gè)批次栓劑中美他多辛的標(biāo)示量分別為(99.98±0.015)%、(99.96±0.031)%和(99.58±0.60)%(n=3)。

3 討 論

3.1 基質(zhì)選擇 美他多辛作為一種保肝藥，制備成栓劑，可以減少肝臟的首關(guān)效應(yīng)。36型混合脂肪酸甘油酯分低羥值和高羥值兩種，低羥值混合脂肪酸甘油酯含游離羥基少，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，后硬化效應(yīng)較小，單獨(dú)使用比較適合含活性物較少的栓劑；而高羥值混合脂肪酸甘油酯單獨(dú)使用比較適合含活性物較多的栓劑，但后硬化效應(yīng)較大。因此，本研究采用1/3高羥值脂肪酸甘油酯與2/3低羥值脂肪酸甘油酯混合作為基質(zhì)制備栓劑。

3.2 栓劑制備 將高、低羥值的混合脂肪酸甘油酯于70 ℃水浴加熱，開始熔化后再加入美他多辛原料藥，邊加邊攪拌，使藥物均勻分散在基質(zhì)中，可以避免栓劑出現(xiàn)表面不光滑、凹陷等現(xiàn)象。

3.3 溶劑的選擇 美他多辛極易溶于水，因此采用流動(dòng)相(0.1%磷酸溶液)作為樣品溶劑，可以減少溶劑對主藥吸收峰的干擾。制備供試品溶液時(shí)，混合脂肪酸甘油酯不溶于水，將供試品加入0.1%磷酸溶液中，水浴加熱，油水分離，美他多辛迅速溶解，再趁熱過濾，即可得到供試品溶液。

3.4 流動(dòng)相的確定 有文獻(xiàn)報(bào)道[1]以乙腈-0.2%磷酸(1∶99)為流動(dòng)相，用HPLC法測定美他多辛及其相關(guān)物質(zhì)?？紤]到流動(dòng)相pH對色譜柱的影響，本研究以乙腈-0.1%磷酸溶液(1∶99)為流動(dòng)相。

3.5 數(shù)據(jù)處理 在前言中已經(jīng)提到美他多辛以維生素B6和焦谷氨酸為原料合成制得,為離子對化合物。本研究采用RP-HPLC法,選擇合適的流動(dòng)相配比及檢測波長,可同時(shí)檢測到美他多辛的兩個(gè)離子組分峰(按出峰時(shí)間先后依次稱為峰1和峰2)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,采用峰1或峰2面積,均可計(jì)算美他多辛的含量，但若分別用2個(gè)峰面積計(jì)算含量,則顯得很繁瑣。由于峰2靈敏度較峰1低(測得的峰面積較小)[1],因此本研究采用峰1計(jì)算美他多辛的含量。

【參考文獻(xiàn)】

[1] 程秀民,張建禮,肖盛濤，等. 美他多辛及有關(guān)物質(zhì)的反相高效液相色譜法測定[J].中國新藥雜志,2002,11(10):780-782.

Cheng XiuMin,Zhang JianLi,Xiao ShengTao,etal.Determination of metadoxine and its related substances by RP-HPLC[J].Chin J New Drugs,2002,11(10):780-782.In Chinese with English abstract.

[2] 崔福德.藥劑學(xué)[M].7版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2011:302-303.

Cui FuDe.Pharmaceutics[M].7th ed.Beijing:People’s Health Press,2011:302-303.In Chinese.