許麗麗， 任乃林， 林澤玲

(韓山師范學(xué)院化學(xué)系，廣東潮州521041)

從1903年俄國(guó)植物學(xué)家Tswitt開創(chuàng)色譜法至今，色譜技術(shù)已經(jīng)經(jīng)歷了110多年的發(fā)展。其中高效液相色譜法因其高效、溫和及適用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)而得到快速發(fā)展和廣泛應(yīng)用，目前成為生物醫(yī)藥、食品檢測(cè)、環(huán)境監(jiān)測(cè)、毒品和化學(xué)化工分析等領(lǐng)域的重要檢測(cè)工具［1-4］。色譜分離過程是被分析物、流動(dòng)相和固定相三者之間的分子識(shí)別過程，固定相是色譜分離的核心，固定相分離材料的制備和應(yīng)用始終是色譜工作者研究的前沿和熱點(diǎn)之一［4-6］。在各類液相色譜分析中，采用化學(xué)鍵合固定相的占據(jù)主流地位，其中應(yīng)用最廣的是十八烷基硅烷鍵合硅膠固定相(C18或ODS)。十八烷基柱具有柱效高、穩(wěn)定性好、適用范圍廣和使用方便等優(yōu)點(diǎn)［2］，正是這類固定相的廣泛應(yīng)用豐富和促進(jìn)了反相高效液相色譜理論和技術(shù)的進(jìn)步。然而，隨著生物、制藥、食品和環(huán)境等領(lǐng)域檢測(cè)對(duì)象的日趨多樣化和復(fù)雜化，十八烷基固定相也顯示出其局限性，如對(duì)含強(qiáng)極性、離子型、生物大分子等復(fù)雜樣品的直接分離不夠理想［7-9］。王俊德等［9］認(rèn)為制備反相鍵合硅膠固定相需要解決一個(gè)突出問題，那就是如何克服或屏蔽殘存硅羥基對(duì)溶質(zhì)(尤其是堿性化合物)分離的負(fù)面影響。因此，發(fā)展多齒型配體固定相和制備新型的多功能多作用位點(diǎn)的液相色譜固定相是解決上述問題的重要途徑。例如，近年來李來生實(shí)驗(yàn)室［10-13］研發(fā)出了多種以天然產(chǎn)物為配體的多作用位點(diǎn)新型固定相并初步展現(xiàn)了該類固定相的應(yīng)用優(yōu)勢(shì)。然而該類固定相要得到廣泛應(yīng)用，需進(jìn)一步提高固定相上配體的鍵合量和色譜性能的穩(wěn)定性。本實(shí)驗(yàn)在陳會(huì)明等［10］工作的基礎(chǔ)上，對(duì)合成方法進(jìn)行改進(jìn)。陳會(huì)明等采用固液相表面連續(xù)反應(yīng)法，先將偶聯(lián)劑KH-560鍵合到硅膠表面，然后再將大黃素與硅膠上的KH-560活性基團(tuán)反應(yīng)制得大黃素鍵合硅膠液相色譜固定相(以下簡(jiǎn)稱ESP)。該法可較方便地進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征和除去每步反應(yīng)后多余的偶聯(lián)劑和配體，但鍵合量較低。本實(shí)驗(yàn)改為采用中間體法，先將大黃素與KH-560反應(yīng)，然后再鍵合到硅膠上制得ESP。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)所得的ESP上大黃素的鍵合量有所提高，色譜性能更好，且制備方法有較好的重現(xiàn)性。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

美國(guó)Agilent 1260高效液相色譜系統(tǒng)包括四元泵、柱溫箱、二極管陣列檢測(cè)器、OpenLAB CDS ChemStation工作站和手動(dòng)進(jìn)樣器(20 μL進(jìn)樣環(huán));RPL-ZD10裝柱機(jī)(大連日普利科技有限公司);IR Affinity-1傅里葉變換紅外光譜儀(日本島津公司);Vario ELⅢ型元素分析儀(德國(guó)Elementar公司);DTG-60差熱-熱重同時(shí)分析裝置(日本島津公司);SZ-93自動(dòng)雙重純水蒸餾器(上海亞榮生化儀器廠);大黃素鍵合硅膠色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm，自制);用于對(duì)照研究的C18色譜柱(ZORBAX Eclipse XDB-C18，150 mm ×4.6 mm，5 μm)和苯基色譜柱(ZORBAX Eclipse XDB-Phenyl，250 mm ×4.6 mm，5 μm)，購(gòu)于美國(guó)安捷倫科技有限公司。

大黃素(純度≥98%，貴州迪大科技有限責(zé)任公司)，γ-［(2，3)-環(huán)氧丙氧］丙基三甲氧基硅烷(KH-560)(純度≥98%，武漢市華昌應(yīng)用技術(shù)研究所)，球形硅膠(粒徑5 μm，孔徑10.8 nm，比表面積為236 m2/g，青島美高化工有限公司)，甲醇(西隴化工股份有限公司，色譜純)，水仙牌風(fēng)油精(漳州水仙藥業(yè)有限公司)，其他試劑均為分析純，雙重蒸餾水。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 大黃素鍵合硅膠固定相的制備

固定相的制備路線見圖1。以5 μm的球形硅膠為基質(zhì)，先用3 mol/L鹽酸活化硅膠，再用二次蒸餾水洗至中性，最后用丙酮洗滌后于160℃烘干除水活化6 h，得活化硅膠備用。

取1.0 g經(jīng)烘干的大黃素加入100 mL無水甲苯(金屬鈉除水)中，加熱攪拌使其溶解，攪拌下加入4.0 mL KH-560和1滴高氯酸，在N2保護(hù)下加熱回流24 h，趁熱過濾，濾液為反應(yīng)得到的大黃素偶聯(lián)劑(見圖1中的制備產(chǎn)物(2))。攪拌下向?yàn)V液中加入4.0 g經(jīng)活化的干燥硅膠和3滴三乙胺(重蒸)，在N2保護(hù)下加熱回流24 h，冷卻，離心，將固體依次用甲苯、甲醇、丙酮反復(fù)洗滌至洗液為無色透明，70℃下真空干燥8 h，得大黃素鍵合硅膠固定相(見圖1中的制備產(chǎn)物(3))。

圖1 ESP固定相合成路線Fig.1 Preparation scheme of ESP

采用紅外光譜、元素分析和差熱分析表征ESP固定相的結(jié)構(gòu)。

1.2.2 ESP柱的裝填和色譜分析方法

采用勻漿法裝柱。取稍多于柱體積的大黃素鍵合硅膠固定相(約2.2 g)，用異丙醇作均漿劑，超聲制備均勻懸濁液。取2.5 mL甲醇裝入均漿罐中打底，再把懸濁液倒入均漿罐，然后用甲醇填滿均漿罐，迅速將均漿罐上螺帽栓緊，開啟裝柱機(jī)泵，維持壓力在40～50 MPa一段時(shí)間，當(dāng)流出液約為100 mL時(shí)將壓力調(diào)至35 MPa左右保持40 min，然后在30 min內(nèi)逐漸降壓至常壓。新ESP柱用甲醇反復(fù)沖洗以除去固定相上吸附的雜質(zhì)，然后用甲醇作流動(dòng)相平衡，待基線平穩(wěn)后進(jìn)樣分析。所用流動(dòng)相使用前先過濾，超聲脫氣15 min，溶質(zhì)先用甲醇溶解經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，質(zhì)量濃度范圍為50～250 mg/L，進(jìn)樣體積一般為5 μL，以甲醇溶劑峰的保留時(shí)間為死時(shí)間，柱溫為32℃，流速為0.8 mL/min，至少平行測(cè)定2次。

2 結(jié)果與討論

2.1 固定相的制備及結(jié)構(gòu)表征

本實(shí)驗(yàn)采用中間體法制備ESP，即配體先與偶聯(lián)劑反應(yīng)制備含配體的硅氧烷試劑，然后再與硅膠鍵合最終制得ESP固定相。ESP的紅外光譜圖顯示，位于3 500 cm-1左右的硅羥基伸縮振動(dòng)強(qiáng)峰信號(hào)較弱，說明硅膠表面的硅羥基參與了偶聯(lián)反應(yīng);2 949.16、2 891.30 cm-1處為飽和C-H伸縮振動(dòng)吸收峰，表明硅膠表面含有機(jī)物;1 745.58、1 629.85 cm-1峰簇是C=O和芳環(huán)骨架C=C偶合振動(dòng)吸收帶，即羰基和苯環(huán)存在;1 104.28 cm-1附近為Si-O及C-O伸縮振動(dòng)重疊吸收帶。以上信息說明硅膠表面已鍵合上大黃素配體。由元素分析測(cè)得ESP的碳和氫平均質(zhì)量百分含量分別為10.45%和1.663%(見表1)，根據(jù)碳含量計(jì)算出配體鍵合量為0.23 mmol/g(已扣除單純的偶聯(lián)劑鍵合硅膠碳含量6.385%)。熱重分析(30～750℃，10℃/min)測(cè)得ESP失重19.23%，而偶聯(lián)劑鍵合硅膠失重12.49%，計(jì)算出的鍵合量與元素分析結(jié)果基本相符。以上結(jié)果表明，與陳會(huì)明等［10］采用連續(xù)反應(yīng)法(偶聯(lián)劑先鍵合到硅膠表面，然后將配體與偶聯(lián)劑鍵合硅膠反應(yīng)，最終配體鍵合量為0.18 mmol/g)制備大黃素固定相相比，本法能明顯提高大黃素配體的鍵合量和實(shí)驗(yàn)效率。

表1 ESP的元素分析結(jié)果Table 1 Elemental analysis results of ESP

2.2 ESP固定相的色譜性能及應(yīng)用

2.2.1 柱效和穩(wěn)定性考察

柱效是色譜柱重要的指標(biāo)，它與測(cè)試條件和溶質(zhì)的選擇有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)采用萘作為溶質(zhì)探針，以甲醇-水(60∶40，v/v)為流動(dòng)相，流速為 0.8 mL/min，25℃時(shí)測(cè)得萘在ESP柱上的保留時(shí)間為11.899 min，計(jì)算其理論塔板數(shù)為19 874 N/m，高于前人的報(bào)道［10］。但低于相同條件下商品化C18柱和苯基柱的理論塔板數(shù)(分別為98 413 N/m和96 268 N/m)。

采用甲醇和甲醇-0.01 mol/L KH2PO4(60∶40，v/v，pH=3)反復(fù)交替沖洗ESP柱長(zhǎng)達(dá)一周，發(fā)現(xiàn)萘的保留時(shí)間變化很小，柱效變化不大，說明ESP色譜柱鍵合層穩(wěn)定，溶質(zhì)保留時(shí)間重現(xiàn)性好。

2.2.2 疏水性考察

以苯、甲苯、乙苯為溶質(zhì)探針，以C18柱和苯基柱為參比，考察了ESP柱的疏水性。結(jié)果表明，烷基苯的lg k與亞甲基數(shù)(n)之間有較好的線性關(guān)系，基本符合碳數(shù)規(guī)律。ESP柱的線性斜率p=0.174 7，線性相關(guān)系數(shù)r=0.994 3，疏水選擇性因子 α2，1=1.42;相比相同條件下 C18柱(p=0.340 6，r=0.998 8，α2，1=2.09)和苯基柱(p=0.229 9，r=0.999 6，α2，1=1.73)可知，ESP 具有典型的反相色譜特征，3根色譜柱的疏水性大小依次為C18柱＞苯基柱＞ESP柱，ESP的疏水性較小是由配體本身含有極性基團(tuán)和鍵合量較低所致。

2.2.3 中性芳香化合物的分離

從圖2中發(fā)現(xiàn)，在流動(dòng)相為甲醇-水(50∶50，v/v)時(shí)，7種芳香族化合物在ESP柱上達(dá)到良好分離，而在C18柱上要實(shí)現(xiàn)良好分離必須將流動(dòng)相中甲醇含量提高到65%，否則乙基苯和鄰苯二甲酸二丁酯在C18柱上保留時(shí)間過長(zhǎng)，85 min仍未見出峰。在相同的色譜條件(甲醇-水為50∶50)下，除鄰苯二甲酸二丁酯以外，其他6種溶質(zhì)在苯基柱上基本實(shí)現(xiàn)分離;但鄰苯二甲酸二丁酯在85 min內(nèi)未能洗脫出來，若提高有機(jī)相甲醇的含量，則鄰苯二甲酸二丁酯能較快洗脫但又會(huì)影響其他溶質(zhì)的有效分離。因此在苯基柱上要實(shí)現(xiàn)7種溶質(zhì)的良好分離必須采用較復(fù)雜的梯度洗脫程序?？梢?，與C18柱和苯基柱相比，ESP具有在更低的甲醇比例和更短的時(shí)間內(nèi)將中性芳香化合物完全分離的良好色譜性能。

由圖2a可以看到，溶質(zhì)在ESP柱的保留時(shí)間長(zhǎng)短依次為:喹啉＜苯＜甲苯＜乙基苯＜溴代苯＜鄰苯二甲酸二丁酯＜萘。其中喹啉、苯、甲苯、乙基苯和鄰苯二甲酸二丁酯5種溶質(zhì)在ESP柱的洗脫順序與在C18柱上(圖2b)相同，而溴代苯和萘則不同，說明中性溶質(zhì)在ESP柱上的分離主要基于疏水作用，同時(shí)也存在其他的作用機(jī)制。ESP的偶聯(lián)劑鏈和蒽醌環(huán)提供了疏水性的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，同時(shí)配體中的蒽醌環(huán)和羰基也提供了豐富的π鍵和孤電子對(duì)，能與溶質(zhì)發(fā)生π-π或p-π電荷轉(zhuǎn)移作用。由于萘的共軛體系大，苯環(huán)上電子密度大，與蒽醌環(huán)π-π作用強(qiáng)，故最后被洗脫。ESP與溴代苯和萘的π-π電荷轉(zhuǎn)移作用增強(qiáng)，從而在ESP上的保留也隨之增強(qiáng)。這種π-π電荷轉(zhuǎn)移作用導(dǎo)致保留增強(qiáng)的現(xiàn)象同樣發(fā)生在苯基柱對(duì)含芳環(huán)溶質(zhì)的分離中(圖2c)，與ESP相比，由于苯基柱固定相中配體含量高和裝柱技術(shù)成熟，其π-π共軛和疏水相互作用均強(qiáng)于ESP，從而使得溶質(zhì)在苯基固定相上的洗脫順序有別于單純靠疏水作用機(jī)制的C18固定相以及存在多種作用機(jī)制的ESP。相同色譜條件下，各溶質(zhì)在苯基柱上的保留時(shí)間都比在ESP上長(zhǎng)，在對(duì)喹啉和苯的分離中電荷轉(zhuǎn)移作用占主導(dǎo)，苯先于喹啉洗出，而在對(duì)乙基苯、溴代苯、鄰苯二甲酸二丁酯和萘的分離中顯然疏水作用為主導(dǎo)作用，洗脫時(shí)間為溴代苯＜乙基苯＜萘＜鄰苯二甲酸二丁酯。

圖2 中性芳香族化合物在(a)ESP柱、(b)C18柱和(c)苯基柱上的色譜圖Fig.2 Chromatograms of neutral aromatic compounds on(a)ESP，(b)C18and(c)phenyl columns

2.2.4 堿性芳香化合物的分離

圖3展示了煙酰胺等6種堿在ESP柱、C18柱和苯基柱上的洗脫順序。由于疏水相互作用是溶質(zhì)在C18柱上唯一的作用機(jī)制，溶質(zhì)在C18柱上的保留時(shí)間依照其疏水性大小依次為:煙酰胺＞鄰苯二胺＞苯胺＞對(duì)硝基苯胺＞對(duì)甲苯胺＞1-萘胺。在苯基柱中，雖然溶質(zhì)與固定相還存在π-π電荷轉(zhuǎn)移作用，但疏水作用占支配地位，溶質(zhì)的洗脫順序與C18柱一致。在ESP柱中疏水作用仍為主導(dǎo)作用，使得大部分溶質(zhì)的洗脫順序與C18柱一致，但也有例外，例如:對(duì)甲苯胺的疏水性明顯強(qiáng)于對(duì)硝基苯胺，但對(duì)甲苯胺在ESP柱上的保留反而弱于對(duì)硝基苯胺，顯然帶有吸電基的對(duì)硝基苯胺比帶有供電基的對(duì)甲苯胺與ESP發(fā)生了更強(qiáng)的電荷轉(zhuǎn)移、氫鍵和偶極-偶極作用，這些作用的影響強(qiáng)于兩者疏水性的差異，使得在ESP上對(duì)硝基苯胺的保留強(qiáng)于對(duì)甲苯胺。另外，在該色譜條件下，C18柱單一的疏水作用機(jī)制難以將苯胺和對(duì)硝基苯胺分開(分離度R=0.60)，并且對(duì)1-萘胺的保留比ESP柱和苯基柱弱。若要實(shí)現(xiàn)6種胺類在C18柱上的有效分離，則必須將流動(dòng)相中甲醇的體積分?jǐn)?shù)降至35%，但此時(shí)6種溶質(zhì)的分離分析時(shí)間將增加一倍。因此，ESP對(duì)溶質(zhì)的多種保留機(jī)制使其在堿性物質(zhì)的分離中比C18柱更具有優(yōu)勢(shì)。ESP柱和苯基柱不完全相同的固定相結(jié)構(gòu)也導(dǎo)致了兩者不同的色譜表現(xiàn)。另外值得注意的是，偶聯(lián)劑間隔臂的屏蔽作用和大黃素配體的立體保護(hù)效應(yīng)有效地抑制了硅膠鍵合固定相的“親硅醇基效應(yīng)”，無需添加緩沖鹽，采用簡(jiǎn)單的甲醇-水流動(dòng)相，堿性溶質(zhì)在未經(jīng)封尾處理的ESP柱上的峰形較對(duì)稱，可以與商品化的C18柱和苯基柱媲美。

圖3 6種胺類化合物在(a)ESP柱、(b)C18柱和(c)苯基柱上的色譜圖Fig.3 Chromatograms of six amine compounds on(a)ESP，(b)C18and(c)phenyl columns

2.2.5 酸性芳香化合物的分離

對(duì)比對(duì)氨基苯酚等7種酚類化合物在ESP柱、C18柱和苯基柱上的色譜圖(見圖4)發(fā)現(xiàn)，除對(duì)氨基苯酚外的6種溶質(zhì)在3種固定相上的洗脫順序一致，均符合其疏水性大小順序:對(duì)苯二酚＜間苯二酚＜苯酚＜鄰甲酚＜β-萘酚＜α-萘酚。說明6種酚類化合物在ESP柱和苯基柱上的分離也主要基于疏水相互作用，但同時(shí)也存在其他相互作用。例如:由于苯基柱固定相與溶質(zhì)還存在π-π電荷轉(zhuǎn)移作用，使得在苯基柱上疏水性稍強(qiáng)的間苯二酚反而先于對(duì)氨基苯酚被洗脫出來;而ESP上除了具有能產(chǎn)生ππ電荷轉(zhuǎn)移作用的大黃素蒽醌環(huán)，同時(shí)固定相上的羰基和羥基能與溶質(zhì)發(fā)生氫鍵作用、偶極-偶極作用，多種作用力協(xié)同作用的結(jié)果使得在ESP柱上疏水性稍弱的鄰苯二酚反而慢于對(duì)氨基苯酚被洗脫出來。從溶質(zhì)的保留時(shí)間分析，在相同色譜條件下，柱長(zhǎng)為150 mm 的C18柱對(duì)β-萘酚和α-萘酚的保留時(shí)間最長(zhǎng)，相同柱長(zhǎng)的ESP柱次之，而柱長(zhǎng)達(dá)250 mm苯基柱保留時(shí)間卻最短?？梢?，多種保留機(jī)制使ESP柱對(duì)β-萘酚和α-萘酚的保留明顯強(qiáng)于苯基柱，ESP柱在上述溶質(zhì)分離中顯示出與C18柱和苯基柱明顯不同的分離效率和選擇性;7種溶質(zhì)在ESP和苯基柱上具有較理想的分離度。

圖4 對(duì)氨基苯酚等7種酚在(a)ESP柱、(b)C18柱和(c)苯基柱上的色譜圖Fig.4 Chromatograms of seven phenolic compounds on(a)ESP，(b)C18and(c)phenyl columns

2.2.6 風(fēng)油精中兩種主要成分的分離

風(fēng)油精是百姓家中必備的良藥，具有清涼、止癢、消炎、鎮(zhèn)痛和驅(qū)風(fēng)等功效，其主要有效成分為薄荷腦、水楊酸甲酯、丁香酚、樟腦、桉油等［14］。其中，水楊酸甲酯可促進(jìn)局部血液循環(huán)，起消腫、消炎、止癢和鎮(zhèn)痛作用;丁香酚則具有抑菌、麻醉、解熱、抗氧化、抗腫瘤、促進(jìn)透皮吸收等功效。對(duì)風(fēng)油精中丁香酚和水楊酸甲酯兩種主要成分的測(cè)定有助于風(fēng)油精質(zhì)量的監(jiān)控。由圖5可看出，在ESP上疏水作用較強(qiáng)的水楊酸甲酯洗脫較慢，而極性較強(qiáng)的丁香酚最先被洗脫，這相應(yīng)于ESP反相色譜本質(zhì)，即以疏水作用機(jī)理為主;5 min內(nèi)就能實(shí)現(xiàn)兩組分良好的分離，說明多作用位點(diǎn)的ESP柱在針對(duì)極性較強(qiáng)的樣品分離分析方面有應(yīng)用優(yōu)勢(shì)。

圖5 風(fēng)油精在ESP柱上的色譜圖Fig.5 Chromatogram of a wind medicated oil sample on ESP column

3 結(jié)論

上述結(jié)果表明，ESP固定相具有明顯的反相色譜性能，對(duì)溶質(zhì)的分離主要基于疏水相互作用。同時(shí)由于大黃素配體中含有蒽醌環(huán)、羰基和羥基，豐富的π鍵和孤電子對(duì)與溶質(zhì)間能發(fā)生π-π或p-π電荷轉(zhuǎn)移作用、氫鍵作用以及偶極-偶極作用，多種作用力的分離機(jī)制使得ESP能夠克服C18柱單一疏水作用的缺陷，改進(jìn)苯基柱沒有氫鍵及其他豐富的作用位點(diǎn)的缺陷，在對(duì)中性、堿性和酸性化合物的分離中顯示其優(yōu)異的選擇性和分離性能，ESP在對(duì)不同結(jié)構(gòu)特征和性質(zhì)的芳香化合物的有效、簡(jiǎn)便和快速分離分析方面具有廣闊的應(yīng)用前景。

［1］ Yu S L.Methods and Applications of High Performance Liquid Chromatography.Beijing:Chemical Industry Press(于世林.高效液相色譜方法及應(yīng)用.北京:化學(xué)工業(yè)出版社)，2000:4，8

［2］ Jiang S X，Liu X.Science in China(Series B):Chemistry(蔣生祥，劉霞.中國(guó)科學(xué)(B輯):化學(xué))，2009，39(8):687

［3］ Mullangi R，Sharma K，Srinivas N R.Biomed Chromatogr，2012，26(8):906

［4］ Shen A J，Guo Z M，Liang X M.Progress in Chemistry(沈愛金，郭志謀，梁鑫淼.化學(xué)進(jìn)展)，2014，26(1):10

［5］ Jardim I C S F，Maldaner L，Lourenco J，et al.J Sep Sci，2010，33(19):2917

［6］ Tan Y，F(xiàn)an J，Lin C，et al.J Sep Sci，2014，37(5):488

［7］ McCalley D V.J Chromatogr A，2010，1217(6):858

［8］ da Silva C G A，Collins C H.J Chromatogr A，2012，1260:81

［9］ Huang X J，Yang X L，Liu X L，et al.Chemical Reagents(黃曉佳，楊新立，劉學(xué)良，等.化學(xué)試劑)，2001，23(2):77

［10］ Chen H M，Li L S，Ma H P，et al.Chinese Journal of Analysis Laboratory(陳會(huì)明，李來生，馬海萍，等.分析試驗(yàn)室)，2010，29(3):14

［11］ Chen H，Li L S，Zhang Y，et al.Chinese Journal of Chromatography(陳紅，李來生，張楊，等.色譜)，2012，30(10):1062

［12］ Zhang Y，Liu M F，F(xiàn)ang Y S，et al.Journal of Nanchang University:Natural Science(張楊，劉妙芬，方奕姍，等.南昌大學(xué)學(xué)報(bào):理科版)，2012，36(3):228

［13］ Fang Y S，Li L S，Chen H，et al.Chinese Journal of Applied Chemistry(方奕珊，李來生，陳紅，等.應(yīng)用化學(xué))，2013，30(1):79

［14］ Pharmacopoeia Committee of the Ministry of Public Health of the People’s Republic of China(PRC).National Pharmaceutical Standard of Ministry of Public Health of PRC:Preparation of Chinese Medicine，Part 9.Beijing:Chemical Industry Press(中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn):中藥成方制劑，第9冊(cè).北京:化學(xué)工業(yè)出版社)，1994:42