董宏偉,李忠杰,呂淑榮,劉萬(wàn)卉

(1.煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院,山東 煙臺(tái) 264005;2.煙臺(tái)綠葉動(dòng)物保健品有限公司,山東 煙臺(tái) 264003)

氟苯尼考(florfenicol,簡(jiǎn)稱F)是一種新型的廣譜抗生素．作用機(jī)理和抗菌譜與甲砜霉素、氯霉素相似,但抗菌活性要優(yōu),且無(wú)再生障礙性貧血等不良作用,不易被耐氯霉素和甲砜霉素耐藥菌株產(chǎn)生的乙酰轉(zhuǎn)移酶破壞,現(xiàn)已成為獸用抗菌藥物之一[1-4].氟苯尼考胺(florfenicol amine,簡(jiǎn)稱FFa)是F的主要代謝產(chǎn)物,我國(guó)[5]和歐盟[6]對(duì)動(dòng)物源性食品中的F殘留限MRLs值作了規(guī)定,并以F與FFa作為檢出物．F在畜禽體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)的研究已有不少[7-10],但對(duì)其在大鼠體內(nèi)吸收代謝產(chǎn)物鮮有報(bào)道.本試驗(yàn)研究了氟苯尼考注射液在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)行為,為臨床制定給藥方案提供依據(jù)．

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)SD大鼠18 只,雌雄各半(平均體重200±20 g)隨機(jī)分為A、B、C 3 組,預(yù)飼1周后試驗(yàn),給藥前禁飼12 h,給藥后禁飼4 h,自由飲水．

1.2 藥品和試劑

試驗(yàn)品:氟苯尼考注射液(F含量30%),批號(hào)為120725,由煙臺(tái)綠葉動(dòng)物保健品有限公司提供．

對(duì)照品:紐弗羅注射液(F含量30%,)批號(hào)為RKPB1586,美國(guó)先靈葆雅制藥有限公司．

標(biāo)準(zhǔn)品:氟苯尼考(含量99.9%),批號(hào)為CDCT-C13665000,德國(guó)Dr．鹽酸氟苯尼考胺(TRC,含量99.9%),批號(hào)為CDDM-F405770,多倫多研究院．氯霉素(含量99.6%),中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供．

其他:冰醋酸為分析純,乙腈為色譜純．

1.3 主要儀器

Agilent1200 高效液相色譜儀,VWD 檢測(cè)器,自動(dòng)進(jìn)樣器,XW-80 A渦旋混合器,HSC-24 A氮吹儀,pH計(jì),十萬(wàn)分之一電子天平,微量移液器,Thermo微量高速離心機(jī)等．

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 給藥和血樣采集 試驗(yàn)A組尾靜脈注射氟苯尼考注射液,B、C兩組分別腿部肌肉注射氟苯尼考注射液和紐弗羅注射液,給藥劑量均為30 mg/kg,A組于給藥前及給藥后0.083、0.25、0.5、1.5、2、4、6、8、12、24 h眼眶靜脈叢采血0.4 mL;B組、C組于給藥前及給藥后0.25、0.5、1.5、2、4、6、8、12、24 h眼眶靜脈叢采血0.4 mL,置含肝素鈉抗凝劑的離心管中,混勻,3 600 r/min離心 10 min,吸取上層血漿,置-20 ℃保存．

1.4.2 血漿樣品的處理 取血漿200 μL置10 mL玻璃離心管中,加入300 μg/mL的氯霉素10 μL作為內(nèi)標(biāo)物,再加入pH 7.0的磷酸鹽緩沖液 1 mL渦旋1 min,加入3 mL乙酸乙酯,渦旋混合3 min,離心分離上層有機(jī)相于另一離心管內(nèi),重復(fù)提取一次,合并乙酸乙酯層提取液, 45 ℃下氮?dú)獯蹈桑?00 μL流動(dòng)相復(fù)溶殘?jiān)?以13 000 r/min離心10 min,取上清液進(jìn)樣．

1.4.3 色譜條件 色譜柱:Phenomenex luna-C18(5μm,4.6×250 mm);流動(dòng)相為乙腈-水-冰醋酸(100:197:3,V/V/V),VWD檢測(cè)器,檢測(cè)波長(zhǎng)223 nm,流速1.0 mL/min,柱溫35 ℃[6]．

1.4.4 方法學(xué)研究 取空白血漿200 μL置10 mL離心管中,以標(biāo)準(zhǔn)品氟苯尼考與氟苯尼考胺配制濃度均為0.05～16.0 μg/mL的含藥血漿,按1.4.2項(xiàng)下操作,以F與內(nèi)標(biāo)峰面積比對(duì)F濃度做權(quán)重系數(shù)為1/c2的加權(quán)回歸,得F、FFa的標(biāo)準(zhǔn)曲線分別為:y=0.176 1x+0.055 4,r=0.991 2;y=0.163 1x+0.051 3,r=0.993 5,結(jié)果表明F及FFa在0.05～16 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,定量下限均為0.05 μg/mL,最低檢測(cè)限按信噪比S/N=3計(jì)算均為0.025 μg/mL．

另取空白血漿200 μL置10 mL離心管中,配制濃度為 0.125、1、8 μg/mL 的含藥血漿,按1.4.2項(xiàng)下操作,考察得血漿中F與FFa的日內(nèi)和日間精密度分別在1.29%～3.12%和3.89%～5.01%范圍內(nèi);回收率分別為(103.1±5.27)%～(96.15±3.40)%及(105.2±3.76)%～(94.31±2.67)%,符合生物樣品分析要求．

2 數(shù)據(jù)處理

用DAS2.1.1軟件計(jì)算A、B、C 3組大鼠血漿中F及FFa的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù),結(jié)果見(jiàn)表1、表2,藥時(shí)曲線見(jiàn)圖1．

表1 A 組大鼠F的藥動(dòng)參數(shù)

注:t1/2α藥物分布半衰期;t1/2β藥物消除半衰期;AUC藥時(shí)曲線下總面積;tmax最高血藥濃度時(shí)間;CLz/F清除率;Cmax最高血藥濃度．

表2 B、C兩組大鼠F及FFa的藥動(dòng)參數(shù)

注:Ka吸收速率常數(shù);t1/2Ka藥物吸收半衰期;其余參數(shù)同表1．

圖1 各實(shí)驗(yàn)組大鼠的血藥濃度-時(shí)間曲線

3 討 論

3.1 靜注給藥的藥動(dòng)學(xué)特征

健康大鼠靜注氟苯尼考注射液(30 mg/kg)后,F的藥動(dòng)學(xué)行為符合二室開(kāi)放模型,與F在牛體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究相符[11-12].大鼠靜注后,深室分布較快,分布半衰期為t1/2α為0.84 h, AUC為 51.75 mg/L·h,Cmax為36.51 μg/mL．

據(jù)相關(guān)報(bào)道,F在牛[11-12]、奶山羊[13]、豬[9,14]體內(nèi)消除半衰期分別為2.3～4.1 h、2.3 h和6.72 h,本試驗(yàn)中F在大鼠體內(nèi)的消除緩慢,t1/2β為12.85 h;F在牛[11-12]、奶山羊[13]、馬[15]和豬[9,14]體內(nèi)的全身清除率分別為0.15～0.26、0.47、0.40和0.23 L/(h·kg),與試驗(yàn)確定的F在大鼠體內(nèi)的CLz/F為0.58 L/(h·kg)相近．AfifiNA等認(rèn)為,F在動(dòng)物體內(nèi)清除率低,消除緩慢是由于F化學(xué)結(jié)構(gòu)中-OH被-F取代,阻遏葡萄糖醛酸的結(jié)合,從而延緩了動(dòng)物體內(nèi)F的排泄所致[16]．

3.2 肌注給藥的藥動(dòng)學(xué)特征

大鼠肌注氟苯尼考注射液及對(duì)照品紐弗羅注射液(30 mg/kg,按氟苯尼考載藥量計(jì)算)后,藥動(dòng)學(xué)行為均符合一室模型,與文獻(xiàn)報(bào)道其在牛[11-12]、馬[15]、雞[16]的研究結(jié)果一致．吸收較快且完全,吸收半衰期分別為0.72、0.58 h,在1 h均達(dá)到最大吸收,分別為6.70、6.57 μg/mL;在大鼠體內(nèi)消除緩慢,消除半衰期分別為12.63、11.37 h;肌注氟苯尼考注射液與對(duì)照品紐弗羅注射液后藥動(dòng)學(xué)參數(shù)無(wú)顯著差異,F的相對(duì)生物利用度為99.32%,絕對(duì)生物利用度為87.38%,比牛[11-12](78.5%)、鴨[17](73.03%)、馬[15](81%)和山羊[18](65.72%)高,比雞[16](96.6%)和豬[9,14](96.86%)低．

3.3 肌注后代謝產(chǎn)物的藥動(dòng)學(xué)特征

F的代謝物主要是FFa[19],目前沒(méi)有報(bào)道顯示其有抗菌活性,但是F用于可食性動(dòng)物源時(shí),FFa是殘留檢測(cè)的重要指標(biāo)之一[5-6].B組大鼠肌注氟苯尼考注射液后代謝產(chǎn)物FFa在給藥后0.5 h濃度即達(dá)到0.1 μg/mL以上,8 h達(dá)到最高峰,與C組大鼠肌注對(duì)照品紐弗羅注射液后代謝物FFa藥動(dòng)學(xué)參數(shù)無(wú)顯著差異．

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)研究了靜注及肌注氟苯尼考注射液與對(duì)照品紐弗羅注射液后F在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征,結(jié)果表明F吸收迅速,消除緩慢(12 h仍能維持0.5 μg/mL),據(jù)報(bào)道F對(duì)其敏感菌的MIC均為0.5 μg/mL左右[20],本品(氟苯尼考注射液)能在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)維持藥效濃度．

肌注氟苯尼考注射液后代謝物FFa在大鼠體內(nèi)消除緩慢,分布均勻,氟苯尼考注射液的相對(duì)生物利用度為99.32%,絕對(duì)生物利用度為87.38%,試驗(yàn)品氟苯尼考注射液與對(duì)照品紐弗羅注射液在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)無(wú)顯著差異,為氟苯尼考注射液進(jìn)一步臨床試驗(yàn)提供了參考依據(jù)．

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