程 冕，韓敏輝，王寧燕

PCNA和MMP-9在食管鱗癌中的表達(dá)及其意義

程 冕，韓敏輝，王寧燕

目的分析PCNA,MMP-9在食管鱗癌中的表達(dá)，探討其在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展中的意義。方法應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)PCNA,MMP-9在52例食管鱗癌和30例癌旁組織中的表達(dá)情況，并結(jié)合臨床病理資料進(jìn)行分析。結(jié)果PCNA,MMP-9蛋白在食管鱗癌組織中的表達(dá)率高于癌旁組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PCNA的表達(dá)與食管鱗癌的分化程度，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)；MMP-9的表達(dá)與食管鱗癌分化程度，腫瘤浸潤程度，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期相關(guān)；PCNA和MMP-9表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論食管鱗癌組織中PCNA,MMP-9的高表達(dá)參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展，聯(lián)合檢測(cè)有助于食管鱗癌惡性生物學(xué)行為的判斷和病程的評(píng)估。

食管腫瘤； 增殖細(xì)胞核抗原； 基質(zhì)金屬蛋白酶-9； 免疫組織化學(xué)

食管癌是一種常見的消化道腫瘤，我國是世界上食管癌發(fā)病率最高的國家，最常見的是鱗狀細(xì)胞癌，其早期診斷困難，預(yù)后差[1]。細(xì)胞周期調(diào)控異常是細(xì)胞過度增值的重要原因，在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)是反映細(xì)胞增殖活性的一個(gè)重要指標(biāo)[2]。細(xì)胞外基質(zhì)在維持正常組織結(jié)構(gòu)與功能以及細(xì)胞生長和分化過程中起重要作用，其動(dòng)態(tài)平衡的失調(diào)與腫瘤細(xì)胞的侵襲，轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)密切相關(guān)，基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)是細(xì)胞外基質(zhì)的降解酶。本研究采用免疫組化方法檢測(cè)PCNA,MMP-9蛋白在食管鱗癌中的表達(dá)情況，以探討其與食管癌惡性生物學(xué)行為的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1材料 選擇我院2010-2012年行食管癌根治術(shù)，且病史資料完整的52例食管癌組織標(biāo)本及與其對(duì)應(yīng)的癌旁標(biāo)本30例。癌組織標(biāo)本經(jīng)HE染色證實(shí)為食管癌，癌旁組織未見腫瘤細(xì)胞。所有病例術(shù)前未進(jìn)行放療和化療。其中男36例，女16例；年齡為38～74歲，中位年齡數(shù)為57歲。根據(jù)分化程度分為高中分化34例，低分化18例；侵犯外膜者21例，未侵犯外膜者31例；腫瘤長徑≥5 cm者16例，<5 cm者36例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者24例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者28例；TNM分期：Ⅰ期 5例，Ⅱ期 28例，Ⅲ期19例。鼠抗人PCNA單克隆抗體，鼠抗人MMP-9單克隆抗體，即用型快捷免疫組化Maxvision檢測(cè)試劑盒，檸檬酸緩沖鹽修復(fù)液均購自福州邁新公司，DAB購自sigma公司。

1.2方法 采用免疫組化快捷maxvision二步法檢測(cè)癌組織及癌旁組織中PCNA.MMP-9蛋白表達(dá)情況。標(biāo)本用10%福爾馬林液固定，石蠟包埋，切成3 μm厚，切片經(jīng)63℃烤箱烘烤過夜后分別經(jīng)二甲苯脫蠟，梯度酒精水化，以后操作步驟嚴(yán)格按說明書進(jìn)行。采用已知表達(dá)的胃癌及乳腺癌切片作陽性對(duì)照，用已知陰性反應(yīng)的其他組織切片作陰性對(duì)照，PBS緩沖液代替一抗作空白對(duì)照。

1.3結(jié)果判定 MMP-9表達(dá)以胞漿中出現(xiàn)棕色反應(yīng)為陽性，PCNA以胞核中出現(xiàn)棕色反應(yīng)為陽性。結(jié)果參照文獻(xiàn)[3]評(píng)分方法，選5個(gè)高倍視野，計(jì)算陽性細(xì)胞數(shù)，以陽性細(xì)胞<5%記為0分；35%≥陽性數(shù)>5%為1分；70%≥陽性數(shù)>35%為2分；陽性數(shù)>70%為3分。著色強(qiáng)度計(jì)分，與陰性對(duì)照同等顏色為0分，弱著色(淡棕黃色)為1分，強(qiáng)著色(明顯棕黃色)為2分。陽性分級(jí)：以上2項(xiàng)相加，0-1分為(-)；2分為(±)；3分為(+)；4分為(++)；5分為(+++)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用spss12.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用χ2及Spearman相關(guān)分析，以P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1PCNA ,MMP-9在食管癌及癌旁組織的表達(dá) PCNA蛋白在食管鱗癌中的陽性率為75% ，在癌旁組織中的陽性表達(dá)率為23.33%，兩者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(χ2=20.620，P<0.05)。MMP-9蛋白在食管鱗癌中的陽性率為71.15% ，在癌旁組織中的陽性表達(dá)率為16.67%，兩者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=22.606，P<0.05)。見表1。

表1 PCNA和MMP-9 蛋白在食管鱗癌及癌旁組織中的表達(dá)情況(n，%)

2.2PCNA,MMP-9蛋白表達(dá)與食管鱗癌臨床病例因素的關(guān)系 PCNA蛋白表達(dá)與食管癌的分化程度，有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，分化差，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管鱗癌PCNA陽性表達(dá)率明顯高于分化好，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的鱗癌，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；但與腫瘤大小及浸潤范圍關(guān)系不密切(P>0.05)。分化越差，腫瘤浸潤程度越深，TNM分期越差及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管鱗癌中MMP-9蛋白表達(dá)率越高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 PCNA和MMP-9 蛋白表達(dá)與食管鱗癌臨床病理特征的關(guān)系 (n，%)

2.3食管鱗癌組織PCNA,MMP-9蛋白表達(dá)的相關(guān)性 食管鱗癌組織PCNA,MMP-9蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.594,P<0.05)。見表3。

表3 PCNA和MMP-9在食管癌中表達(dá)的相關(guān)性 (例)

3 討論

PCNA是一種分子量為36kD的酸性核蛋白，是DNA多聚酶δ的輔助蛋白，在細(xì)胞周期中起重要調(diào)節(jié)作用，其表達(dá)隨細(xì)胞周期而變化，在G1期開始上升，S期達(dá)高峰，G2至M期下降，能客觀反映原發(fā)性腫瘤的惡性增殖程度，常作為測(cè)定細(xì)胞增殖水平的指標(biāo)之一[2]。在許多惡性腫瘤如大腸癌，肺癌，胃癌，鼻咽癌及肝癌中，PCNA陽性表達(dá)率明顯增高[4-6]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過檢測(cè)53例食管鱗癌，30例癌旁組織的PCNA蛋白表達(dá)發(fā)現(xiàn)：PCNA在食管鱗癌組織中的表達(dá)率顯著高于癌旁組織，并且在分化程度越低的癌組織中，PCNA表達(dá)率越高，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織其表達(dá)率也高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的鱗癌。說明PCNA高表達(dá)則腫瘤細(xì)胞分化差，惡性度高，易發(fā)生轉(zhuǎn)移。本實(shí)驗(yàn)中PCNA表達(dá)強(qiáng)度與侵襲范圍，TNM分期無關(guān)，這與一些報(bào)道不相一致[7]，這可能與選擇的標(biāo)本量及其病理類型構(gòu)成比，還有檢測(cè)方法不同有關(guān)。一般認(rèn)為，表達(dá)強(qiáng)度越高，預(yù)后越差，本實(shí)驗(yàn)支持這個(gè)結(jié)論，說明PCNA表達(dá)是預(yù)測(cè)食管癌的一個(gè)有用指標(biāo)，可以和傳統(tǒng)的臨床病例特征相結(jié)合，更有效地預(yù)測(cè)食管癌的預(yù)后。

實(shí)體腫瘤對(duì)周圍組織發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移時(shí)有幾個(gè)主要的環(huán)節(jié)，包括腫瘤細(xì)胞對(duì)基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)的，對(duì)間質(zhì)結(jié)締組織的侵襲，產(chǎn)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移灶，新生血管形成等等。其中MMP-9在破壞基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)的過程中發(fā)揮著重要作用[8]。在本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)食管癌組織中MMP-9蛋白表達(dá)率顯著高于癌旁組織，且隨著癌組織浸潤深度的增加，腫瘤細(xì)胞分化程度的降低， TNM分期的惡化，癌細(xì)胞MMP-9的表達(dá)強(qiáng)度越強(qiáng)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組MMP-9表達(dá)率明顯高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組。有關(guān)MMP-9的表達(dá)與食管癌臨床病例特征之間的關(guān)系有一些爭(zhēng)議。王亞飛等[9]報(bào)道MMP-9蛋白表達(dá)與縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移腫瘤浸潤深度，臨床分期無明顯相關(guān)性。但更多國內(nèi)外報(bào)道與本實(shí)驗(yàn)結(jié)論一致[10-11]。產(chǎn)生爭(zhēng)議的原因可能與標(biāo)本的選擇及評(píng)價(jià)方法不同有關(guān)。通過本研究可以認(rèn)為MMP-9是一種加速腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移的蛋白水解酶，其表達(dá)量的增加能加速基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)的破壞。

本研究結(jié)果顯示，在食管鱗癌中PCNA和MMP-9表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.01)。在52例食管癌標(biāo)本中有31例同時(shí)檢測(cè)到上述2種蛋白的表達(dá)。產(chǎn)生這種現(xiàn)象的原因是由于腫瘤細(xì)胞的增殖能力增強(qiáng)強(qiáng)從而刺激了MMP-9的表達(dá)，還是由于一個(gè)共同的因素刺激PCNA和MMP-9的表達(dá)？具體機(jī)制有待于進(jìn)一步的研究。通過本研究可以預(yù)示，PCNA和MMP-9的聯(lián)合檢測(cè)有助于對(duì)食管鱗癌生物學(xué)行為的判斷和預(yù)后的估計(jì)，有助于合理評(píng)估患者的病程，給臨床治療方案制定提供有益的參考。

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ExpressionandsignificanceofPCNAandMMP-9inesophagealsquamouscellcarcinomas

CHENGMian,HANMin-hui,WANGNing-yan．

(TheNo. 123HospitalofthePLA,Bengbu,Anhui233015，China)

ObjectiveTo study the expression of PCNA and MMP-9 in esophageal squamous cell carcinomas and validate the significance in the tumorigenesis and progression.MethodsThe expression of PCNA and MMP-9 in 52 esophageal squamous cell carcinomas tissues and 30 adjacent non-neoplastic tissus were detected with immunohistochemical maxvision method, and the results were analyzed combined with clinical pathologic data.ResultsThe positive rate of PCNA and MMP-9 in esophageal squamous cell carcinomas tissues were higher than that in adjacent non-neoplastic tissus(P<0.05).The expression of PCNA was correlated with differentiation of tumor and lymphnode metastasis.The expression of MMP-9 was correlated with differentiation of tumor,lymphnode metastasis,depth of invasion and clinical TNM types.In addition,there was a positive correlation between the expression of PCNA and MMP-9(P<0.05).ConclusionThe high expression of PCNA and MMP-9 in esophageal squamous cell carcinomas may play a crucial role in the tumorigenesis and progression.Combined detection may contribute to evaluation of the malignant biological behaviour and prognosis.

MMP-9; Esophageal squamous cell carcinoma; PCNA; Immunohistochemistry

解放軍第123醫(yī)院 九病區(qū)，安徽 蚌埠 233015

程 冕(1974-)，男，安徽宣城市人，副主任醫(yī)師，研究生。

R735.1

A

1008-7044(2014)03-0213-03

2013-09-22)