程春旭

艾滋病患者進行抗病毒治療耐藥性影響因素的研究

程春旭

目的 探討艾滋病患者進行抗病毒治療出現(xiàn)耐藥性的影響因素。方法 對選取的70例艾滋病患者做問卷調(diào)查，并抽取患者血液，對采集的血液進行檢測并提取含有人類免疫缺陷病毒-1(HIV-1)RNA作為樣本，利用PCR技術(shù)擴增基因，In-house方法對基因測序，分析擴增基因與HIV耐藥數(shù)據(jù)庫的對比結(jié)果，探討耐藥性的影響因素。結(jié)果 采集到的70例患者的人類免疫缺陷病毒-1pol序列中，呈現(xiàn)耐藥性的有12例，總耐藥率為17.14%。治療時間≤1年的患者耐藥性較治療時間超過1年的患者低；服藥依從性＞90%的患者較服藥依從性介于50%～90%之間的患者耐藥性低；用蛋白酶抑制劑治療的患者較用核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑治療的患者耐藥性低。以上指標比較差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 耐藥性的主要影響因素是治療時間、服藥依從性和抗病毒治療藥物種類。研究總結(jié)耐藥性的影響因素有助于優(yōu)化治療方案，提高治療效果。

艾滋?。荒退幮?；抗病毒

目前，艾滋病的主要治療方法是進行抗病毒治療，高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療（HAART)已經(jīng)在臨床治療中得到廣泛推廣應(yīng)用[1]。迄今為止，高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療已經(jīng)使許多艾滋病患者擺脫艾滋病的困擾。但艾滋病病毒的高度變異性、抗病毒治療的藥物種類稀缺、服藥依從性、治療時間漫長等多個原因的存在，導(dǎo)致艾滋病患者在接受抗病毒治療后體內(nèi)出現(xiàn)耐藥毒株，機體產(chǎn)生耐藥性，即藥物不能產(chǎn)生應(yīng)有的藥物反應(yīng)，抗病毒治療效果下降顯著[2]。為探討艾滋病患者接受抗病毒治療后出現(xiàn)耐藥性的影響因素，提出有效防治耐藥性出現(xiàn)的辦法，提高抗病毒治療療效，本研究對70例患者的臨床資料進行分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年1月～2013年10月于吉林省長春市傳染病醫(yī)院進行抗病毒治療的艾滋病患者70例，其中男43例，女27例，年齡20～61歲，平均年齡（37.6±4.5）歲，治療時間5～51個月。

1.2 方法

1.2.1 問卷調(diào)查 對每名艾滋病患者發(fā)放問卷，調(diào)查患者的臨床癥狀。問卷調(diào)查包括：患者年齡、性別、民族、文化水平等基本信息，患病原因，治療時程，治療方法，近1個月內(nèi)出現(xiàn)的臨床癥狀和近1個月內(nèi)的服藥依從性。

1.2.2 采集血液 采集艾滋病患者的血液，從血液中提取病毒RNA，繼而將病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，作為PCR技術(shù)的模板。

1.2.3 PCR擴增 擴增共進行2輪：第1輪以Gag-outer (5’-GGGTTTTGGCTGAGGCAATGAG-3’)、Polouter(5’-GCTTGCCAATACTCCRTCCACCA-3’)為引物進行擴增，構(gòu)建25μL總反應(yīng)體系，體系除5μL模板、0.5μmol/L的引物，還包括1.5UTaq酶（熱DNA聚合酶）、1.6mmol/L MgC12以及200μmol/L dNTP。第1輪擴增分3個環(huán)節(jié)：（1）94℃5min，50℃30min，94℃30s進行一次循環(huán)；（2）94℃30s、55℃30s、72℃150s進行30次循環(huán)；（3）72℃10min，在4℃環(huán)境下保溫。第2輪擴增的引物為Seql(5'-GAGCCAACAGCCCCACCA-3’)或Seq3(5’-GAATCTCCCTGTTTTCTGCCA-3’)，總反應(yīng)體系共50μL，包含作為模板的第1輪擴增產(chǎn)生的5μL產(chǎn)物，濃度均為0.4μmol/L的上下游引物，2.5UTaq酶（熱DNA聚合酶），1.6mmol/LMgC12以及200μmol/L dNTP。第2輪擴增也分3個環(huán)節(jié)：（1）94℃5min；（2）94℃30s、63℃30s、72℃150s進行30次循環(huán)；（3）72℃10min，在4℃環(huán)境下保溫。

1.2.4 電泳測序 將2輪擴增后所得擴增產(chǎn)物回收交由北京測序公司進行電泳測序，測序所用引物為Seql(5'-GAGCCA ACAGCCCCACCA-3’)Seq3(5’-GAATCTCCCTGTTTTC TGCCA-3’)SeqF(5’-GCCTGAAAATCCATACAATACTC C-3’)和SeqR(5’-GGATGCGGTATTCCTAATTGAACT TC-3’)。

1.2.5 分析耐藥性 應(yīng)用Contig Express和Bioedit軟件整理拼接并校對測序后的序列，將序列通過網(wǎng)絡(luò)提交至美國斯坦福大學(xué)的HIV序列網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫（http://hivdb.stanford.Edu)進行比對分析，根據(jù)比對后獲得的序列耐藥性突變位點評價序列的耐藥性。

1.3 評價標準 耐藥性評價共分敏感、潛在耐藥、低度耐藥、中度耐藥及重度耐藥5個等級。認為低度耐藥以上等級為對藥物有耐藥性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，正態(tài)計量資料以“±s”表示，組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 艾滋病患者抗病毒治療后出現(xiàn)耐藥性的影響因素分析

2 結(jié)果

結(jié)果表明，年齡、性別、民族、受教育水平、患病原因的不同不影響耐藥性的產(chǎn)生，不是抗病毒治療產(chǎn)生耐藥性的影響因素，而治療時間的長短、服藥依從性的差異以及抗病毒治療的藥物種類的不同對耐藥性的產(chǎn)生有顯著影響。治療時間超過1年以上的患者耐藥性高，治療時間小于等于1年的患者耐藥性低；而服藥依從性50%～90%的患者耐藥性高，服藥依從性大于90%的患者耐藥性低；用核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑進行抗病毒治療的患者耐藥性高，而抗病毒治療所用藥物為蛋白酶抑制劑的患者耐藥性低(見表1)。

3 討論

艾滋病，全稱為獲得性免疫缺陷綜合征，其致病因子是HIV病毒，該病毒本身并不引發(fā)任何疾病，而是通過破壞機體的淋巴組織等免疫系統(tǒng)，降低患者免疫力，使患者易感染其他疾病，最終導(dǎo)致死亡。病原體受到藥物的多次刺激后，產(chǎn)生一系列適應(yīng)性變化，如病原體自身對藥物的敏感性下降或消失、病原體產(chǎn)生酶降低藥物的活性、病原體作用于膜或靶器官阻止藥物進入細胞發(fā)揮作用，導(dǎo)致藥物的治療效果減弱或喪失稱為耐藥性[3]。

HIV病毒是一種RNA病毒，具有遺傳變異的特性，參與HIV基因轉(zhuǎn)錄的關(guān)鍵酶是逆轉(zhuǎn)錄酶，該酶在DNAA復(fù)制中也起作用，但不能如DNA聚合酶一樣對所轉(zhuǎn)錄物質(zhì)進行校對的功能，因此會造成HIV發(fā)生錯誤復(fù)制。HIV基因的錯配導(dǎo)致藥物不能與復(fù)制產(chǎn)物特異性結(jié)合，藥物起不到治療作用，發(fā)生耐藥性變異的病毒株取代原有病毒株，占據(jù)優(yōu)勢地位，因此臨床上出現(xiàn)抗病毒治療耐藥性的現(xiàn)象[4]。

通過單獨分析耐藥性因素發(fā)現(xiàn)，患者的年齡、性別、民族、受教育程度、患病原因等方面的差異對產(chǎn)生耐藥性無直接影響，即不是耐藥性的影響因素。耐藥性的主要影響因素是治療時間、服藥依從性和抗病毒治療藥物種類。

由于艾滋病是目前世界難題之一，仍沒有發(fā)現(xiàn)較為直接的治療藥物，因此治療時間多持續(xù)較長，患者長期使用同一種抗病毒藥物進行治療，造成HIV基因?qū)λ幬锏拿舾行越档?，產(chǎn)生了一系列對藥物的適應(yīng)性變化，從而導(dǎo)致耐藥性的產(chǎn)生。

服藥依從性是耐藥性另一重要影響因素，實驗發(fā)現(xiàn)服藥依從性低導(dǎo)致耐藥率高。造成服藥依從性低的原因有二：（1）患者相信抗病毒治療的有效性，完全是資源性服藥；（2）患者自我感覺良好，認為不按時按律服用對病情影響不大。由于存在如上現(xiàn)象，導(dǎo)致藥物的療效不能完全發(fā)揮，病毒產(chǎn)生耐藥性。

影響耐藥性的因素還有抗病毒治療藥物的種類。常見的抗病毒藥物有蛋白酶抑制劑、核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑3種。研究發(fā)現(xiàn)，核苷類和非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的長期且大劑量使用導(dǎo)致了耐藥率上升，蛋白酶抑制劑適用范圍較小，耐藥率較低前兩種藥物[5]。

目前普遍使用的治療艾滋病的方法是高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(HAART)，但是隨著該治療方法使用時間的延長，耐藥性成為了臨床抗病毒治療的主要失敗原因。為了減低耐藥性從而提高治療效果，臨床上應(yīng)對治療時程長的患者提起高度重視，為盡早發(fā)現(xiàn)患者是否出現(xiàn)耐藥情況，應(yīng)當(dāng)增加檢測耐藥性的頻率，提高藥物的治療效果。此外，優(yōu)化抗病毒治療藥物方案，如加入蛋白酶抑制劑治療，可降低耐藥性。

總之，降低藥物耐藥性是提高治療艾滋病水平的重要環(huán)節(jié)，研究總結(jié)耐藥性的影響因素有助于優(yōu)化治療方案。

[1] 朱新朋,劉宏偉,田隨安,等．河南艾滋病病毒基因型耐藥檢測研究[J]．中國衛(wèi)生檢驗雜志,2009,19(6)：1324-1326.

[2] 鄭錦雷，楊介者，徐云，等．高效逆轉(zhuǎn)錄病毒治療艾滋病方案的效果評價[J]．浙江預(yù)防醫(yī)學(xué)，2010，22(1)：5-7．

[3] 蘇齊鑒，周平，閉志友．抗病毒治療艾滋病患者HIV-l耐藥性影響因素[J]．中國公共衛(wèi)生，2010，26(4)：438-441．

[4] 陳志強，梁良，李保軍，等．2007年河北省艾滋病病毒耐藥檢測結(jié)果分析[J]．河北醫(yī)藥，2009，31(9)：1129-1130．

[5] 中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會艾滋病學(xué)組．艾滋病診療指南(2011年版)[J]．中華傳染病雜志，2011，29(10)：629-640．

10.3969/j.issn.1009-4393.2014.31.006

吉林 130123 吉林省長春市傳染病醫(yī)院傳染科（程春旭）