王 梅 王曉娟

(1.內(nèi)蒙古婦幼保健院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020;2.錫盟食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，內(nèi)蒙古 錫林浩特 026000)

蒙成藥森登-9湯由文冠木、梔子、訶子、決明子、苦參、黃柏、川楝子、楓香子、苘麻子等9味藥組成，處方中梔子為主藥成分，梔子苷可作為森登-9湯中含量指標(biāo)。本文采用HPLC方法對(duì)梔子苷進(jìn)行測(cè)定。

1 儀器、材料與試劑

島津SPD-20AT高效液相色譜儀。梔子苷對(duì)照品由中國藥品生物制品檢定所提供;森登-9湯由鑲黃旗旗蒙醫(yī)院提供，森登-9湯模擬樣品自制。乙睛、甲醇為色譜純，水為高純水，其他試劑均為分析純。

2 含量測(cè)定

2.1 色譜條件:色譜柱天河 C18(250mm ×4.5mm，5μm);乙腈-水-甲醇(12:88:1)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為238nm，流速為1mL·min-1，柱溫為40。C。

2.2 提取時(shí)間考察與樣品制備:參照《中國藥典》2005年版一部“三子散”項(xiàng)下梔子苷含量測(cè)定的方法，選用甲醇作為提取溶劑精密稱取0.3g，至具塞錐形瓶中，精密加入甲醇溶液25mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率300W，頻率40kHz)50min，放冷，稱定重量，甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，制得供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定。實(shí)驗(yàn)中考察了超聲提取10min、20min、30min、40min、50min、60min 和 70min 不同超聲提取時(shí)間對(duì)提取效率的影響，結(jié)果見表1。

從表1中數(shù)據(jù)可見，超聲處理50min、60min和70min梔子苷的含量基本一致，故超聲提取時(shí)間定為50min。

2.3 專屬性:精密稱取梔子苷對(duì)照品15.04mg，置50mL量瓶中，加甲醇(色譜純)溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1mL于10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成對(duì)照品溶液。在2.1色譜條件下，精密吸取對(duì)照品溶液10μL注入液相色譜儀，依法測(cè)定。見圖1。

表1 提取效率的考察表

圖1 梔子苷對(duì)照品的HPLC圖

取上述模擬陰性對(duì)照約0.3g，精密稱定，制成陰性對(duì)照液，精密量取續(xù)濾液10μl注入液相色譜儀，同法測(cè)定。

圖2 陰性對(duì)照液的HPLC圖

取森登-9湯，研細(xì)，稱取約0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇(分析純)25mL，密塞，稱定重量，超聲處理50min，放冷，再稱定重量，用甲醇(分析純)補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10μL注入液相色譜儀，同法測(cè)定。

圖3 森登-9湯HPLC圖

測(cè)定結(jié)果:陰性對(duì)照色譜圖在與梔子苷對(duì)照品以及供試品色譜相對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間處無色譜峰出現(xiàn)，表明處方中其它組分對(duì)梔子苷的測(cè)定無干擾。

2.4 線性關(guān)系考察:取梔子苷對(duì)照品15mg，精密稱取為15.04mg，置150mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取 0.5、1、2、3、4、5、6mL，分別置 10mL 量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，各取20μL進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積對(duì)濃度進(jìn)行回歸分析，結(jié)果梔子苷在0.1003～1.2032μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

回歸方程為:Y=1379109.7770X+1331.1041，R2=0.9993

表2 梔子苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)值表

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一份供試品溶液(批號(hào):20090604)，分別在 0h、2h、4h、8h、12h、24h 進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表 3。

表3 不同時(shí)間測(cè)定樣品中梔子苷的峰面積積分值

從表3中數(shù)據(jù)可見，梔子苷在24h內(nèi)的峰面積積分值基本穩(wěn)定不變。

2.6 精密度:取同一批號(hào)供試品(批號(hào):20130508)6份，研細(xì)，精密稱取0.3g，按2.2項(xiàng)下的方法制得供試品溶液;另精密稱取梔子苷對(duì)照品15.04mg依法制成每1mL含梔子苷30.08ug的溶液作為對(duì)照品溶液。分別精密吸取上述溶液各20ul注入色譜儀測(cè)定每份供試品含量。按外標(biāo)法計(jì)算含量。平均含量(2.6537mg·g-1)，RSD(%)1.1。

2.7 回收試驗(yàn):梔子苷對(duì)照品溶液的制備精密稱取梔子苷對(duì)照品15.04mg，置50m量瓶中，加甲醇制成每1mL含梔子苷0.3008mg的溶液，再分別精密吸取5mL、10mL、15mL分別至 200mL 量瓶中制成 7.52μg·mL-1、15.04μg·mL-1和22.56μg·mL-1梔子苷對(duì)照品溶液。取供試品(批號(hào):20130508 含量2.6537mg·g-1)9 份，各約 0.15mg，精密稱定，分別置9個(gè)具塞錐形瓶中，在1-3、4～6、7～9號(hào)分別精密加入濃度為0.00752mg·mL 、0.01504mg·mL 、0.02256mg·mL-1的梔子苷對(duì)照品甲醇溶液25mL，按2.2項(xiàng)下的方法制得供試品溶液，分別精密吸取上述溶液各20μL注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。平均回收率分別為101.1、101.3、98.8，RSD(%)為 0.5、0.3、0.6。

3 樣品含量測(cè)定

取本品2.0g，按2.2項(xiàng)下方法制備，取10μL注入液相色譜儀，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果見表4。

表4 樣品中梔子苷含量測(cè)定結(jié)果

從表4中二批樣品及一批模擬樣品測(cè)定的數(shù)據(jù)可見，梔子苷的含量在2.4992mg·g-1以上。

4 小結(jié)

4.1 梔子苷的檢測(cè)保留時(shí)間為9.75min;而陰性對(duì)照溶液在此處未出現(xiàn)檢測(cè)峰。說明樣品中的其他藥材不干擾梔子苷的測(cè)定。

4.2 參照《中國藥典》2005年版一部“三子散”項(xiàng)下梔子苷含量測(cè)定的方法，含量測(cè)定項(xiàng)下的流動(dòng)相和檢測(cè)波長，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，分離效果不好，故采用現(xiàn)在的流動(dòng)相進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

［1］國家藥典委員會(huì)編.中國藥典［S］.一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005，173，324

［2］內(nèi)蒙古衛(wèi)生廳編.內(nèi)蒙古蒙藥材標(biāo)準(zhǔn)［S］.赤峰:內(nèi)蒙古科學(xué)技術(shù)出版社，1986，448、498

［3］內(nèi)蒙古食品藥品檢驗(yàn)所.內(nèi)蒙古蒙藥制劑規(guī)范［S］.呼和浩特:內(nèi)蒙古人民出版社2007，26、226