應(yīng)用CLSM對(duì)自體表皮移植治療白癜風(fēng)的療效觀察

羅 衛(wèi)，馬春林，呂俊卿，蔡瑞康

目的 應(yīng)用共聚焦激光掃描顯微鏡(CLSM)觀察自體表皮移植治療白癜風(fēng)后的黑素細(xì)胞恢復(fù)狀況。方法 采用CLSM對(duì)白癜風(fēng)皮損進(jìn)行檢測(cè)，選擇鏡下顯示黑素細(xì)胞完全消失的皮損進(jìn)行自體表皮移植，移植后1、3、6個(gè)月動(dòng)態(tài)觀察黑素細(xì)胞恢復(fù)狀況。結(jié)果 20例白癜風(fēng)患者中，28塊皮損進(jìn)行了自體表皮移植，臨床總成活率為96.43%，移植后CLSM成像顯示黑素細(xì)胞完全恢復(fù)率為82.14%。結(jié)論 CLSM檢測(cè)可作為白癜風(fēng)自體表皮移植治療適應(yīng)證的選擇方法，也可作為移植治療后連續(xù)動(dòng)態(tài)觀察黑素細(xì)胞恢復(fù)狀況的可靠手段。

共聚焦激光掃描顯微鏡；白癜風(fēng)；表皮移植；黑素細(xì)胞

白癜風(fēng)是一種常見的皮膚色素脫失性疾病，其基本病理變化表現(xiàn)為皮損部位黑素細(xì)胞數(shù)目的減少或者消失，傳統(tǒng)的口服、外用藥物和外科的自體表皮移植是常用的治療方法。然而，對(duì)于外科自體表皮移植適應(yīng)證的選擇以及移植治療后的效果觀察，目前臨床上尚無客觀的影像學(xué)依據(jù)。共聚焦激光掃描顯微鏡(confocal laser scanning microscopy,CLSM)是一項(xiàng)新的無創(chuàng)性皮膚影像技術(shù)，具有在體、實(shí)時(shí)、動(dòng)態(tài)三維計(jì)算機(jī)斷層成像的特點(diǎn)[1]。筆者將這一技術(shù)應(yīng)用于白癜風(fēng)自體表皮移前適應(yīng)證的選擇和移植后的黑素變化的觀察，現(xiàn)總結(jié)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選擇2011年4～6月就診于解放軍空軍總醫(yī)院和北京方舟白癜風(fēng)醫(yī)院門診的白癜風(fēng)患者共387例，按照自體表皮移植治療的納入標(biāo)準(zhǔn)，選擇有適應(yīng)證的患者20例(5.17%)，其中男性12例，女性8例，年齡15～35歲，平均22.30歲；病程1～18年，平均4.58年。共選擇自體表皮移植皮損28塊，其中面部16塊，頸部4塊，上胸及背部3塊，四肢5塊；皮損移植最大面積為7 cm×3 cm，最小移植面積為1 cm×2 cm。

自體表皮移植治療白癜風(fēng)適應(yīng)證的納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)穩(wěn)定期、小面積的白癜風(fēng)皮損，并且經(jīng)其他傳統(tǒng)方法治療無明顯療效；(2)Wood燈陽性；(3)CLSM檢查示皮損處基底層及真皮乳頭周圍的黑素分布完全消失。

1.2 主要設(shè)備 共聚焦激光掃描顯微鏡(Vivascope 1500型，美國(guó)Lucid 公司)，光源波長(zhǎng)為830 nm的激光束，輸出功率1.0～4.5 mJ/cm2，橫向分辨率2 μm(XY水平方向)，軸向分辨率1.6 μm(Z軸方向)，掃描深度為120 μm以內(nèi)的表皮層及真皮淺層組織。

1.3 治療方法 按文獻(xiàn)[2]的方法進(jìn)行自體表皮移植，移植后7 d常規(guī)換藥。此后定期隨訪觀察療效情況。

1.4 檢測(cè)方法 按照CLSM的常規(guī)檢測(cè)方法，對(duì)28塊移植靶皮損移植前和移植后1、3、6個(gè)月進(jìn)行CLSM檢測(cè)和圖像的采集，觀察黑素顆粒的成像情況及亮度變化，圖像保存于計(jì)算機(jī)中便于自身前后對(duì)比分析。

1.5 療效評(píng)價(jià)

1.5.1 臨床評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 顯效：移植的白斑區(qū)出現(xiàn)色素時(shí)間≤2 w，色素逐漸變深且有擴(kuò)大趨勢(shì)；有效：白斑區(qū)出現(xiàn)色素>2 w，且色素較淺；無效：白斑區(qū)未見色素出現(xiàn)或表皮移植未存活。

1.5.2 CLSM評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 完全恢復(fù)：移植后的白斑區(qū)出現(xiàn)皮膚復(fù)色與CLSM檢測(cè)出現(xiàn)皮下黑素環(huán)及亮度一致，且黑素環(huán)恢復(fù)良好；部分恢復(fù)：移植后的白斑區(qū)出現(xiàn)復(fù)色與CLSM檢測(cè)出現(xiàn)皮下黑素環(huán)及亮度基本一致，但恢復(fù)一般；無變化：移植后的白斑區(qū)未出現(xiàn)復(fù)色，CLSM檢測(cè)也未出現(xiàn)皮下黑素。

2 結(jié)果

2.1 自體表皮移植結(jié)果 進(jìn)行自體表皮移植的28塊皮損中，臨床顯效25塊(89.29%)，有效2塊(7.14%)，無效1塊(3.57%)，總有效率為96.43%。在整個(gè)過程中，除部分患者供皮區(qū)可見少許色素沉著外，均無疤痕形成和同形反應(yīng)。移植治療前后的效果見圖1。

圖1 胸部白斑皮損3年患者自體表皮移植治療前后比較

2.2 CLSM檢測(cè)結(jié)果 移植前檢測(cè)皮損區(qū)域內(nèi)基底層及真皮乳頭周圍明亮的“圓形”或“橢圓形”的黑素帽完全消失(圖2)。自體表皮移植成活后，隨著復(fù)色的出現(xiàn)，CLSM觀察可見皮膚色素含量逐漸增多，黑素細(xì)胞樹突交叉增多，逐漸形成完整的色素環(huán)，黑色素顆粒環(huán)逐漸變亮(圖3)。本組28塊皮損中，完全恢復(fù)23塊(82.14%)，部分恢復(fù)4塊(14.29%)，無變化1塊(3.57%)。

圖2 自體表皮移植前CLSM檢測(cè)結(jié)果

白癜風(fēng)表皮移植治療前，皮損處棘細(xì)胞層下部黑素密度及亮度不同程度減少或消失

圖3 自體表皮移植后不同時(shí)間CLSM檢測(cè)結(jié)果

A：移植后2個(gè)月，皮膚和基底層逐步出現(xiàn)色素環(huán)；B：移植后3個(gè)月，皮膚棘細(xì)胞層下部和基底層色素環(huán)進(jìn)一步融合增大，呈明亮的“圓形”或“橢圓形”

3 討論

白癜風(fēng)是一種常見的色素脫失性皮膚病，國(guó)內(nèi)外的研究表明，穩(wěn)定期白癜風(fēng)的病理變化是由黑素細(xì)胞功能的失活到調(diào)亡過程，晚期因黑素細(xì)胞調(diào)亡而采用自體表皮移植是一種有效的治療方法[3]。然而，既往對(duì)于白癜風(fēng)移植手術(shù)適應(yīng)證的選擇尚無一種理想的方法，主要通過臨床經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行判斷確定治療方式；而組織病理檢查有創(chuàng)傷性，同時(shí)存在過程復(fù)雜、耗時(shí)較長(zhǎng)、不能連續(xù)觀察等局限性；皮膚鏡只是在放大的狀況下觀察皮膚的表面結(jié)構(gòu)，也觀察不到皮下黑素細(xì)胞的狀況。CLSM作為一種先進(jìn)的細(xì)胞生物分析儀器[4]，能觀察到皮膚全層細(xì)胞結(jié)構(gòu)。由于皮膚中的黑素細(xì)胞含黑色素高，可呈現(xiàn)出折射率較高的明亮輪廓，與遮光率相對(duì)較低的角質(zhì)形成細(xì)胞背景，易于辨認(rèn)和觀察，通常會(huì)在真皮乳頭上部或周圍聚集，形成特征性的“帽狀”或“花環(huán)狀”結(jié)構(gòu)[5]。由于白癜風(fēng)晚期黑素細(xì)胞調(diào)亡，CLSM檢測(cè)可見皮損基底層及真皮乳頭周圍的黑素分布完全消失，因此該檢測(cè)方法可作為白癜風(fēng)患者選擇自體表皮移植治療的重要依據(jù)之一。

在移植后的復(fù)色過程中，隨著移植后黑素細(xì)胞的存活，樹突分裂增多，樹突交叉增多，逐漸形成完整的色素環(huán)，色素含量逐漸增多，黑色素顆粒環(huán)逐漸變亮，與臨床復(fù)色一致。因此，CLSM對(duì)皮膚黑素細(xì)胞的檢測(cè)較目前現(xiàn)有的檢測(cè)方法具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)[6]，可在自體表皮移植治療白癜風(fēng)后，連續(xù)動(dòng)態(tài)觀察黑素細(xì)胞恢復(fù)狀況，值得在臨床上推廣應(yīng)用。

[1] 王婷，后桂榮，張寧，等.基于激光共聚焦顯微鏡圖像的黑色素瘤計(jì)算機(jī)輔助診斷算法研究[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)影像學(xué)雜志,2013,21(2):130-133.

[2] 董秀芹,劉濤,王紅燕，等.白癜風(fēng)自體表皮移植改良方法的臨床研究[J].中國(guó)美容醫(yī)學(xué),2012,211(11):23-24.

[3] 趙辨.臨床皮膚病學(xué)[M].4版.南京：江蘇科技出版社，2010：1268-1274.

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[5] 李彥希，黎智，陶軼妮.激光共聚焦掃描顯微鏡在皮膚科的應(yīng)用進(jìn)展及評(píng)價(jià)[J].重慶醫(yī)學(xué),2013,42(16):1904-1906.

[6] 李泓馨,張選棉,高天文.“皮膚CT”——皮膚病診斷的新手段[J].中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志,2007,21(7):432-434.

Application of CLSM to observesion of curative effect of autologous epidermal grafting on vitiligo

Luo Wei1,Ma Chunlin2,Lü Junqing2,Cai Ruikang1

1.Department of Dermatology,Air Force General Hospital of PLA,Beijing,100142,China;2.Fangzhou Vitiligo Hospital,Beijing,100022,China

Objective To observe the changes of melanocytes in vitiligo after autologou epidermal grafting under confocal laser scanning microscope(CLSM).Methods CLSM was applied to detect the skin lesions of vitiligo;the lesions without melanocytes under CLSM were selected for autologou epidermal grafting and dynamic observation under CLSM was made for the changes of melanocytes 1,3 and 6 months after grafting.Results 28 lesions in 20 cases with vitiligo were performed autologou epidermal grafting;the total clinical survival rate was 96.43%;the full recovery of melanocytes on CLSM imaging after grafting reached 82.14%.Conclusions CLSM detection can help the indication selection of autologous epidermal grafting for vitiligo and it is a reliable method of dynamic observation of melanocyte recovery after grafting.

confocal laser scanning microscope(CLSM)；vitiligo；epidermal grafting；melanocyte

100142 北京，解放軍空軍總醫(yī)院皮膚科(羅 衛(wèi)，蔡瑞康)；北京方舟白癜風(fēng)醫(yī)院(馬春林，呂俊卿)

R 758.41

A

1004-0188(2014)05-0513-03

10.3969/j.issn.1004-0188.2014.05.019

2014-03-17)