王婷，李麗，夏春，武燕，李建兵，程莎

（1.青島市計(jì)量測(cè)試所，山東青島 266101 ； 2.青島市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，山東青島 266061）

高效液相色譜儀蒸發(fā)光散射檢測(cè)器兩種校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的比較選擇

王婷1，李麗1，夏春1，武燕1，李建兵2，程莎2

（1.青島市計(jì)量測(cè)試所，山東青島 266101 ； 2.青島市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，山東青島 266061）

對(duì)高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)乙酰氨基酚 - 甲醇溶液和咖啡因 - 甲醇溶液進(jìn)行了比較選擇。與對(duì)乙酰氨基酚相比，咖啡因的缺點(diǎn)是色譜峰對(duì)稱(chēng)性稍差，優(yōu)點(diǎn)是沒(méi)有雜質(zhì)峰，更重要的是咖啡因已經(jīng)研制出國(guó)家二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，可以很好地溯源，所以咖啡因更適合作 ELSD 的校準(zhǔn)物質(zhì)。

高效液相色譜儀；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；咖啡因；對(duì) 乙酰氨基酚

高靈敏度、性能穩(wěn)定的通用型檢測(cè)器的缺乏，在一定程度上制約了高效液相色譜（HPLC）法的應(yīng)用［1］。液相色譜儀-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ESLD）是20世紀(jì)90年代開(kāi)始應(yīng)用的一種質(zhì)量檢測(cè)器，對(duì)高效液相色譜儀傳統(tǒng)的檢測(cè)器是一個(gè)很好的補(bǔ)充。沒(méi)有紫外吸收的化合物如皂苷、內(nèi)酯、糖類(lèi)等化合物在 ELSD 上會(huì)有響應(yīng)，而且色譜峰穩(wěn)定性好，靈敏度高，可進(jìn)行梯度洗脫分析。因而以ELSD 檢測(cè)的液相色譜法在我國(guó)中藥、食品等檢測(cè)領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用［2］。

2002 年實(shí)施的國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程JJG705-2002《液相色譜儀》［3］列出了紫外、二極管陣列、熒光和示差折光4種檢測(cè)器的檢定方法。由于ELSD出現(xiàn)較晚，在2002版的規(guī)程中并沒(méi)有列出，對(duì)ELSD檢測(cè)器的溯源管理還處于真空狀態(tài)。2005 年中國(guó)藥典列出了必須使用ELSD檢測(cè)的26種藥品如黃芪、銀杏葉片、地膚子、知母、浙貝母、硫酸卡那霉素等［4］，ELSD的應(yīng)用范圍隨之?dāng)U大。在現(xiàn)階段，用戶(hù)一般使用廠家自帶的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行校準(zhǔn)溯源，校準(zhǔn)物質(zhì)和校準(zhǔn)方法不盡相同。

國(guó)內(nèi)外幾家較大的公司校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)主要有對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、膽固醇、蔗糖和葡萄糖。何海紅［5］等對(duì)對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、膽固醇3種化合物進(jìn)行了討論，認(rèn)為膽固醇和咖啡因作為檢定用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)較好。孟潔［6］等對(duì)三氯蔗糖和葡萄糖進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)三氯蔗糖相對(duì)于葡萄糖較為穩(wěn)定，更適于用作校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。王婷［7］等對(duì)用蔗糖和對(duì)乙酰氨基酚作為校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行了討論，得出了蔗糖響應(yīng)較低、對(duì)稱(chēng)性較差，對(duì)乙酰氨基酚溶液作為校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)更適合的結(jié)論。

筆者根據(jù)國(guó)內(nèi)外相關(guān)技術(shù)文獻(xiàn)和前期研究的結(jié)論，篩選出兩種較優(yōu)校準(zhǔn)物質(zhì)咖啡因和對(duì)乙酰氨基酚，對(duì)其進(jìn)行了進(jìn)一步比較。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：LC-3000B 型，配 UM-5000型 ELSD（上海通微儀器有限公司），安徽晥儀科技有限公司；

咖啡因標(biāo)準(zhǔn)品（C8H10O2N4）：GBW(E) 100063，純度為 99.8%，U=0.2%，中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院；

對(duì)乙酰氨基酚標(biāo)準(zhǔn)品（C8H9NO2）：純度不小于99.0%，美國(guó) Sigma 公司；

甲醇：色譜純，美國(guó) Sigma 公司。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

分別精確稱(chēng)取 25 mg 咖啡因、對(duì)乙酰氨基酚于250 mL 容量瓶中，加入甲醇溶解并定容至標(biāo)線，超聲混勻，得質(zhì)量濃度為 1.0×10-4g／mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3 ELSD 的檢測(cè)原理

首先將洗脫液霧化形成氣溶膠，然后在加熱的漂移管中將溶劑蒸發(fā)，余下的不揮發(fā)性溶質(zhì)顆粒在光散射檢測(cè)池中檢測(cè)。

1.4 色譜條件

咖啡因和對(duì)乙酰氨基酚對(duì)應(yīng)的最佳色譜條件見(jiàn)表1。

表1 色譜條件

2 結(jié)果與討論

2.1 ELSD 校準(zhǔn)用物質(zhì)的選擇

對(duì)前期篩選出的兩種較優(yōu)的校準(zhǔn)物質(zhì)咖啡因和對(duì)乙酰氨基酚，根據(jù)其色譜特性進(jìn)行比較。

2.2 色譜條件的選擇

漂移管溫度和流動(dòng)相流速是影響 ELSD 響應(yīng)值的重要參數(shù)，因此設(shè)計(jì)各項(xiàng)變化條件并反復(fù)試驗(yàn)，最終選擇出這兩種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件?？Х纫蚝蛯?duì)乙酰氨基酚兩種校準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)應(yīng)的色譜條件試驗(yàn)范圍見(jiàn)表2。

表2 兩種校準(zhǔn)物質(zhì)實(shí)驗(yàn)條件

根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果確定 1.4 色譜條件。在表2 中的實(shí)驗(yàn)條件下，咖啡因在漂移管溫度 20～40℃的變化過(guò)程中，響應(yīng)值變化了 63 ；而對(duì)乙酰氨基酚在同樣的溫度變化范圍下，響應(yīng)值變化了 132。這說(shuō)明對(duì)乙酰氨基酚對(duì)漂移管的溫度變化反應(yīng)更為敏感，不如咖啡因穩(wěn)定。

2.3 保留時(shí)間和峰面積的測(cè)定

在 1.4 色譜條件下，分別對(duì) 1.0×10-4g／mL 的咖啡因-甲醇溶液和對(duì)乙酰氨基酚-甲醇溶液進(jìn)行分析，色譜圖分別見(jiàn)圖1、圖2，保留時(shí)間、峰面積及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差列于表3。

圖1 咖啡因-甲醇溶液色譜圖

圖2 對(duì)乙酰氨基酚 -甲醇溶液色譜

表3 兩種校準(zhǔn)物質(zhì)色譜測(cè)定結(jié)果

JJG 705-2002 “3.4 整機(jī)性能”要求定性測(cè)量重復(fù)性（n=6）不大于 1.5%，定量測(cè)量重復(fù)性（n=6）不大于 3.0%。從圖1、圖2 可以看出，咖啡因色譜峰對(duì)稱(chēng)性比對(duì)乙酰氨基酚的對(duì)稱(chēng)性稍差一些，但對(duì)乙酰氨基酚在 2 min 左右有一個(gè)雜峰，與對(duì)乙酰氨基酚的出峰時(shí)間較為接近，咖啡因使用的是國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，純度較高，沒(méi)有雜質(zhì)峰影響。由表3數(shù)據(jù)可知，咖啡因的保留時(shí)間重復(fù)性?xún)?yōu)于對(duì)乙酰氨基酚，而后者峰面積的重復(fù)性?xún)?yōu)于前者。若參照 JJG 705-2002檢定規(guī)程，兩者均符合規(guī)定。但咖啡因已有市售國(guó)家二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，純度很好，為選擇咖啡因作為檢定校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)提供了重要依據(jù)。

3 結(jié)論

作為 ESLD 校準(zhǔn)物質(zhì)，咖啡因的缺點(diǎn)是色譜峰對(duì)稱(chēng)性稍差，優(yōu)點(diǎn)是沒(méi)有雜質(zhì)峰，而保留時(shí)間和峰面積的重復(fù)性與對(duì)乙酰氨基酚一樣，均符合規(guī)程規(guī)定的要求。對(duì)乙酰氨基酚受漂移管的溫度變化響應(yīng)值變化較大，不如咖啡因穩(wěn)定。另外，咖啡因已有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) GBW(E) 100063，純度較高，在法制計(jì)量層面已經(jīng)是計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)的一部分，而對(duì)乙酰氨基酚只是較純的化學(xué)試劑。因此咖啡因更適于作為 ESLD檢定校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

［1］ Brown P R. High-Performance Liquid Chromatography Past Developments，Present Status，and Future Trends［J］. Anal Chem，1990，62(19): 995A-1008A.

［2］ 陽(yáng)金勇 .液相色譜用 ELSD 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器簡(jiǎn)介與校準(zhǔn)方法研究［J］.科教視野，2007，25: 324-325.

［3］ JJG 705-2002 液相色譜儀檢定規(guī)程［S］.

［4］ 國(guó)家藥典委員會(huì) .中華人民共和國(guó)藥典［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005.

［5］ 何海紅 .高效液相色譜用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢定方法研究［J］.化學(xué)分析計(jì)量，2010，19(2): 78-80.

［6］ 孟潔，孔小平，許建軍，等 .校準(zhǔn)蒸發(fā)光散射檢測(cè)器選用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的比較與分析［J］.化學(xué)分析計(jì)量，2010，19(4): 9-10.

［7］ 王婷，夏春，李麗，等 .高效液相色譜儀蒸發(fā)光散射檢測(cè)器校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的選擇［J］.化學(xué)分析計(jì)量，2014，23(1): 11-3.

Comparison of Two Kinds of Reference Materials on the Evaporative Scattering Detector for High Performance Liquid Chromatography

Wang Ting1, Li Li1, Xia Chun1, Wu Yan1, Li Jianbing2, Cheng Sha2
(1. Qingdao Institute of Measurement and Testing, Qingdao 266101, China; 2. Qingdao Supervision and Testing Center of Product Quality, Qingdao 266061, China)

The evaporative light scattering detector (ELSD) was tested by caffeine solution and acetaminophen methanol solution. Caffeine had no impurity peak compared with acetaminophen, but the symmetry of the peak was poorer. Caffeine was more suitable to be the reference material as the secondary reference material of caffeine had been developed and had a good traceability.

high performance liquid chromatography; evaporative light scattering detector; caffeine; acetaminophen

O657.7

A

1008-6145(2014)05-0009-03

聯(lián)系人：王婷；E-mail: 249295196@qq.com

2014-06-23

10.3969／j.issn.1008-6145.2014.05.004