朱紅玲，張 華，徐衛(wèi)鴻

宮頸鱗癌survivin和caspase-3的表達(dá)及其相關(guān)性

朱紅玲1，張 華2，徐衛(wèi)鴻2

目的 研究survivin蛋白和caspase-3蛋白在宮頸鱗癌組織中的表達(dá)及其相關(guān)性。方法 收集宮頸鱗癌標(biāo)本50例，宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變(cervical intraepithelial neoplasia ，CIN)20例，正常宮頸標(biāo)本14例。應(yīng)用免疫組化法檢測survivin蛋白和caspase-3蛋白在上述三種宮頸組織中的表達(dá)。結(jié)果 survivin 、caspase-3蛋白在正常宮頸組織、CIN、宮頸鱗癌三種不同宮頸組織的表達(dá)中有明顯差異(P<0.05)。survivin在臨床分期晚，病理分級高的宮頸鱗癌中表達(dá)增強(qiáng)；但caspase-3的表達(dá)越弱(P<0.05) 。survivin、caspase-3蛋白在宮頸鱗癌中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論 (1)survivin的陽性表達(dá)可作為宮頸惡變的預(yù)測指標(biāo)；(2)survivin強(qiáng)陽性表達(dá)結(jié)合caspase-3的弱表達(dá)，對預(yù)測宮頸鱗癌的不良預(yù)后有一定的意義

Survivin 蛋白； caspase-3蛋白；宮頸癌；免疫組化；細(xì)胞凋亡

survivin是凋亡抑制蛋白家族(IAPs)新近發(fā)現(xiàn)的一個成員， 1997年耶魯大學(xué)的Altieri等[1]發(fā)現(xiàn)，在多種惡性腫瘤組織中survivin呈異常高表達(dá)，并可通過直接與Caspase家族，特別是Caspase-3和-7結(jié)合發(fā)揮其抗凋亡的作用。本研究采用免疫組織化學(xué)法(S-P法)檢測survivin蛋白、 caspase-3蛋白在3種不同宮頸組織中的表達(dá)并結(jié)合臨床病理特征進(jìn)行分析，旨在探討survivin在宮頸鱗癌發(fā)生發(fā)展中的作用，以及與caspase-3表達(dá)的相關(guān)性及其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 材料 收集我院婦科2009-01至2012-05手術(shù)切除后未經(jīng)放、化療的宮頸鱗癌石蠟標(biāo)本(宮頸鱗癌組)50例(除外Ⅱb期術(shù)前行1～2次新輔助化療)，年齡為28～69歲，平均50.2歲，病理分級:G1級15例，G2級14例，G321例。臨床分期Ⅰ期23例，Ⅱa期11例，Ⅱb期16例(患者年齡輕保留卵巢，術(shù)前行新輔助化療1～2次)。腫瘤生長類型：菜花型23例，結(jié)節(jié)型22例，潰瘍型5例。CIN(CIN組)20例(來源于宮頸活檢或LEEP手術(shù)標(biāo)本)，年齡29～57歲，平均年齡45.6歲，其中，CIN Ⅰ 6例，CIN Ⅱ 9例，CIN Ⅲ 5例。正常宮頸標(biāo)本(正常組)14例，年齡31～66歲，平均51.4歲。病理診斷符合《婦產(chǎn)科病理學(xué)》的宮頸癌的分級診斷標(biāo)準(zhǔn)。臨床分期均按2009年修訂的國際婦產(chǎn)科聯(lián)合會(FIGO)的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 試劑和方法 采用survivin兔抗人多克隆抗體0.1 ml濃縮液(RB-1629)(Neomarker公司產(chǎn)品)，caspase-3兔抗人多克隆抗體0.1 ml濃縮液(RB-1197)(Neomarker公司產(chǎn)品)，SP試劑盒(天津津脈生物技術(shù)開發(fā)公司)。采用免疫組織化學(xué)鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶染色法(SP免疫組化法)對3組標(biāo)本進(jìn)行處理。

1.3 結(jié)果判定 采用Sinicrope[2]改良法記錄各級切片中染色細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)，染色細(xì)胞計數(shù)所占比例至少在5個400倍視野，分為5級。0分:染色細(xì)胞<5%； 1分:染色細(xì)胞5%～25%；2分:染色細(xì)胞25%～50%；3分:染色細(xì)胞50%～75%；4分:染色細(xì)胞>75%。染色強(qiáng)度分為4級。0分:不顯色；1分:淺黃色；2分:棕黃色；3分:深棕色。每份切片記分=染色細(xì)胞數(shù)分?jǐn)?shù)×染色強(qiáng)度分?jǐn)?shù)。所得分?jǐn)?shù)0和1分為陰性結(jié)果，2和3分為弱陽性(+)，4分為中度陽性(++)，>5分為強(qiáng)陽性(+++)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS11. 0統(tǒng)計軟件包處理，各項指標(biāo)間差別檢驗均應(yīng)用χ2檢驗，組間相關(guān)性采用spearman相關(guān)分析。 以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

表1 survivin蛋白和caspase-3蛋白在宮頸 疾病中的陽性表達(dá) (n;%)

注：與CIN組比較，①P<0.05；與宮頸鱗癌組比較，②P<0.05

2.2 survivin、caspase-3蛋白表達(dá)與宮頸鱗癌患者臨床病理特征的關(guān)系 survivin蛋白在菜花型、結(jié)節(jié)型、潰瘍型等腫瘤生長類型中陽性表達(dá)率差異無統(tǒng)計學(xué)意義；survivin蛋白在臨床分期Ⅰ期、Ⅱa期、Ⅱb期三期中陽性表達(dá)率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；survivin蛋白在病理分級G3級中陽性表達(dá)率高于G1+G2宮頸鱗癌(P<0.05)。見表2。

caspase-3蛋白在菜花型、結(jié)節(jié)型、潰瘍型等腫瘤生長類型中陽性表達(dá)率差異無統(tǒng)計學(xué)意義；在臨床分期Ⅰ期、Ⅱa期、Ⅱb期三期中陽性表達(dá)率差異也無統(tǒng)計學(xué)意義；但caspase-3蛋白在病理分級G1+G2和G3級中陽性表達(dá)率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，結(jié)果見表2。

表2 survivin蛋白和caspase-3蛋白表達(dá)與宮頸鱗癌患者 臨床病理特征的關(guān)系

注：與Ⅱb期比較，①P<0.05；與Ⅱa期比較，②P<0.05

2.3 survivin蛋白和caspase-3蛋白在宮頸鱗癌組織中表達(dá)的相關(guān)性 宮頸鱗癌組織中survivin蛋白表達(dá)與caspase-3蛋白表達(dá)有顯著相關(guān)性，21例caspase-3蛋白陽性表達(dá)標(biāo)本中有10例survivin蛋白呈陽性，占47.6%；29例caspase-3蛋白陰性表達(dá)標(biāo)本中24例survivin蛋白呈陽性表達(dá)，占82.8%。經(jīng)相關(guān)分析，兩種蛋白表達(dá)之間成負(fù)相關(guān)(Spearman相關(guān)系數(shù)r=-0.372，P<0.05)。

3 討 論

Michael等[3]發(fā)現(xiàn)，survivin在正常宮頸上皮組織、CIN中均有胞核染色，在不成熟的鱗狀化生及鱗狀上皮癌中則可見到胞漿染色，因而認(rèn)為survivin在正常的宮頸上皮分化中起著重要作用。Kim等[4]運(yùn)用反轉(zhuǎn)錄PCR (RT-PCR)技術(shù)，發(fā)現(xiàn)survivin的表達(dá)陽性率隨著宮頸腫瘤的進(jìn)展，從低度鱗狀上皮內(nèi)瘤樣病變(LSIL)、高度鱗狀上皮內(nèi)瘤樣病變(HSIL)及SCC中逐漸升高。本研究有同樣的結(jié)果，survivin的表達(dá)與宮頸CIN和鱗狀細(xì)胞癌有著密切的關(guān)系，臨床上可以檢測宮頸CIN組織的survivin蛋白表達(dá)，對預(yù)測宮頸CIN轉(zhuǎn)變?yōu)閷m頸鱗癌提供一定的參考依據(jù)。

于娟等[5]發(fā)現(xiàn)，在宮頸癌中survivin的表達(dá)與宮頸癌的組織學(xué)分級、浸潤深度、臨床分期呈顯著相關(guān)，與年齡、分化程度及組織類型均無關(guān)。朱華等[6]采用原位雜交法同樣顯示survivin mRNA的陽性率在宮頸癌的組織分化程度中,低分化組的表達(dá)高于高、中分化組,ⅡB～Ⅲ期顯著高于I～ⅡA期;在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。盧洪勝等[7]的研究結(jié)果也支持Survivin表達(dá)在子宮頸癌的FIGO分期、間質(zhì)浸潤深度及淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移中表達(dá)的差異有統(tǒng)計學(xué)意義。本研究也有類似的發(fā)現(xiàn)，筆者推測survivin參與宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展，與其預(yù)后不良密切相關(guān)，是一個具有潛在價值的腫瘤標(biāo)志物，survivin蛋白的高表達(dá)預(yù)示腫瘤有較高的侵襲性。

本研究探討了survivin與caspase-3在正常宮頸、CIN和宮頸鱗癌中表達(dá)及其相關(guān)性。survivin隨腫瘤的發(fā)生發(fā)展表達(dá)增強(qiáng)，caspase-3隨腫瘤的發(fā)生發(fā)展表達(dá)降低，并且survivin與caspase-3在宮頸鱗癌中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性。這與劉秀蘭等[8]的研究結(jié)果相似，提示survivin在宮頸惡性腫瘤中表達(dá)可能抑制caspase-3的表達(dá)，說明在宮頸鱗癌惡性轉(zhuǎn)化過程中抗凋亡蛋白作用增強(qiáng)，抑制了凋亡蛋白的作用，使細(xì)胞凋亡，對腫瘤的形成和發(fā)展起一定作用。這為腫瘤靶向治療提供了一個新的思路。那么survivin和caspase-3在CIN各級之間的表達(dá)有無差異，以及在巨塊型宮頸鱗癌中表達(dá)情況，筆者將增加標(biāo)本量，進(jìn)一步深入研究，為將來發(fā)現(xiàn)宮頸癌早期診斷指標(biāo)和預(yù)后監(jiān)測指標(biāo)提供理論依據(jù)。

宮頸鱗癌病因復(fù)雜，涉及HPV病毒、癌基因、宿主細(xì)胞抑癌基因等多個基因、多條通路的多步驟事件。近年來，癌基因治療成為研究熱點(diǎn)之一[9]，如李元宏等[10]一系列研究證實了survivin促進(jìn)凋亡、抑制腫瘤的功能，為survivin基因用于宮頸鱗癌基因治療提供了依據(jù)。survivin作為一種新的具有腫瘤特異性的凋亡抑制基因，其抑制細(xì)胞凋亡的功能在腫瘤發(fā)病機(jī)制中的作用及作為腫瘤診斷的標(biāo)記物已經(jīng)備受矚目。survivin將可能成為腫瘤基因治療的理想靶基因，為腫瘤的治療提供新的途徑。

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(2013-10-09收稿 2013-12-20修回)

(責(zé)任編輯 郭 青)

Expression and correlation of survivin and caspase-3 in cervical squamous cell carcinoma

ZHU Hongling1, ZHANG Hua2, and XU Weihong2.

1.Department of Obstretrics and Gynecology, Shanghai Municipal Corps Hospital of Chinese People’s Armed Police Forces, Shanghai 201103，China; 2.Section of Economic Management, The General Hospital of Chinese People’s Armed Police Forces, Beijing 100039, China

Objective To study the expression of a novel inhibitor gene of apoptosis survivin in cervical carcinoma and its association with the expression of caspase-3 protein. Methods Cervical squamous cell carcinoma specimens of 50 cases, CIN (cervical intraepithelial neoplasia) in 20 cases, and normal cervical specimens of 14 cases were collected. Immunohistochemistry was used to detect the expression of survivin protein and caspase-3 protein in the above three cervical tissues. Results 1.The positive expression rates of survivin and caspase-3 were significantly different in different cervical tissues(P<0.05). 2.The positive expression of survivin was associated with high tumor grade and clinical stage (P<0.05). The positive expression of caspase-3 was only associated with tumor grade (P<0.05).3.The expression of survivin was negatively correlated to the expression of caspase-3 protein in cervix cancer. (P<0.05). Conclusions 1. The positive expression of survivin as a predictor of cervical carcinogenesis. 2. Strong posivive expression of survivin expression combined with weak expression of caspase-3, predicts poor prognosis of cervical squamous cell carcinoma.

survivin protein ;caspase-3 protein ;cervical carcinoma; immunohistochemistry; cell apoptosis

朱紅玲，碩士，主治醫(yī)師，E-mail：zhuhongling517@sina.com

1.201103,武警上?？傟犪t(yī)院12病區(qū)婦科；2.100039北京，武警總醫(yī)院醫(yī)療科

徐衛(wèi)鴻，E-mail: xuweihong1226@sina.com

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