于曉萍+姜業(yè)朝+拜鈺

摘要：為了建立對種子處理粉劑中吡蟲啉、甲霜靈和福美雙含量的高效液相色譜快速分析方法，使用配備了瑞典Kromasil 100-5-C18不銹鋼色譜柱的美國Angilent 1260高效液相色譜儀，利用高效液相色譜法測定種子處理粉劑中吡蟲啉、甲霜靈和福美雙的含量，以甲醇-水溶液為流動相，采用梯度洗脫；流速控制在1.0 mL/min；柱溫：室溫；213 nm 的檢測波長；進樣體積20 μL。結(jié)果表明，在10～500 mg/L的范圍內(nèi)，吡蟲啉、甲霜靈和福美雙線性關(guān)系良好，平均回收率為100.18%、99.97%和99.94%，吡蟲啉的相對標準偏差為0.0613%，甲霜靈的相對標準偏差為0.045 1%，福美雙的相對標準偏差為0.051 5%。此方法可快速測定種子處理粉劑中吡蟲啉、甲霜靈和福美雙的含量，具有方法新穎、快速、簡便、準確、精密度好等優(yōu)點。

關(guān)鍵詞：種子處理粉劑；吡蟲啉；甲霜靈；福美雙；高效液相色譜法；快速

中圖分類號： O657.7+2文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2014）02-0255-03

收稿日期：2013-09-25

基金項目：2013年江蘇省高等職業(yè)院校國內(nèi)高級訪問學(xué)者計劃（編號：FX001）；江蘇省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃（編號：201313754002Y）。

作者簡介：于曉萍（1970—），女，江蘇揚州人，副教授，研究方向為有機合成、儀器分析。E-mail：jsyzyuxp@163.com。吡蟲啉（imidacloprid，CAS：105827-78-9；138261-41-3），是煙堿類超高效殺蟲劑，由德國拜耳公司和日本特殊農(nóng)藥株式會社共同開發(fā)。甲霜靈（英文名稱：metalaxyl，CAS：57837-19-1）是瑞士汽巴-嘉基公司1977年開發(fā)出的一種防治藻菌綱病害的新型、高效、低毒、內(nèi)吸性酰胺類殺菌劑[1]。福美雙（英文名稱：thiram，CAS：137-26-8）是一種廣譜、低毒、保護性有機硫殺菌劑[2]，20世紀60年代初天津市農(nóng)藥研究所開始生產(chǎn)、推廣使用福美雙，現(xiàn)已成為我國殺菌劑主要品種之一[3]。含有吡蟲啉、甲霜靈和福美雙的種子處理粉劑是農(nóng)藥公司新開發(fā)的集防病治蟲抗旱等功能于一體的新型種子處理粉劑。新型種子處理粉劑的推廣使用，帶來對其含量分析的要求，這關(guān)系到控制殺菌殺蟲效果、質(zhì)量、生產(chǎn)成本等方面的問題[4-5]。吡蟲啉目前的測定方法是以乙腈-水（體積比1 ∶3）為流動相的高效液相色譜法[6-7]和以甲醇-02%磷酸水溶液（體積比40 ∶60） 為流動相的高效液相色譜法[8-9]；甲霜靈目前的測定方法有氣相色譜法和高效液相色譜法[10-11]；福美雙有高效液相色譜分析方法的報道[12-13]。由于含有吡蟲啉、甲霜靈和福美雙的種子處理粉劑是新型種子處理粉劑，未有測定方法的報道。本方法以甲醇-水為流動相，在分離過程中設(shè)計合理的梯度洗脫過程，實現(xiàn)了高效液相色譜分析法同時測定種子處理粉劑中吡蟲啉、甲霜靈和福美雙的含量，具有方法新穎、快速、簡便、準確、精密度好等優(yōu)點。

1材料與方法

1.1儀器

采用配備了瑞典AKZO NOBEL公司Kromasil 100-5-C18不銹鋼色譜柱，150 mm×4.6 mm，具有可變波長紫外檢測器的Angilent 1260高效液相色譜儀；美國Angilent液相色譜工作站；20 μL的自動進樣器；孔徑為0.45 μm的過濾器；賽多利斯cp225D型十萬分之一電子分析天平。

1.2試劑

吡蟲啉標準對照品（98.6%，上海市農(nóng)藥研究所檢測中心）；甲霜靈標準對照品（99.2%，上海市農(nóng)藥研究所檢測中心）；福美雙標準對照品（98.3%，上海市農(nóng)藥研究所檢測中心）；甲醇：色譜純；新制二次蒸餾水；其余試劑均為分析純。

種子處理粉劑樣品（有效成分：含吡蟲啉、甲霜靈和福美雙均在10%左右）由江蘇糧滿倉農(nóng)化有限公司提供。

1.3色譜條件

流動相：甲醇-水溶液在不同時間的體積比為40 ∶60（0 min）、40 ∶60（5 min）、80 ∶20（15 min）、80 ∶20（25 min）、40 ∶60（平衡5 min）；流速控制在1.0 mL/min；柱溫：室溫（要求試驗過程中溫差變化小于2 ℃）；檢測波長：213 nm；進樣體積20 μL。在此條件下樣品與干擾物質(zhì)完全分離，吡蟲啉保留時間約為2.5 min，甲霜靈保留時間約為10.3 min，福美雙保留時間約為4.3 min，色譜圖見圖1、2、3。種子處理粉劑中吡蟲啉、甲霜靈和福美雙在此色譜條件下能夠完全分離，色譜圖見圖4。

1.4溶液的配制

1.4.1吡蟲啉、甲霜靈和福美雙標準混合溶液的制備稱取吡蟲啉、甲霜靈、福美雙各0.05 g（精確至0.000 02 g），依次放入 50 mL 容量瓶中，加入約40 mL流動相，用超聲波振蕩10 min使其溶解，取出冷卻至室溫后，加入流動相定容至刻度，搖勻備用，其中含吡蟲啉、甲霜靈和福美雙質(zhì)量濃度均為1 000.0 mg/L。

1.4.2試樣溶液的制備稱取相當于0.025 g吡蟲啉，或0025 g甲霜靈，或0.025 g福美雙（精確至0.000 02 g），放入25 mL容量瓶中，加入約20 mL流動相，用超聲波振蕩10 min使其溶解，取出冷卻至室溫后，加入流動相定容至刻度，搖勻備用。

2結(jié)果與分析

2.1檢測波長的確定

由于吡蟲啉、甲霜靈和福美雙在213 nm處均有較好的吸收，且雜質(zhì)干擾較少，經(jīng)過試驗可以得知，在此波長下同時檢測吡蟲啉、甲霜靈和福美雙3個樣品，3個樣品的檢測線性范圍、檢測精密度及回收率都可滿足要求，故選擇此波長處進行檢測。

2.2線性關(guān)系考察endprint

利用1 000.0 mg/L的吡蟲啉、甲霜靈和福美雙標準混合溶液，配制含吡蟲啉、甲霜靈和福美雙的質(zhì)量濃度由低到高依次均為10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、500.0 mg/L，依次吸取各質(zhì)量濃度溶液進樣，記錄色譜圖。以吡蟲啉、甲霜靈和福美雙標準品溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標作出對應(yīng)的關(guān)系曲線，吡蟲啉的線性回歸方程為y=36 030x-21198，相關(guān)系數(shù)r=0.999 99；甲霜靈的線性回歸方程為y=34 501x+40.576，相關(guān)系數(shù)r=0.999 96；福美雙的線性回歸方程為y=59 879x+14.923，相關(guān)系數(shù)r=1.000 00。由此可見：該方法對于吡蟲啉、甲霜靈和福美雙的含量在10～500 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3方法精密度、重現(xiàn)性試驗

在前述色譜操作條件下，分別對吡蟲啉、甲霜靈和福美雙的3批試樣進行5次平行測定，結(jié)果吡蟲啉含量的RSD為0061 3%，甲霜靈含量的RSD為0.045 1%，福美雙含量的RSD為0.051 5%（表1）。結(jié)果表明：在此條件下進行分析，標準偏差小，精密度高，而且重現(xiàn)性良好。

2.4方法的準確度試驗

精密稱取5份已知含量的樣品，分別精密加入吡蟲啉、甲霜靈和福美雙標準品，制成供試品溶液，進行測定，計算回收率，結(jié)果見表2。

3結(jié)論

參考文獻：

[1]Urrea K，Rupe J C，Rothrock C S. Effect of fungicide seed treatments，cultivars，and soils on soybean stand establishment[J]. Plant Disease，2013，97（6）：807-812.

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[3]Morales M，Moratinos H，Gonzalez T. Effect of fungicides on physiology and health characteristics of rice seeds during storage[J]. Revista de la Facultad de Agronomia de la Universidad del Zulia，2012，29（4）：505-524.

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[9]丑靖宇，李超，鞠光秀，等. 29%吡蟲啉·多菌靈·烯肟菌胺懸浮種衣劑的高效液相色譜分析[J]. 農(nóng)藥，2012，51（4）：275-277.

[10]譚維. 烯?！ぜ姿`30%可濕性粉劑的高效液相色譜分析方法[J]. 農(nóng)藥科學(xué)與管理，2010，31（1）：41-44.

[11]吳學(xué)宏，劉鵬飛，韋福金，等. 15%·霜·福懸浮種衣劑的高效液相色譜分析[J]. 農(nóng)藥，2007，46（2）：112-113.

[12]黃永忠，魏東，楊彩玲.15%福美雙·吡蟲啉·烯唑醇懸浮種衣劑的RP-HPLC分析[J]. 農(nóng)藥，2008，47（2）：114-115.

[13]董廣新，周良佳，杜薇. 40%啶菌唑·福美雙懸乳劑高效液相色譜分析[J]. 農(nóng)藥，2005，44（12）：551-552.endprint

利用1 000.0 mg/L的吡蟲啉、甲霜靈和福美雙標準混合溶液，配制含吡蟲啉、甲霜靈和福美雙的質(zhì)量濃度由低到高依次均為10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、500.0 mg/L，依次吸取各質(zhì)量濃度溶液進樣，記錄色譜圖。以吡蟲啉、甲霜靈和福美雙標準品溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標作出對應(yīng)的關(guān)系曲線，吡蟲啉的線性回歸方程為y=36 030x-21198，相關(guān)系數(shù)r=0.999 99；甲霜靈的線性回歸方程為y=34 501x+40.576，相關(guān)系數(shù)r=0.999 96；福美雙的線性回歸方程為y=59 879x+14.923，相關(guān)系數(shù)r=1.000 00。由此可見：該方法對于吡蟲啉、甲霜靈和福美雙的含量在10～500 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3方法精密度、重現(xiàn)性試驗

在前述色譜操作條件下，分別對吡蟲啉、甲霜靈和福美雙的3批試樣進行5次平行測定，結(jié)果吡蟲啉含量的RSD為0061 3%，甲霜靈含量的RSD為0.045 1%，福美雙含量的RSD為0.051 5%（表1）。結(jié)果表明：在此條件下進行分析，標準偏差小，精密度高，而且重現(xiàn)性良好。

2.4方法的準確度試驗

精密稱取5份已知含量的樣品，分別精密加入吡蟲啉、甲霜靈和福美雙標準品，制成供試品溶液，進行測定，計算回收率，結(jié)果見表2。

3結(jié)論

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[13]董廣新，周良佳，杜薇. 40%啶菌唑·福美雙懸乳劑高效液相色譜分析[J]. 農(nóng)藥，2005，44（12）：551-552.endprint

利用1 000.0 mg/L的吡蟲啉、甲霜靈和福美雙標準混合溶液，配制含吡蟲啉、甲霜靈和福美雙的質(zhì)量濃度由低到高依次均為10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、500.0 mg/L，依次吸取各質(zhì)量濃度溶液進樣，記錄色譜圖。以吡蟲啉、甲霜靈和福美雙標準品溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標作出對應(yīng)的關(guān)系曲線，吡蟲啉的線性回歸方程為y=36 030x-21198，相關(guān)系數(shù)r=0.999 99；甲霜靈的線性回歸方程為y=34 501x+40.576，相關(guān)系數(shù)r=0.999 96；福美雙的線性回歸方程為y=59 879x+14.923，相關(guān)系數(shù)r=1.000 00。由此可見：該方法對于吡蟲啉、甲霜靈和福美雙的含量在10～500 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3方法精密度、重現(xiàn)性試驗

在前述色譜操作條件下，分別對吡蟲啉、甲霜靈和福美雙的3批試樣進行5次平行測定，結(jié)果吡蟲啉含量的RSD為0061 3%，甲霜靈含量的RSD為0.045 1%，福美雙含量的RSD為0.051 5%（表1）。結(jié)果表明：在此條件下進行分析，標準偏差小，精密度高，而且重現(xiàn)性良好。

2.4方法的準確度試驗

精密稱取5份已知含量的樣品，分別精密加入吡蟲啉、甲霜靈和福美雙標準品，制成供試品溶液，進行測定，計算回收率，結(jié)果見表2。

3結(jié)論

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[10]譚維. 烯?！ぜ姿`30%可濕性粉劑的高效液相色譜分析方法[J]. 農(nóng)藥科學(xué)與管理，2010，31（1）：41-44.

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[12]黃永忠，魏東，楊彩玲.15%福美雙·吡蟲啉·烯唑醇懸浮種衣劑的RP-HPLC分析[J]. 農(nóng)藥，2008，47（2）：114-115.

[13]董廣新，周良佳，杜薇. 40%啶菌唑·福美雙懸乳劑高效液相色譜分析[J]. 農(nóng)藥，2005，44（12）：551-552.endprint