張芹+宋威+屈長(zhǎng)義

摘要：利用腹腔注射秋水仙素制備腎細(xì)胞染色體的方法，對(duì)伊河團(tuán)頭魴的染色體組型進(jìn)行研究。結(jié)果表明，其二倍體數(shù)目為2n=48，核型公式為2n=10m+30sm+8st，染色體總臂數(shù)為88。

關(guān)鍵詞：伊河團(tuán)頭魴；染色體；核型

中圖分類(lèi)號(hào)： S965.119.1；S917.4文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2014）02-0188-02

收稿日期：2013-05-29

基金項(xiàng)目：現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專(zhuān)項(xiàng)（編號(hào)：nycytx-49-34）；國(guó)家科技基礎(chǔ)條件平臺(tái)-水產(chǎn)種質(zhì)資源平臺(tái)項(xiàng)目；河南省重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目（編號(hào)：112102110054）。

作者簡(jiǎn)介：張芹（1980—），女，河南輝縣人，碩士，畜牧師，主要從事魚(yú)類(lèi)遺傳育種研究。E-mail：zhangqin.2007@163.com。古語(yǔ)有“洛鯉伊魴，貴于牛羊”的美稱(chēng)，這其中的“伊魴”，就是產(chǎn)于河南伊河的團(tuán)頭魴（簡(jiǎn)稱(chēng)伊河魴）。伊河魴歷史悠久，味道鮮美，是款待貴賓的佳肴。19世紀(jì)20年代以來(lái)，由于生態(tài)環(huán)境的惡化、水域的污染和過(guò)度捕撈等，使黃河流域生物多樣性遭到嚴(yán)重破壞，漁業(yè)資源不斷衰減。不僅如此，近十幾年來(lái)由于黃河連年斷流，給中下游乃至河口地區(qū)的漁業(yè)資源和生態(tài)環(huán)境造成災(zāi)難性的影響，一些名貴魚(yú)類(lèi)品種已難見(jiàn)蹤跡。河南省境內(nèi)黃河支流上的洛河鯉魚(yú)和伊河魴如今也已基本絕跡，對(duì)于這些珍稀品種的保護(hù)工作刻不容緩。本研究對(duì)伊河魴染色體進(jìn)行了研究，逐步開(kāi)展該種質(zhì)資源的鑒定工作。

1材料與方法

1.1材料

伊河魴取自河南省嵩縣陸渾水庫(kù)，共10尾，體長(zhǎng)26.4～56.5 cm，體重為256.6～2 381.6 g。試驗(yàn)用魚(yú)暫養(yǎng)在溫室中，水溫（25±1） ℃。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1染色體標(biāo)本的制備參照林義浩植物血細(xì)胞凝集素（PHA）體內(nèi)注射法[1]，并根據(jù)實(shí)際情況加以改進(jìn)。按照 2 μg/g 的劑量向試驗(yàn)魚(yú)注射秋水仙素，2.5 h后剖腹取腎臟。腎臟在0.75%生理鹽水中清洗2～3遍，充分剪碎，用紗布過(guò)濾除去血塊及其他組織，再加入適量生理鹽水，反復(fù)吹打，制成細(xì)胞懸液，1 000 r/min離心5 min，收集細(xì)胞；加入預(yù)熱的低滲液（0.037 5 mol/L KCl），37 ℃低滲25～30 min。在低滲后的細(xì)胞懸液中加入固定液（甲醇 ∶冰醋酸=3 ∶1）1 mL，1 000 r/min 離心8 min，棄上清；加固定液5 mL，吹打均勻后室溫固定30 min，離心，重復(fù)固定1次；最后一次離心保留約5倍細(xì)胞體積的上清液制成細(xì)胞懸液，取-20 ℃預(yù)冷載玻片傾斜45°滴片，每片1～2滴，迅速在酒精燈上烤干。10% Giemsa 液（pH值=6.8）染色20 min，蒸餾水沖洗，自然干燥后封片。

1.2.2核型分析選取100個(gè)分散良好的細(xì)胞，觀(guān)察統(tǒng)計(jì)，確定染色體2n數(shù)目。選取10個(gè)數(shù)目完整、長(zhǎng)度適中、著絲點(diǎn)清楚、2條單體適度分開(kāi)、形態(tài)清晰的分裂相進(jìn)行顯微攝影，對(duì)每條染色體確認(rèn)著絲點(diǎn)位置，分別測(cè)量長(zhǎng)臂和短臂。計(jì)算其相對(duì)長(zhǎng)度和臂比值，并按Levan提出的標(biāo)準(zhǔn)[2]進(jìn)行配對(duì)、分類(lèi)排列組型。

2結(jié)果與分析

2.1染色體數(shù)目

在顯微鏡下對(duì)伊河魴分散良好的100個(gè)染色體中期分裂相進(jìn)行計(jì)數(shù)，結(jié)果（圖1、表1）表明，染色體為48條時(shí)，分裂相最多，有82個(gè)，由此確定伊河魴的二倍體染色體數(shù)目是48條。

2.2染色體組型

伊河魴的腎細(xì)胞染色體組型見(jiàn)圖2。按照Levan命名法，依據(jù)伊河魴染色體臂比及相對(duì)長(zhǎng)度可以將其染色體分成4組，中部著絲粒染色體（m）10條，亞中部著絲粒染色體（sm）30條，亞端部著絲粒染色體（st）8條。每組按相對(duì)長(zhǎng)度和臂比進(jìn)行同源染色體配對(duì)，其中中部著絲粒染色體（m）共配成5對(duì)，亞中部著絲粒染色體（sm）共配成15對(duì)，亞端部著絲粒染色體（st）共配成4對(duì)。由此可知，伊河魴染色體核型公式為2n=10m+30sm+8st，染色體總臂數(shù)為88（表2）。

3結(jié)論與討論

染色體是魚(yú)類(lèi)遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)，對(duì)魚(yú)類(lèi)的遺傳、變異起重要作用。染色體核型研究能夠反映物種的分化與形成過(guò)程、親緣關(guān)系、演化途徑和進(jìn)化歷史，對(duì)于研究魚(yú)類(lèi)的遺傳、變異、分類(lèi)地位、系統(tǒng)演化、性別和雜交育種等都具有重要意義。因此，本研究分析了伊河魴的染色體核型，對(duì)其細(xì)胞遺傳學(xué)特征進(jìn)行深入了解，為該魚(yú)種質(zhì)檢測(cè)提供相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)，也為伊河魴的系統(tǒng)演化、進(jìn)化地位的確定提供基礎(chǔ)資料，同時(shí)也為伊河魴遺傳育種工作提供了科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]林義浩. 快速獲得大量魚(yú)類(lèi)腎細(xì)胞中期分裂相的PHA體內(nèi)注射法[J]. 水產(chǎn)學(xué)報(bào)，1982，6（3）：201-208.

[2]Levan A，F(xiàn)redga K，Sandberg A A. Nomenclatrue for centrometric position on chromosomes[J]. Hereditas，1964，52（2）：201-220.

[3]余來(lái)寧，柳凌. 淤泥湖團(tuán)頭魴染色體組型和二倍體細(xì)胞DNA含量分析[C]//主要淡水養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)種質(zhì)研究.北京：農(nóng)業(yè)出版社，1991：157-162.

[4]宗琴仙，柯鴻文，郝思平，等. 五種水體團(tuán)頭魴的染色體數(shù)目、組型以及電泳分析[J]. 水產(chǎn)科技情報(bào)，1987（3）：1-4.

[5]歐陽(yáng)敏.鄱陽(yáng)湖團(tuán)頭魴染色體組型研究[J]. 江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2000，12（2）：61-64.侯文杰，周文玉，潘桂平，等. 溶氧水平對(duì)日本對(duì)蝦耗氧能力與生理行為的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（2）：190-192.endprint

摘要：利用腹腔注射秋水仙素制備腎細(xì)胞染色體的方法，對(duì)伊河團(tuán)頭魴的染色體組型進(jìn)行研究。結(jié)果表明，其二倍體數(shù)目為2n=48，核型公式為2n=10m+30sm+8st，染色體總臂數(shù)為88。

關(guān)鍵詞：伊河團(tuán)頭魴；染色體；核型

中圖分類(lèi)號(hào)： S965.119.1；S917.4文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2014）02-0188-02

收稿日期：2013-05-29

基金項(xiàng)目：現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專(zhuān)項(xiàng)（編號(hào)：nycytx-49-34）；國(guó)家科技基礎(chǔ)條件平臺(tái)-水產(chǎn)種質(zhì)資源平臺(tái)項(xiàng)目；河南省重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目（編號(hào)：112102110054）。

作者簡(jiǎn)介：張芹（1980—），女，河南輝縣人，碩士，畜牧師，主要從事魚(yú)類(lèi)遺傳育種研究。E-mail：zhangqin.2007@163.com。古語(yǔ)有“洛鯉伊魴，貴于牛羊”的美稱(chēng)，這其中的“伊魴”，就是產(chǎn)于河南伊河的團(tuán)頭魴（簡(jiǎn)稱(chēng)伊河魴）。伊河魴歷史悠久，味道鮮美，是款待貴賓的佳肴。19世紀(jì)20年代以來(lái)，由于生態(tài)環(huán)境的惡化、水域的污染和過(guò)度捕撈等，使黃河流域生物多樣性遭到嚴(yán)重破壞，漁業(yè)資源不斷衰減。不僅如此，近十幾年來(lái)由于黃河連年斷流，給中下游乃至河口地區(qū)的漁業(yè)資源和生態(tài)環(huán)境造成災(zāi)難性的影響，一些名貴魚(yú)類(lèi)品種已難見(jiàn)蹤跡。河南省境內(nèi)黃河支流上的洛河鯉魚(yú)和伊河魴如今也已基本絕跡，對(duì)于這些珍稀品種的保護(hù)工作刻不容緩。本研究對(duì)伊河魴染色體進(jìn)行了研究，逐步開(kāi)展該種質(zhì)資源的鑒定工作。

1材料與方法

1.1材料

伊河魴取自河南省嵩縣陸渾水庫(kù)，共10尾，體長(zhǎng)26.4～56.5 cm，體重為256.6～2 381.6 g。試驗(yàn)用魚(yú)暫養(yǎng)在溫室中，水溫（25±1） ℃。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1染色體標(biāo)本的制備參照林義浩植物血細(xì)胞凝集素（PHA）體內(nèi)注射法[1]，并根據(jù)實(shí)際情況加以改進(jìn)。按照 2 μg/g 的劑量向試驗(yàn)魚(yú)注射秋水仙素，2.5 h后剖腹取腎臟。腎臟在0.75%生理鹽水中清洗2～3遍，充分剪碎，用紗布過(guò)濾除去血塊及其他組織，再加入適量生理鹽水，反復(fù)吹打，制成細(xì)胞懸液，1 000 r/min離心5 min，收集細(xì)胞；加入預(yù)熱的低滲液（0.037 5 mol/L KCl），37 ℃低滲25～30 min。在低滲后的細(xì)胞懸液中加入固定液（甲醇 ∶冰醋酸=3 ∶1）1 mL，1 000 r/min 離心8 min，棄上清；加固定液5 mL，吹打均勻后室溫固定30 min，離心，重復(fù)固定1次；最后一次離心保留約5倍細(xì)胞體積的上清液制成細(xì)胞懸液，取-20 ℃預(yù)冷載玻片傾斜45°滴片，每片1～2滴，迅速在酒精燈上烤干。10% Giemsa 液（pH值=6.8）染色20 min，蒸餾水沖洗，自然干燥后封片。

1.2.2核型分析選取100個(gè)分散良好的細(xì)胞，觀(guān)察統(tǒng)計(jì)，確定染色體2n數(shù)目。選取10個(gè)數(shù)目完整、長(zhǎng)度適中、著絲點(diǎn)清楚、2條單體適度分開(kāi)、形態(tài)清晰的分裂相進(jìn)行顯微攝影，對(duì)每條染色體確認(rèn)著絲點(diǎn)位置，分別測(cè)量長(zhǎng)臂和短臂。計(jì)算其相對(duì)長(zhǎng)度和臂比值，并按Levan提出的標(biāo)準(zhǔn)[2]進(jìn)行配對(duì)、分類(lèi)排列組型。

2結(jié)果與分析

2.1染色體數(shù)目

在顯微鏡下對(duì)伊河魴分散良好的100個(gè)染色體中期分裂相進(jìn)行計(jì)數(shù)，結(jié)果（圖1、表1）表明，染色體為48條時(shí)，分裂相最多，有82個(gè)，由此確定伊河魴的二倍體染色體數(shù)目是48條。

2.2染色體組型

伊河魴的腎細(xì)胞染色體組型見(jiàn)圖2。按照Levan命名法，依據(jù)伊河魴染色體臂比及相對(duì)長(zhǎng)度可以將其染色體分成4組，中部著絲粒染色體（m）10條，亞中部著絲粒染色體（sm）30條，亞端部著絲粒染色體（st）8條。每組按相對(duì)長(zhǎng)度和臂比進(jìn)行同源染色體配對(duì)，其中中部著絲粒染色體（m）共配成5對(duì)，亞中部著絲粒染色體（sm）共配成15對(duì)，亞端部著絲粒染色體（st）共配成4對(duì)。由此可知，伊河魴染色體核型公式為2n=10m+30sm+8st，染色體總臂數(shù)為88（表2）。

3結(jié)論與討論

染色體是魚(yú)類(lèi)遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)，對(duì)魚(yú)類(lèi)的遺傳、變異起重要作用。染色體核型研究能夠反映物種的分化與形成過(guò)程、親緣關(guān)系、演化途徑和進(jìn)化歷史，對(duì)于研究魚(yú)類(lèi)的遺傳、變異、分類(lèi)地位、系統(tǒng)演化、性別和雜交育種等都具有重要意義。因此，本研究分析了伊河魴的染色體核型，對(duì)其細(xì)胞遺傳學(xué)特征進(jìn)行深入了解，為該魚(yú)種質(zhì)檢測(cè)提供相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)，也為伊河魴的系統(tǒng)演化、進(jìn)化地位的確定提供基礎(chǔ)資料，同時(shí)也為伊河魴遺傳育種工作提供了科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]林義浩. 快速獲得大量魚(yú)類(lèi)腎細(xì)胞中期分裂相的PHA體內(nèi)注射法[J]. 水產(chǎn)學(xué)報(bào)，1982，6（3）：201-208.

[2]Levan A，F(xiàn)redga K，Sandberg A A. Nomenclatrue for centrometric position on chromosomes[J]. Hereditas，1964，52（2）：201-220.

[3]余來(lái)寧，柳凌. 淤泥湖團(tuán)頭魴染色體組型和二倍體細(xì)胞DNA含量分析[C]//主要淡水養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)種質(zhì)研究.北京：農(nóng)業(yè)出版社，1991：157-162.

[4]宗琴仙，柯鴻文，郝思平，等. 五種水體團(tuán)頭魴的染色體數(shù)目、組型以及電泳分析[J]. 水產(chǎn)科技情報(bào)，1987（3）：1-4.

[5]歐陽(yáng)敏.鄱陽(yáng)湖團(tuán)頭魴染色體組型研究[J]. 江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2000，12（2）：61-64.侯文杰，周文玉，潘桂平，等. 溶氧水平對(duì)日本對(duì)蝦耗氧能力與生理行為的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（2）：190-192.endprint

摘要：利用腹腔注射秋水仙素制備腎細(xì)胞染色體的方法，對(duì)伊河團(tuán)頭魴的染色體組型進(jìn)行研究。結(jié)果表明，其二倍體數(shù)目為2n=48，核型公式為2n=10m+30sm+8st，染色體總臂數(shù)為88。

關(guān)鍵詞：伊河團(tuán)頭魴；染色體；核型

中圖分類(lèi)號(hào)： S965.119.1；S917.4文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2014）02-0188-02

收稿日期：2013-05-29

基金項(xiàng)目：現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專(zhuān)項(xiàng)（編號(hào)：nycytx-49-34）；國(guó)家科技基礎(chǔ)條件平臺(tái)-水產(chǎn)種質(zhì)資源平臺(tái)項(xiàng)目；河南省重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目（編號(hào)：112102110054）。

作者簡(jiǎn)介：張芹（1980—），女，河南輝縣人，碩士，畜牧師，主要從事魚(yú)類(lèi)遺傳育種研究。E-mail：zhangqin.2007@163.com。古語(yǔ)有“洛鯉伊魴，貴于牛羊”的美稱(chēng)，這其中的“伊魴”，就是產(chǎn)于河南伊河的團(tuán)頭魴（簡(jiǎn)稱(chēng)伊河魴）。伊河魴歷史悠久，味道鮮美，是款待貴賓的佳肴。19世紀(jì)20年代以來(lái)，由于生態(tài)環(huán)境的惡化、水域的污染和過(guò)度捕撈等，使黃河流域生物多樣性遭到嚴(yán)重破壞，漁業(yè)資源不斷衰減。不僅如此，近十幾年來(lái)由于黃河連年斷流，給中下游乃至河口地區(qū)的漁業(yè)資源和生態(tài)環(huán)境造成災(zāi)難性的影響，一些名貴魚(yú)類(lèi)品種已難見(jiàn)蹤跡。河南省境內(nèi)黃河支流上的洛河鯉魚(yú)和伊河魴如今也已基本絕跡，對(duì)于這些珍稀品種的保護(hù)工作刻不容緩。本研究對(duì)伊河魴染色體進(jìn)行了研究，逐步開(kāi)展該種質(zhì)資源的鑒定工作。

1材料與方法

1.1材料

伊河魴取自河南省嵩縣陸渾水庫(kù)，共10尾，體長(zhǎng)26.4～56.5 cm，體重為256.6～2 381.6 g。試驗(yàn)用魚(yú)暫養(yǎng)在溫室中，水溫（25±1） ℃。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1染色體標(biāo)本的制備參照林義浩植物血細(xì)胞凝集素（PHA）體內(nèi)注射法[1]，并根據(jù)實(shí)際情況加以改進(jìn)。按照 2 μg/g 的劑量向試驗(yàn)魚(yú)注射秋水仙素，2.5 h后剖腹取腎臟。腎臟在0.75%生理鹽水中清洗2～3遍，充分剪碎，用紗布過(guò)濾除去血塊及其他組織，再加入適量生理鹽水，反復(fù)吹打，制成細(xì)胞懸液，1 000 r/min離心5 min，收集細(xì)胞；加入預(yù)熱的低滲液（0.037 5 mol/L KCl），37 ℃低滲25～30 min。在低滲后的細(xì)胞懸液中加入固定液（甲醇 ∶冰醋酸=3 ∶1）1 mL，1 000 r/min 離心8 min，棄上清；加固定液5 mL，吹打均勻后室溫固定30 min，離心，重復(fù)固定1次；最后一次離心保留約5倍細(xì)胞體積的上清液制成細(xì)胞懸液，取-20 ℃預(yù)冷載玻片傾斜45°滴片，每片1～2滴，迅速在酒精燈上烤干。10% Giemsa 液（pH值=6.8）染色20 min，蒸餾水沖洗，自然干燥后封片。

1.2.2核型分析選取100個(gè)分散良好的細(xì)胞，觀(guān)察統(tǒng)計(jì)，確定染色體2n數(shù)目。選取10個(gè)數(shù)目完整、長(zhǎng)度適中、著絲點(diǎn)清楚、2條單體適度分開(kāi)、形態(tài)清晰的分裂相進(jìn)行顯微攝影，對(duì)每條染色體確認(rèn)著絲點(diǎn)位置，分別測(cè)量長(zhǎng)臂和短臂。計(jì)算其相對(duì)長(zhǎng)度和臂比值，并按Levan提出的標(biāo)準(zhǔn)[2]進(jìn)行配對(duì)、分類(lèi)排列組型。

2結(jié)果與分析

2.1染色體數(shù)目

在顯微鏡下對(duì)伊河魴分散良好的100個(gè)染色體中期分裂相進(jìn)行計(jì)數(shù)，結(jié)果（圖1、表1）表明，染色體為48條時(shí)，分裂相最多，有82個(gè)，由此確定伊河魴的二倍體染色體數(shù)目是48條。

2.2染色體組型

伊河魴的腎細(xì)胞染色體組型見(jiàn)圖2。按照Levan命名法，依據(jù)伊河魴染色體臂比及相對(duì)長(zhǎng)度可以將其染色體分成4組，中部著絲粒染色體（m）10條，亞中部著絲粒染色體（sm）30條，亞端部著絲粒染色體（st）8條。每組按相對(duì)長(zhǎng)度和臂比進(jìn)行同源染色體配對(duì)，其中中部著絲粒染色體（m）共配成5對(duì)，亞中部著絲粒染色體（sm）共配成15對(duì)，亞端部著絲粒染色體（st）共配成4對(duì)。由此可知，伊河魴染色體核型公式為2n=10m+30sm+8st，染色體總臂數(shù)為88（表2）。

3結(jié)論與討論

染色體是魚(yú)類(lèi)遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)，對(duì)魚(yú)類(lèi)的遺傳、變異起重要作用。染色體核型研究能夠反映物種的分化與形成過(guò)程、親緣關(guān)系、演化途徑和進(jìn)化歷史，對(duì)于研究魚(yú)類(lèi)的遺傳、變異、分類(lèi)地位、系統(tǒng)演化、性別和雜交育種等都具有重要意義。因此，本研究分析了伊河魴的染色體核型，對(duì)其細(xì)胞遺傳學(xué)特征進(jìn)行深入了解，為該魚(yú)種質(zhì)檢測(cè)提供相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)，也為伊河魴的系統(tǒng)演化、進(jìn)化地位的確定提供基礎(chǔ)資料，同時(shí)也為伊河魴遺傳育種工作提供了科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]林義浩. 快速獲得大量魚(yú)類(lèi)腎細(xì)胞中期分裂相的PHA體內(nèi)注射法[J]. 水產(chǎn)學(xué)報(bào)，1982，6（3）：201-208.

[2]Levan A，F(xiàn)redga K，Sandberg A A. Nomenclatrue for centrometric position on chromosomes[J]. Hereditas，1964，52（2）：201-220.

[3]余來(lái)寧，柳凌. 淤泥湖團(tuán)頭魴染色體組型和二倍體細(xì)胞DNA含量分析[C]//主要淡水養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)種質(zhì)研究.北京：農(nóng)業(yè)出版社，1991：157-162.

[4]宗琴仙，柯鴻文，郝思平，等. 五種水體團(tuán)頭魴的染色體數(shù)目、組型以及電泳分析[J]. 水產(chǎn)科技情報(bào)，1987（3）：1-4.

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