馮文婕，闕斐

（浙江經(jīng)貿(mào)職業(yè)技術(shù)學院，浙江杭州310018）

雪蓮果醇提物抗氧化性能測定

馮文婕，闕斐

（浙江經(jīng)貿(mào)職業(yè)技術(shù)學院，浙江杭州310018）

以云南雪蓮果為原料，采用醇提法提取有效成分，用鄰二氮菲-Fe2+法測定雪蓮果醇提物清除·OH（羥自由基）的能力。研究了乙醇質(zhì)量分數(shù)、提取溫度、提取時間、料液比對醇提物抗氧化性能的影響，確定了最佳提取條件為：乙醇質(zhì)量分數(shù)為40%、提取溫度80℃、提取時間2.5 h、料液比1∶20（g∶mL），雪蓮果醇提物對·OH的清除率為81.6%。

雪蓮果；乙醇；提?。豢寡趸?/p>

雪蓮果（Smallanthus sonchifolius），屬于菊科向日葵屬雙子葉多年生草本植物，原產(chǎn)于南美洲，目前已在我國云南、福建、海南等九個省引種栽培成功。雪蓮果富含酚酸（主要是綠原酸、咖啡酸和阿魏酸）、類黃酮、低聚果糖等功能性成分，以及人體所需鉀、鈣、鋅、鐵等微量元素，是典型的藥用型水果[1-3]，已證明具有良好地護肝、降血脂、抗氧化、防治便秘和調(diào)節(jié)腸道菌群等作用[4-6]。其塊莖中含有的多種酚酸物質(zhì)是陸生植物中最典型的抗氧化活性成分，對過氧化物和自由基有一定的清除能力，緩解肝細胞氧化損傷，能有效防動脈硬化等慢性疾病，及保護人體的肝臟[7-9]。

雪蓮果因其特殊的功能特性和良好的藥用價值將越來越被廣泛的重視，但由于雪蓮果水分含量大，在空氣中易腐爛，保存期短，使用受限制，目前雪蓮果以鮮食為主，利用率較低，導致雪蓮果的開發(fā)利用仍處于初級階段。本研究用乙醇為提取劑，從雪蓮果中提取出抗氧化活性物質(zhì)，并測定其清除·OH的能力，其結(jié)果對于雪蓮果的開發(fā)利用以及尋找高效的抗氧化劑研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

雪蓮果，云南產(chǎn)。乙醇（分析純）：長青化工有限公司；過氧化氫（分析純）：南京探求生物技術(shù)有限公司；鄰二氮菲（分析純）：青島正業(yè)試劑儀器有限公司。UV-2000紫外可見分光光度計：尤尼柯儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 雪蓮果有效成分的提取

雪蓮果洗凈去皮，切碎為大小均勻的顆粒，準確稱取10 g的雪蓮果顆粒于圓底燒瓶中，加入一定量的乙醇溶液，在一定溫度下進行提取一定的時間。

1.2.2 雪蓮果提取物抗氧化性測定

先取5mL pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液（0.2mmol/L）于10mL具塞試管中，然后依次加入0.75mmol/L鄰二氮菲溶液1mL、0.75mmol/LFeSO4溶液1mL、雪蓮果乙醇提取液2mL和3%H2O2溶液1mL，每加一次試劑均需振蕩搖勻，在37℃反應(yīng)60min后，于536 nm[10]處測定其吸光度值，同時做空白實驗，并計算·OH（羥自由基）的清除率。

式中：A0為不含樣品，只含H2O2時的吸光度值；A1為不含樣品，以蒸餾水代替H2O2時的吸光度值；A2為含樣品的吸光度值。

2 結(jié)果與分析

2.1 乙醇質(zhì)量分數(shù)對雪蓮果醇提物抗氧化性能的影響

適宜的乙醇質(zhì)量分數(shù)有利于原料中抗氧化活性成分的溶出，可大大縮短提取時間，增加提取效率。均勻稱取4份雪蓮果顆粒，分別加入180mL質(zhì)量分數(shù)為20%、30%、40%、50%的乙醇溶液，在80℃下提取2.5 h后，抽濾備用。H2O2/Fe2+體系通過Fenton反應(yīng)會產(chǎn)生具有高反應(yīng)活性的·OH，而鄰二氮菲-Fe2+會被·OH氧化為鄰二氮菲-Fe3+，這時在536 nm的最大吸收峰將消失，而當體系加入能清除·OH的抗氧化成分后，氧化過程會受到抑制，536 nm處會出現(xiàn)明顯的吸收峰。根據(jù)此原理，用鄰二氮菲-Fe2+法（方法1.2.2）測定雪蓮果提取物清除·OH的能力。

圖1 乙醇質(zhì)量分數(shù)對醇提物抗氧化性能的影響Fig.1 Effectof the concentration of ethanolon antioxidantactivity of yacon alcoholextraction

由圖1結(jié)果可知，在乙醇質(zhì)量分數(shù)在20%~40%之間時，雪蓮果醇提物抗氧化性能隨乙醇質(zhì)量分數(shù)的增加而增加，并在40%時對·OH的清除率達80%以上，之后再增加乙醇質(zhì)量分數(shù)的其清除率變化不大。根據(jù)相似相容原理，可能是由于乙醇質(zhì)量分數(shù)增大，使醇溶性物質(zhì)競爭溶解，導致了抗氧化成分的溶解度不再增加或略有下降。因此，選擇提取工藝中乙醇質(zhì)量分數(shù)為40%為宜。

2.2 提取溫度對雪蓮果醇提物抗氧化性能的影響

均勻稱取4份雪蓮果顆于圓底燒瓶中，加入180mL質(zhì)量分數(shù)為40%的乙醇溶液，分別在20、40、60、80℃下提取2.5 h，抽濾后，用鄰二氮菲-Fe2+法（方法1.2.2）測定雪蓮果提取物清除·OH的能力，結(jié)果如圖2所示。

圖2 提取溫度對醇提物抗氧化性能的影響Fig.2 Effectof extraction tem peratureon antioxidantactivity of yacon alcoholextraction

較低的溫度（室溫）不利于抗氧化成分的浸出，而當溫度不斷升高時，較高的溫度能不斷促進分子的熱運動，使溶質(zhì)和溶劑分子間的傳遞速率加快，有利于抗氧化成分的溶解提取，其清除·OH能維持在一個較高的水平（清除率＞60%）。但過高的溫度反而會造成抗氧化成分分解，導致提取量降低而影響其清除·OH的能力。因此，提取溫度控制在80℃為宜。

2.3 提取時間對雪蓮果醇提物抗氧化性能的影響

均勻稱取4份雪蓮果顆于圓底燒瓶中，加入180mL質(zhì)量分數(shù)為40%的乙醇溶液，分別在80℃下提取1、1.5、2、2.5、3 h，抽濾后，用鄰二氮菲-Fe2+法（方法1.2.2）測定雪蓮果提取物清除·OH的能力，選擇適宜的提取時間。

圖3 提取時間對醇提物抗氧化性能的影響Fig.3 Effectof extraction timeon antioxidantactivity of yacon alcoholextraction

從圖3中可以看出，隨著提取時間的增加，醇提物對·OH的清除率先升高后降低，當提取時間為2.5 h時，清除率最大約80%。這是因為提取時間短時，抗氧化成分還未完全溶解出來，此時·OH的清除率也相應(yīng)較低，隨著提取時間的延長，抗氧化成分逐步被提取出來，清除率也隨著升高；但提取時間過長時（≥3 h），其他雜質(zhì)組分也被溶劑溶解出來，反而影響提取效果，故確定提取時間為2.5 h。

2.4 料液比對綠原酸提取效果的影響

分別在不同總料液比（g∶mL）1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、1∶25條件下，用40%乙醇溶液，于80℃提取2.5 h，抽濾后，用鄰二氮菲-Fe2+法（方法1.2.2）測定，確定不同料液比與雪蓮果醇提物清除·OH的能力的關(guān)系。

結(jié)果如圖4所示，料液比較小時，抗氧化成分提取不充分，隨著乙醇用量的不斷增加，抗氧化有效成分的提取量也相應(yīng)的增加，對·OH的能力也相應(yīng)增加，當料液比為1∶20（g∶mL）時，提取效果最好，再增加乙醇溶液的用量，對·OH的清除率變化不明顯，適宜的乙醇質(zhì)量分數(shù)就能將抗氧化活性成分溶解出來，再加大乙醇溶液的用量意義不大。因此，選擇料液比為1∶20（g/mL）。

圖4 料液比對醇提物抗氧化性能的影響Fig.4 Effectof the ratio ofmaterial to solventon antioxidant activity of yacon alcoholextraction

3 結(jié)論

本文以乙醇為提取劑，對雪蓮果中的抗氧化活性成分進行提取，并測定其清除·OH的能力。通過實驗確定了最佳提取工藝參數(shù)：乙醇質(zhì)量分數(shù)為40%，提取溫度80℃，提取時間2.5 h，料液比1∶20（g∶mL），在此最優(yōu)條件下雪蓮果醇提物對·OH的清除率為81.6%。雪蓮果具有明顯的抗氧化活性，表明它具有良好的開發(fā)利用前景。

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Determ ination of Antioxidant Activity of Yacon（Smallanthus sonchifolius）Alcohol Extraction

FENGWen-jie，QUEFei
（Zhejiang Economic&Trade Polytechnic，Hangzhou 310018，Zhejiang，China）

In thisstudy，yaconwereused as rawmaterial toextractactive ingredientswith alcohol.Themethod of phenanthroline-Fe2+reaction system was used tomeasure the scavenging ability of·OH free radical.The best level of the factors including ethanol concentration，extraction temperature，extraction time and the ratio of weightof the Yacon to volume ofsolventwere affected on antioxidantactivity.The optimalextraction conditions were as follows：40%ethanolasextraction solvent，extraction time 2.5 h，temperature 80℃，ratio ofmaterial to solvent 1∶20（g∶mL）.Under these conditions，the scavenging ability of·OH free radical of Yacon alcohol extractionwasup to81.6%.

smallanthussonchifolius；ethanol；extraction；antioxidantactivity

2013-07-15

10.3969/j.issn.1005-6521.2014.23.011

馮文婕（1983—），女（漢），講師，碩士研究生，主要從事天然產(chǎn)物的提取與分離。